氨基酸分析仪识别鱼粉中掺入蛋氨酸、赖氨酸原料一例

李裕 黄勇 欧阳龙 高华 周汝顺 曹峰 李艳平

（1湖南省兽药饲料监察所长沙410006；2沅江市畜牧水产局沅江413100）

氨基酸分析仪识别鱼粉中掺入蛋氨酸、赖氨酸原料一例

李裕1黄勇1欧阳龙1高华2周汝顺1曹峰1李艳平1

（1湖南省兽药饲料监察所长沙410006；2沅江市畜牧水产局沅江413100）

分别用酸水解、酸提取两种方法对鱼粉样品进行处理，氨基酸分析仪上机测定。分别测定鱼粉中各氨基酸含量和可能掺入的氨基酸原料含量。发现一例掺有赖氨酸、蛋氨酸原料的假冒进口鱼粉。

鱼粉；氨基酸；掺假

鱼粉是一种重要的饲料原料。鱼粉的蛋白含量高，赖氨酸、蛋氨酸等必需氨基酸含量高，矿物质、维生素比较丰富，含有未知的促生长因子，能够增加饲料的适口性。鱼粉的用量大、价格高，因此掺假现象屡见不鲜。掺入物五花八门，多为价格比鱼粉低的增重物（石粉、虾蟹壳粉、食盐等）、非蛋白氮（尿素、脲醛树脂、三聚氰胺等）、植物性蛋白（豆粕、菜粕、玉米蛋白粉等）、动物性蛋白（羽毛粉、皮粉、肉骨粉等）。暂无在鱼粉中掺入氨基酸原料进行制假的报道。

1 材料及方法

某饲料厂家送检鱼粉样品一份，约500克（包装、标签标示为某国进口鱼粉，蛋白65%）。

SKRAM 433D氨基酸自动分析仪。仪器为离子色谱柱后衍生系统，570nm、440nm双通道检测器。

1.3.1 酸水解法

称取样品约100mg，放置水解玻璃管中。胖肚移液管加入含1‰苯酚的6mol/L盐酸溶液15.00mL，封口后110℃水解20小时。滤纸过滤后，移取100μL水解液，真空干燥后，加入1000μL上机缓冲液重新溶解，过0.22μm针头滤器，即得样品上机试液。

1.3.2 酸提取法

称取样品约350mg，放置100mL容量瓶中。加入约60mL0.1mol/L盐酸溶液充分振摇，定容。混匀后滤纸过滤，取1mL滤液过0.22μm针头滤器，即得样品上机试液。

将十七种氨基酸混合标准溶液（100nmol/ mL）、以上两种处理方式的样品试液上机，外标法定量。

2 结果

图一为十七种氨基酸混合标准溶液的色谱图。图二为酸水解法处理鱼粉样品的色谱图。图三为酸提取法鱼粉样品的色谱图，图中可见明显的蛋氨酸、赖氨酸色谱峰。

图一 十七种氨基酸混合标准570nm谱图

图二 酸水解法处理鱼粉样品570nm谱图

图三 酸提取法处理鱼粉样品570nm谱图

见表一。酸水解法测定结果显示，该鱼粉样品

蛋氨酸含量为2.36%，赖氨酸为4.86%。均高于特极品鱼粉的氨基酸指标要求。酸提取法测定结果显示，该鱼粉样品中以单个氨基酸分子形式存在的蛋氨酸含量为1.20%，赖氨酸为1.60%。而以单个氨基酸分子形式存在的其他氨基酸含量均不超过0.15%。

表一 两种处理方法测定鱼粉中氨基酸的含量

3 讨论

依据国家标准《GB/T 19164-2003鱼粉》，鱼粉评级的重要指标为赖氨酸和蛋氨酸的含量（如特级品要求赖氨酸≥4.6%，蛋氨酸≥1.7%；一级品要求赖氨酸≥4.4%，蛋氨酸≥1.5%）。近年来，随着高效液相色谱仪、氨基酸分析仪的日益普及，氨基酸分析在鱼粉质量评定中的应用也越来越普遍。

参考2016年3月的国内市场价格情况：进口鱼粉的平均价格为12.44元/kg，98.5%赖氨酸为7.72元/kg，65%赖氨酸为4.75元/kg，固体蛋氨酸和液体蛋氨酸的平均价格分别为32.27元/kg、25.27元/kg。赖氨酸原料的价格低于进口鱼粉的价格，蛋氨酸价格偏高，但其最高添加量不超过1.5%即可达到特级品要求。因此，在掺杂鱼粉、次等鱼粉中加入赖氨酸、蛋氨酸原料，冒充高价优质鱼粉，仍有较大的牟利空间。

鱼粉中以单个分子形式存在的氨基酸含量不高。测定鱼粉中的氨基酸，需要使用酸水解法处理，使蛋白质肽链断裂、水解，得到单个的氨基酸分子，然后上机进行测定。而对于添加的氨基酸原料，氨基酸以单个分子形式存在，只需用稀盐酸溶解（即酸提取法）直接上机测定。所以分别使用酸水解法和酸提取法能清楚分辨鱼粉中是否掺有氨基酸原料，且能准确测定出掺入的氨基酸种类及其含量。本例中，鱼粉样品的酸提取法测定结果为蛋氨酸含量1.20%、赖氨酸含量1.60%，属于明显的人为添加。