石榴籽油对去卵巢大鼠骨质代谢的影响

许文胜 张 涛 康文磊 陈永军 杨增华

(包头医学院第一附属医院骨三科，内蒙古 包头 014010)



石榴籽油对去卵巢大鼠骨质代谢的影响

许文胜 张 涛 康文磊 陈永军 杨增华

(包头医学院第一附属医院骨三科，内蒙古 包头 014010)

目的 探讨石榴籽油对去卵巢大鼠骨质代谢的影响。方法 50只3月龄SPF级雌性SD大鼠随机分为假手术组、去卵巢组、己烯雌酚组、低石榴籽油组和高石榴籽油组，每组10只。假手术组保留卵巢，其余组则将双侧卵巢去除，已烯雌酚组每天用100 μg/kg己烯雌酚灌胃，低石榴籽油组和高石榴籽油组每天分别给予石榴籽油0.95 g/kg和1.27 g/kg剂量灌胃。对大鼠血清钙(Ca)、磷(P)含量以及碱性磷酸酶活性(ALP)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平进行检测，并对下颌骨、股骨中段和远心端骨密度进行检测。结果 与去卵巢组相比，己烯雌酚组、低石榴籽油组和高石榴籽油组大鼠血清Ca、P含量及ALP活性均降低，低石榴籽油组和高石榴籽油组大鼠血清SOD水平升高，而MDA水平降低(P<0.05)；与己烯雌酚组相比，低石榴籽油组大鼠血清Ca、P和SOD含量升高，而MDA含量降低，高石榴籽油组大鼠血清SOD含量升高，而MDA降低(P<0.05)；与去卵巢组相比，己烯雌酚组、低石榴籽油组和高石榴籽油组大鼠下颌骨、股骨中点和股骨远端骨密度均升高(P<0.05)。结论 补充石榴籽油可有效降低去卵巢大鼠骨质转化活性，抑制骨密度降低，而这种作用可能与石榴籽油雌激素作用及抗氧化作用有关。

石榴籽油；去卵巢；骨质代谢

绝经后骨质疏松(PMOP)是好发于绝经后妇女的常见代谢性骨病，临床上以骨量减少、骨微结构破坏为主要特征，是导致绝经后妇女骨折及骨脆性增加的主要因素〔1〕。研究表明，PMOP的发生与更年期后卵巢功能减退有关，雌激素分泌减少可影响血钙代谢，使骨组织中的钙大量游离而导致骨量丢失引起骨质疏松〔2〕。临床上曾用雌激素替代疗法治疗及预防PMOP的发生，但雌激素具有一定的副作用〔3〕，限制了其应用。石榴籽油是从石榴籽中提取的天然油脂，主要成分是多不饱和脂肪酸，有研究指出〔4〕，石榴籽的石榴醚提取物和非皂化物质具有较强的雌激素活性，且能被黄体酮所拮抗。但关于石榴籽油在防治骨质疏松方面的研究少有报道。本研究观察石榴籽油对大鼠骨质代谢的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物及试剂 选取3月龄SPF级雌性SD大鼠50只，河南省实验动物中心提供〔合格证号SCXK(豫)2012-0005〕，体重(210±10)g。石榴籽油由南海市华神花粉有限公司提供，其中含石榴酸69.7%；己烯雌酚片(0.5 mg/片)购自江西南昌制药有限公司。根据AIN93配方配制半成品饲料，为避免大豆异黄酮等植物雌激素的影响，将饲料中的大豆饼换成菜粕；AU5800全自动生化分析仪购自美国贝克曼库尔特公司，AA-7020型原子吸收分光光度计购自北京东西分析仪器有限公司，BH6012二维扫描单光子骨密度仪购自中国核工业总公司北京核仪器厂。

1.2 方法

1.2.1 建模分组及处理 所有大鼠适应性喂养7 d后随机分为假手术组、去卵巢组、己烯雌酚组、低石榴籽油组和高石榴籽油组，每组10只。利用0.8%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，假手术组采用背侧切开将卵巢周围约3 g脂肪组织去除，保留卵巢，其余40只大鼠则将双侧卵巢组织去除。术后7 d以后，雌二醇组每天上午8时用100 μg/kg己烯雌酚灌胃，低石榴籽油组和高石榴籽油组每天上午8时分别给予石榴籽油0.95 g/kg和1.27 g/kg灌胃。各组大鼠均在相同条件下喂养，自由饮水和进食，每7 d称重一次，以调整用药剂量。

1.2.2 血标本收集及生化指标检测 连续喂养90 d后将大鼠股动脉放血处死，取腹腔静脉血6 ml，3 000 r/min离心10 min后取上清保存于-20℃冰箱以备检。分别检测大鼠血清钙(Ca，邻甲酚酞络合铜酮直接比色法)和磷(P，紫外直接法)含量，以及碱性磷酸酶(ALP，比色法)活性、超氧化物歧化酶(SOD，比色法)和丙二醛(MDA，TAB法)水平。

1.2.3 骨密度检测 取处死大鼠一侧下颌骨及股骨，将软组织去除后，用10%中性甲醛溶液固定后备检。利用二维扫描单光子骨密度仪分别对下颌骨最后磨牙后1 mm、股骨中段和远心端骨密度(g/cm2)进行检测，精密度2%。

1.3 统计学处理 利用SPSS21.0软件，多组间计量资料比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。

2 结 果

2.1 不同组大鼠血清生化指标变化情况 与假手术组相比，去卵巢组大鼠血清Ca、P和MDA含量及ALP活性均升高，而SOD含量降低(P<0.05)；与去卵巢组相比，己烯雌酚组、低石榴籽油组和高石榴籽油组大鼠血清Ca、P含量及ALP活性均降低，低石榴籽油组和高石榴籽油组大鼠血清SOD水平升高，而MDA水平降低(P<0.05)；与己烯雌酚组相比，低石榴籽油组大鼠血清Ca、P和SOD含量升高，而MDA含量降低，高石榴籽油组大鼠血清SOD含量升高，而MDA降低(P<0.05)，见表1。

2.2 不同组大鼠实验前后体重变化情况 建模前各组大鼠体重无差异(P>0.05)。与假手术组相比，去卵巢组大鼠处死前体重及体重增长率均增加(P<0.05)，己烯雌酚组、低石榴籽油组和高石榴籽油组大鼠体重及体重增长率无差异(P>0.05)，见表2。

2.3 不同组大鼠下颌骨和股骨中段和远心端骨密度情况 与假手术组相比，去卵巢组、己烯雌酚组、低石榴籽油组和高石榴籽油组大鼠下颌骨、股骨中点和股骨远端骨密度均降低(P<0.05)；与去卵巢组相比，己烯雌酚组、低石榴籽油组和高石榴籽油组大鼠下颌骨、股骨中点和股骨远端骨密度均升高(P<0.05)，见表3。

表1 不同组大鼠血清生化指标变化情况±s,n=10)

表2 不同组去卵巢大鼠体重变化情况±s,n=10)

与假手术组相比：1)P<0.05；与去卵巢组相比：2)P<0.05；与己烯雌酚组相比：3)P<0.05；下表同

表3 不同组大鼠下颌骨和股骨中段和远心端骨密度

3 讨 论

骨质疏松作为三大老年性疾病之一，具有较高的发病率，常给患者带来疼痛等症状，严重影响患者生活质量，同时，亦是发生骨折的重要危险因素〔5〕。研究表明〔6〕，正常人体骨代谢过程中骨质形成和吸收处于动态平衡中，而骨质疏松患者则表现出破骨细胞活性增加，骨质吸收远高于骨质形成，从而导致大量骨质流失。有研究指出，雌激素可作用于成骨细胞，可对糖皮质激素的抑制作用进行拮抗，促使成骨细胞生长，抑制了过多的Ca从骨骼中释放〔7〕。本研究显示，激素水平降低可导致大量的Ca、P从骨质中游离进入血液，从而使血清Ca、P浓度升高，骨密度降低。血清ALP是骨形成及转换常用的评价指标，可反映骨形成的活跃程度〔8〕，去除卵巢大鼠血清ALP活性增加，提示由于骨吸收亢进而代偿性骨形成增加。石榴籽油可与己烯雌酚发挥同样的作用，减少了Ca和P从骨质中释放，提高了大鼠骨密度；同时，ALP活性得到有效抑制，提示石榴籽油可能具有雌激素活性，可抑制ALP活性升高而改善骨质高转化状态〔9〕，从而抑制骨吸收。

有研究指出，氧化应激与骨质疏松的发生关系密切，每天摄入一定量的抗氧化剂将会显著降低罹患骨质疏松的风险〔10〕。本研究显示，去除卵巢大鼠氧自由基清除能力下降，发生氧化应激反应；石榴籽油可对去除卵巢大鼠体内氧化应激反应产生抑制作用，对氧自由基产生淬灭作用。同时，本研究显示，补充石榴籽油并不会使去卵巢大鼠体重显著增加，这可能与石榴籽油中主要以多不饱和脂肪酸为主有关〔11〕。

1 Tian J，Xu XJ，Shen L，etal.Association of serum Dkk-1 levels with β-catenin in patients with postmenopausal osteoporosis〔J〕.J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci，2015;35(2)：212-8.

2 Min YK.Update on denosumab treatment in postmenopausal women with osteoporosis〔J〕.Endocrinol Metab (Seoul)，2015;30(1)：19-26.

3 Miyauchi Y，Sato Y，Kobayashi T，etal.HIF1α is required for osteoclast activation by estrogen deficiency in postmenopausal osteoporosis〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A，2013;110(41)：16568-73.

4 Tran HN，Bae SY，Song BH，etal.Pomegranate (Punica granatum) seed linolenic acid isomers：concentration-dependent modulation of estrogen receptor activity〔J〕.Endocr Res，2010;35(1)：1-16.

5 Bernabei R，Martone AM，Ortolani E，etal.Screening，diagnosis and treatment of osteoporosis：a brief review〔J〕.Clin Cases Miner Bone Metab，2014;11(3)：201-7.

6 Golob AL，Laya MB.Osteoporosis：screening，prevention，and management〔J〕.Med Clin North Am，2015;99(3)：587-606.

7 Palacios S，Currie H，Mikkola TS，etal.Perspective on prescribing conjugated estrogens/bazedoxifene for estrogen-deficiency symptoms of menopause：A practical guide〔J〕.Maturitas，2015;80(4)：435-40.

8 Hegazy SK.Evaluation of the anti-osteoporotic effects of metformin and sitagliptin in postmenopausal diabetic women〔J〕.J Bone Miner Metab，2015;33(2)：207-12.

9 Liu Y，Liu H，Li M，etal.Association of farnesyl diphosphate synthase polymorphisms and response to alendronate treatment in Chinese postmenopausal women with osteoporosis〔J〕.Chin Med J (Engl)，2014;127(4)：662-8.

10 Manolagas SC.From estrogen-centric to aging and oxidative stress：a revised perspective of the pathogenesis of osteoporosis〔J〕.Endocr Rev，2010;31(3)：266-300.

11 Saravani M，Kazemi Mehrjerdi H，Mirshahi A，etal.Protective effects of pomegranate seed oil on ovariectomized rats as a model of postmenopausal osteoporosis：A multi-detector computed tomography evaluation〔J〕.Vet Res Forum，2014，5(4)：263-7.

〔2016-11-19修回〕

(编辑 李相军)

内蒙古自治区自然科学基金项目(2014MS0812)；包头市社会发展科技支撑项目(2014S2003-5-12)；内蒙古医疗卫生科研计划项目(201302101)

许文胜(1972-)，男，硕士，副主任医师，主要从事创伤骨科研究。

R68

A

1005-9202(2016)20-4956-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.20.007