两种设备制备冷沉淀的效果比较

李建伟 蒲维薇 肖乐宇

(新乡市中心血站 成分科 新乡 河南 453000)



两种设备制备冷沉淀的效果比较

李建伟 蒲维薇 肖乐宇

(新乡市中心血站 成分科 新乡 河南 453000)

目的 对比分析恒温摇摆式水浴箱(CT-4T.6C型)和冷沉淀凝血因子制备仪(ZBK-LCD-A1型)制备的冷沉淀凝血因子的回收率和合格率。方法 按照CT-4T.6C型恒温摇摆式水浴箱的操作说明书操作，随机制备30袋冷沉淀凝血因子，共20批次。 按照ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制备仪操作说明书操作，随机制备30袋冷沉淀凝血因子，共20批次。对比分析两种设备制备的回收率和合格率。结果 采用冷沉淀凝血因子制备仪ZBK-LCD-A1所制备的冷沉淀凝血因子的回收率与合格率分别达95%、100%，明显高于摇摆式水浴箱CT-4T.6C的75%和70%，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制备仪所制备的冷沉淀凝血因子回收率及合格率高，且制备时间短，容量控制精准，在制备过程中能严格控制融化的环境温度、水浴温度和时间，有效减少人为因素的影响，最大限度地获得Ⅷ因子、纤维蛋白原，值得推广应用。

冷沉淀凝血因子；回收率；合格率

冷沉淀凝血因子是指采用特定的方法将保存期内的新鲜冰冻血浆在1～6 ℃融化后，分离出大部分的血浆，并将剩余的冷不溶解物质在1 h内速冻呈固态的成分血[1]。由于冷沉淀中不稳定凝血因子(Ⅷ因子)的损耗会随着制备时间的延长和温度的升高而增加。因此，不同制备工艺和设备所制备出的冷沉淀凝血因子在质量上存在较大的差异。良好而专业的融化设备和制备技术是保证冷沉淀凝血因子质量的重要因素[2]。本文分别采用恒温摇摆式水浴箱(CT-4T.6C型)和冷沉淀凝血因子制备仪(ZBK-LCD-A1型)制备冷沉淀凝血因子，并对其质量进行比较，具体如下。

1 材料和方法

1.1 仪器 6000i大容量低温离心机(Thermo Fisher)、血浆速冻机(郑州飞龙公司)、EPAMATIC-SL(Ⅲ)高效型全自动全血成分分离机(德国LMB科技有限公司)、三洋低温冷冻冰箱(日本三洋电机株式会社)、CT-4T.6C型恒温摇摆式水浴箱(美国CytoTherm公司)、ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制备仪(山东中保康)、CA-510血凝仪(希森美康医用电子有限公司)、Ⅷ因子活性测定试剂盒(希森美康医用电子有限公司)、纤维蛋白原测定试剂盒(希森美康医用电子有限公司)。

1.2 原料浆的制备 采用山东威高集团生产的一次性白细胞滤除五联袋(抗凝剂CPD)采集全血400 ml，于6 h内分离血浆。将血浆袋和空转移袋叠加好迅速放入血浆速冻机进行速冻，在1 h内速冻呈固态的新鲜冰冻血浆。速冻后置入-35 ℃以下低温冰箱中保存。实验期内共计制备1 200袋原料浆。

1.3 操作方法 同时用两种设备进行制备，随机从-35 ℃以下低温冰箱中取出保存的原料浆进行操作。(每次每种设备制备30袋，共计60袋)。

1.3.1 CT-4T.6C型恒温摇摆式水浴箱操作过程 操作前人工开机将恒温摇摆式水浴箱中的水预冷至6℃。每次随机将30袋血浆垂直置于恒温(6 ℃)的循环水浴箱中，水浴箱自动摇摆30 min后血浆开始融化，人工使融化的血浆虹吸到空转移袋。当原血浆袋中剩余的白色絮状冷不溶解物附着于冰块上约为(25±5)ml时即成为冷沉淀。此过程约需50 min。

1.3.2 ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制备仪操作过程 根据设定时间设备自动进水开机预冷。当制备仪内的环境温度降至2～8 ℃、水温降至2～6 ℃并恒定时，根据设备的智能显示屏提示进行操作，每次将30袋新鲜冰冻血浆逐一放入上称重挂盒(血浆)和下称重挂盒(空转移袋)，血袋管路安装于蠕动泵及夹管阀内。启动后待上称重挂盒称重完毕并存储第一组数据后，上称重挂盒自动沉入水浴箱，血浆袋垂直固定浸于水浴中进行血浆融化。新鲜冰冻血浆在2～6 ℃水浴箱内，经一段时间后蠕动泵开始工作，夹管阀打开，管路自动形成虹吸。融化的血浆经虹吸流入下称重挂盒中的空转移袋内，冷沉淀开始制备。这时设备对放入下称重挂盒中的转移袋和在融化过程中的血浆进行实时称重(第二组数据)；并对存储的第一组数据和实时称重的第二组数据进行差值换算，当差值达到设定的参考值[(25±5)ml]后，控制系统发送信号通知夹管阀将血浆管路夹紧闭合，使管路内的血浆停止流动。上称重挂盒中附着在血浆冰块上的白絮状冷不溶解物即为冷沉淀。此过程约需40 min。制备完成后上称重挂盒自动将血浆袋从水浴箱内提升上来，取出血浆袋(冷沉淀)和转移袋(冷上清)进行热合，分别置于低温速冻机进行速冻并保存。

1.4 检测指标 将两种设备制备的冷沉淀凝血因子从冰箱内取出，同时置于37 ℃水浴箱中融化，待其完全融化后各取2 ml冷沉淀凝血因子，严格按照希森美康公司生产的CA-510血凝仪操作使用说明书和纤维蛋白原测定试剂盒、Ⅷ因子活性测定试剂盒试剂说明书进行检测，采用凝血酶法检测纤维蛋白原，采用一期法检测Ⅷ因子。Ⅷ因子回收率=冷沉淀Ⅷ因子获得量(IU)/原料血浆Ⅷ因子总量(IU)×100%。

1.5 统计学处理 采用SPSS 18.0 统计学软件进行数据处理，率的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

通过两种设备制备共计20批次1 200袋冷沉淀凝血因子。采用冷沉淀凝血因子制备仪ZBK-LCD-A1所制备的冷沉淀凝血因子的回收率与合格率分别达95%、100%，明显高于摇摆式水浴箱CT-4T.6C的75%和70%，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两种设备制备冷沉淀凝血因子的效果比较

3 讨论

冷沉淀凝血因子主要富含Ⅷ因子、纤维蛋白原等活性物质。Ⅷ因子是一种性质不稳定的凝血因子，在2～6 ℃水浴中制备的回收率较高，但在8 ℃以上会产生自融[3]。血浆在1 h内融化所制备的冷沉淀质量最好[4]，故冷沉淀的制备对融化温度、融化时间(速度)及操作方法均有较高的要求。

CT-4T.6C型恒温摇摆式水浴箱的上水、排水均需人工操作，在制备时仅有一个水环境的局域温度控制，虹吸出的血浆长时间暴露在外界高温条件下，容易引起蛋白质等有效成分的破坏和损失；水浴箱体积小，且只能通过摇摆来达到水温均衡和加速融化的目的，温度交换慢，混匀不充分，影响融化速度。在摇摆过程中血袋不能始终处于垂直状态，容易把刚刚析出未抱团的冷沉淀物质晃散而随血浆被吸出，造成成品效价不足。本研究观察到，在制备时有部分絮状物(富含Ⅷ因子、纤维蛋白原等)会随着融化的血浆转移到空袋中。随着血浆的不断融化，转移袋内液体血浆中的絮状物成分也会明显增多[5]。这实际上是纤维蛋白原等不溶物质未附着在冰块上或血袋内表面，而是随血浆流出来，这样极易造成终产品的不合格。另外，其在开放环境下进行制备，环境温度不能受到良好的控制，温度偏高，受人为因素影响较多，这些因素均能直接影响冷沉淀中Ⅷ因子、纤维蛋白原的含量和回收率。

ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制备仪具有微电脑自动系统，可自动上水、排水，并精确地将设备内的环境温度控制在2～8 ℃，水浴温度控制在2～6 ℃。上称重挂盒自动升降确保血浆袋全部自动垂直固定浸于水浴中，通过低温循环水流不停作用于血浆袋以加速融化。在融化虹吸阶段，血浆中的絮状物无明显转移现象，另蠕动泵的应用有效避免了血浆在形成虹吸过程中受人为因素的影响，这些均有利于Ⅷ因子、纤维蛋白原最大限度的收集以提高Ⅷ因子、纤维蛋白原的回收率。该设备为一键式智能操作，自动化程度高，安全可靠，有效节省人力，提高工作效率。

由以上两种设备相比可知，ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制备仪具有设备操作简便、制备时间短、容量控制精准，在制备过程中能严格控制融化的环境温度、水浴温度和时间，有效减少人为因素的影响，最大限度地获得Ⅷ因子、纤维蛋白原，回收率、合格率明显高于CT-4T.6C型恒温摇摆式水浴箱，值得推广应用。

[1] 中华人民共和国卫生部,中国国家标准化管理委员会. GB18469-2012全血及成分血质量要求[S].北京:中国标准出版社,2012.

[2] 孙森,杜滨,许雷.虹吸法制备冷沉淀的关键控制点[J].中国医疗前沿,2008 3(22):109.

[3] 高峰.临床输血与检验[M].北京:人民卫生出版社,2007:139-140.

[4] 杨绍明.冷沉淀制备的关键点控制[J].赣南医学院学报,2006,26(1):86.

[5] 陈峰,王丽,周华平,等.虹吸法制备冷沉淀的容量控制探讨[J].中国输血杂志,2011,24(11):974-975.

R 457.1+2

10.3969/j.issn.1004-437X.2016.10.011

2016-01-04)