狗牙花总生物碱的镇痛作用和精神依赖性的实验研究

栗志远，王新红，周 铎，张晓冬



·基础医学·

·论著·

狗牙花总生物碱的镇痛作用和精神依赖性的实验研究

栗志远，王新红，周 铎，张晓冬

目的 观察狗牙花总生物碱(Ervatamiayunnansis)的镇痛作用和精神依赖性。方法 选择昆明种雌性小鼠72只，其中小鼠热板法实验32只，条件性位置偏爱试验40只，按数字表法随机分为生理盐水对照组、吗啡组、狗牙花总生物碱低剂量组(5 mg/kg)及高剂量组(20 mg/kg)组。分别采用小鼠热板法和条件性位置偏爱试验观察狗牙花总生物碱镇痛作用和精神依赖性。结果 腹腔注射5、20 mg/kg狗牙花总生物碱后小鼠热板反应潜伏期显著延长(P<0.05或<0.01)；狗牙花总生物碱5、20 mg/kg连续给药7 d后，小鼠在伴药侧逗留时间均无明显延长，没有形成条件性位置偏爱。结论 狗牙花总生物碱具有镇痛作用且无精神依赖性。

狗牙花总生物碱；镇痛；精神依赖性；吗啡

从非洲中西部的夹竹桃科植物伊波加(Tabernantheiboga)中提取分离的吲哚生物碱伊波加(Ibogaine)，具有多种神经精神药理作用[1-2]，如可减少啮齿类动物对精神兴奋剂的自身给药；可部分抑制吗啡依赖小鼠、大鼠和猴的戒断症状；能阻断阿片类戒断综合征的各种生理和精神症状，还能缓解其他成瘾物质如可卡因、苯丙胺类、烟碱和酒精戒断所引起的多种症状等。

我国没有伊波加同属植物，而有夹竹桃科狗牙花属植物，其在民间用于高血压病、 咽喉肿痛、风湿痹痛或蛇咬伤等疾病的治疗[3]。我国学者在夹竹桃科狗牙花属植物中提取分离出许多与Ibogaine结构相似的吲哚类生物碱，实验发现该类吲哚类生物碱单体或总碱具有较好的生物活性，尤其是云南狗牙花总生物碱具有较好的戒毒活性[4-8]。本研究采用热板法观察狗牙花总生物碱对小鼠的镇痛作用，并采用条件性位置偏爱试验评估其对小鼠的精神依赖性。

1 材料与方法

1.1 材料 (1)药物： 狗牙花总生物碱(第二军医大学天然药物化学教研室提供)，临用时生理盐水溶解； 盐酸吗啡(青海制药厂，批号010220)，临用时pH 3.5～4.0的生理盐水配制。(2 )动物： 昆明种小鼠，18～22 g，清洁级，实验动物质量合格证号：SCXK(沪)2002-0002，由复旦大学医学院实验动物部提供。动物预先适应性饲养l周，自由摄食、饮水。

1.2 方法 (1)小鼠热板法实验[9]：用热板仪测定小鼠痛阈，热板温度控制在(55.0±0.5) ℃，记录小鼠足底接触热板至出现舔后足的时间，即热板反应潜伏期，作为痛阈评价指标。实验时先剔除反应潜伏期(基础痛阈)>30 s或<5 s的小鼠，室温维持在23～25 ℃。昆明种雌性小鼠，按照数字表法随机分为4组，即生理盐水对照组、吗啡组(5 mg/kg)及狗牙花总生物碱低(5 mg/kg)、高(20 mg/kg)2个剂量组，每组8只。给药前和给药后30 min测定热板反应潜伏期。(2 )小鼠条件性位置偏爱试验[10]：昆明种小鼠，雌雄各半，按数字表法随机分为生理盐水对照组、吗啡组(5 mg/kg)及狗牙花总生物碱低(5 mg/kg)、高(20 mg/kg)2个剂量组，每组10只小鼠。每组给药2次/d，给药间隔8 h。观察记录小鼠在黑白箱的停留时间。训练前：实验前1 d抽离中间隔板，将小鼠置于中间通道处，记录15 min内小鼠在黑白箱的停留时间。训练：中间隔板隔离黑、白箱。每天训练2次，每次训练40 min。小鼠注射吗啡或狗牙花总生物碱后即刻放入白箱，对照组小鼠注射生理盐水后放入黑箱，共训练7 d 。测试：第8天打开中间隔板，动物放于中间通道处，记录15 min内小鼠在黑白箱的停留时间。整个试验过程中保证箱内光线、色调、气味等环境条件一致。

1.3 统计学处理 应用SPSS 19.0统计软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用t检验；计数资料组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠热板反应实验 狗牙花总生物碱对小鼠痛阈的影响结果见表1。结果显示，狗牙花总生物碱可显著延长小鼠热板反应潜伏期，并呈量效关系，即随剂量增加镇痛作用加强。腹腔注射5mg/kg或20mg/kg狗牙花总生物碱30min后可使小鼠痛阈显著提高，差异有统计学意义(P<0.05或<0.01)。

表1 4组小鼠热板反应潜伏期的变化比较(x±s)

组别动物数剂量(mg/kg)热板反应潜伏期(s)给药前给药后对照组 8-12.1±2.312.4±3.3吗啡组 8512.7±2.042.1±16.7ac低剂量组8512.8±1.519.8±7.2bd高剂量组82012.3±1.732.1±7.8ac

注：与对照组比较aP<0.01，bP<0.05；与给药前比较cP<0.01，dP<0.05

2.2 小鼠条件性位置偏爱试验 吗啡组小鼠给药后，表现为竖尾、异常兴奋反应；对照组给药后，小鼠表现安静，出现觅食等行为；狗牙花总生物碱低、高剂量组小鼠给药后，小鼠无竖尾、兴奋表现，未见明显异常，能够正常觅食。训练7 d后测试，吗啡组小鼠在伴药箱逗留时间显著高于给药前和生理盐水对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，表明小鼠对吗啡形成了明显的条件性位置偏爱效应。而狗牙花总生物碱低、高剂量组小鼠在伴药箱停留时间与给药前和对照组比较均无统计学意义(P>0.05)，提示小鼠对狗牙花总生物碱没有产生条件性位置偏爱效应，表明在该实验剂量下对小鼠未产生精神依赖性。见表2。

表2 4组小鼠在伴药箱逗留时间的变化比较(x±s)

注：与其他3组给药后比较aP<0.05；与给药前比较bP<0.05

3 讨论

由于阿片类药物的成瘾在许多方面与其镇痛机制密切相关。周身肌肉关节疼痛是海洛因成瘾脱毒后的主要稽延性症状之一，也是促使吸毒者复吸的重要原因之一[5]。因此，非成瘾性镇痛药在减少瘾性复发的治疗中具有相当重要的意义。

有文献[1-2]报道Ibogaine具有镇痛活性，且可增强吗啡的镇痛作用，其结构类似物亦可增强吗啡对大鼠和小鼠的镇痛作用，可能与μ受体和κ受体具有相当高的亲合力有关，而狗牙花在我国民间就用于风湿骨痛、跌打损伤或蛇咬伤[3]。本实验结果也表明狗牙花总生物碱具有明显的镇痛作用，且呈剂量依赖关系，故狗牙花总生物碱的镇痛作用亦可能部分通过阿片系统来实现的。狗牙花总生物碱的镇痛作用，对于减轻吸毒患者脱毒后的稽延性症状将会有积极的辅助治疗作用。

Ibogaine及其结构类似物可抑制大鼠静脉可卡因、吗啡等的自身给药，可预防吗啡和苯丙胺诱导的大鼠位置偏爱的形成，而且本身无身体依赖性和精神依赖性，其抗精神依赖作用的神经化学基础不仅与阿片受体有关，还涉及其他的神经传导通路[1-2]。

研究精神依赖性方法主要有大鼠或猴自身给药实验、药物辨别实验和小鼠或大鼠条件性位置偏爱实验[6]。自身给药方法由于其需作颈静脉插管，实验维护有一定难度，且受剂量单位和时间作用过程等多参数的影响，使其很难对滥用倾向提供更多的估计。药物辨别实验需对动物进行了严格的辨别训练，实验周期长，不利于药物筛选。位置偏爱实验方法由于实验周期短，简便易行，可广泛应用于精神依赖性的预测和评价。

本实验选择小鼠条件性位置偏爱试验来评估狗牙花总生物碱的精神依赖性潜力。本研究结果显示，吗啡组小鼠在伴药侧逗留时间显著高于给药前和对照组，表明小鼠对吗啡形成了明显的条件性位置偏爱效应，即表示模型建立成功。而给予狗牙花总生物碱5.0 mg/kg和20.0 mg/kg，小鼠在伴药侧停留时间与给药前和对照组比较差异均无统计学意义，提示小鼠对狗牙花总生物碱没有产生条件性位置偏爱效应，表明在该实验剂量下对小鼠未产生精神依赖性。与文献报道的Ibogaine及其结构类似物无精神依赖性的结论一致。

因此，狗牙花总生物碱不仅具有抗吗啡精神依赖的药理活性和镇痛作用，而且本身无精神依赖性，为进一步研究提供了动物学实验依据。

[1] Brown TK.Ibogainein the treatment of substance dependence[J]. Curr Drug Abuse Rev, 2013, 6(1): 3-16. DOI:10.2174/15672050113109990001.

[2] Popik P, Layer RT. 100 years ofibogaine: neurochemical and pharmacological actions of a putative anti-addictive drug[J]. Pharmacol Rev, 1995, 47(2): 235-253.

[3] 国家中医药管理局中华本草编委会. 中华本草[M]. 上海：上海科学技术出版社, 1999: 5604.

[4] 黄矛，周丽华，张晓冬，等. 狗牙花总碱防治吗啡依赖的药理作用[J]. 中国药物依赖性杂志, 2001, 10(1): 8-10. DOI:10.3969/j.issn.1007-9718.2001.01.005.

[5] 傅秋生，鲍燕燕，衣淑珍，等. 云南狗牙花总碱对吗啡依赖小鼠位置偏爱再现的阻断作用[J]. 解放军药学学报, 2004, 20(5): 352-355. DOI:10.3969/j.issn.1008-9926.2004.05.013.

[6] Tang BQ, Wang WJ, Huang XJ, et al.Iboga-Type Alkaloids fromErvatamiaofficinalis[J]. J Nat Prod, 2014, 77(8): 1839-1846. DOI:10.1021/np500240b.

[7] Koenig X, Hilber K. The anti-addiction drugibogaineand the heart: a delicate relation[J]. Molecules, 2015, 20(2): 2208-2228. DOI:10.3390/molecules20022208.

[8] Geng CA, Liu XK. Five new indole alkaloids from the leaves ofRauvolfiayunnanensis[J]. Fitoterapia, 2013, 89: 42-47. DOI:10.1016/j.fitote.2013.05.017.

[9] 李芸达，黄涛，颜祖弟，等. 石韦不同提取物的抗炎镇痛作用考察[J]. 中国药师, 2014, 17(10): 1642-1644. DOI:10.3969/j.issn.1008-049X.2014.10.011.

[10] 曾晓会，陈玉兴，黄雪君，等. 复方戒毒片对吗啡成瘾动物模型的影响[J]. 广东药学院学报, 2014, 30(3): 346-349. DOI:10.3969/j.issn.1006-8783.2014.03.020.

(本文编辑：王映红)

Experimental study on the effects of total Ervatamia yunnansis alkaloid on analgesia and psychological dependence

Li Zhiyuan, Wang Xinhong, Zhou Duo, Zhang Xiaodong

(No.22 Hospital, CPLA, Golmud 816099, China)

Objective To observe the effects of totalErvatamiayunnansisalkaloid on analgesia and psychological dependence in mice.Methods The hot plate test and conditional place preference test were used to valuate analgesic effect and the psychological dependence of totalErvatamiayunnansisalkaloid in mice.Results Following abdominal injection of totalErvatamiayunnansisalkaloid at dosages of 5 mg/kg and 20 mg/kg, latency of hot plate reaction of the mice was significantly prolonged(P<0.05 or <0.01). But, after medication ofErvatamiayunnansisat dosages of 5 and 20 mg/kg for 7 days, the time of staying in the drug-pair compartment wasn′t significantly extended and place preference wasn′t developed in mice.Conclusion TotalErvatamiayunnansisalkaloid seemed to have good analgesic effects and no psychological dependence was observed.

Totalervatamiayunnansisalkaloid; Analgesia; Psychological dependence; Morphine

国家自然科学基金资助项目(81171260)；青海省科技厅应用基础研究项目(2014-ZJ-753)

816099 青海 格尔木，解放军第二十二医院(栗志远、王新红、周铎)；第二军医大学新药评价中心(张晓冬)

R965；R285

A [DOI] 10.3969/j.issn.1009-0754.2016.05.011

2016-03-02)