IRF2 基因rs13146124位点多态性与系统性红斑狼疮的关联性研究*

崔晓丽，李红梅，刘水和，叶震璇，张 华△

(1.遵义医学院检验系，贵州遵义 563000；2.贵州省人民医院检验科，贵阳 550001)



论著·临床研究 doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.30.017

IRF2 基因rs13146124位点多态性与系统性红斑狼疮的关联性研究*

崔晓丽1，李红梅2#，刘水和2，叶震璇2，张 华2△

(1.遵义医学院检验系，贵州遵义 563000；2.贵州省人民医院检验科，贵阳 550001)

目的 探讨Ⅰ型干扰素通路中干扰素调节因子2(IRF2)基因rs13146124位点单核苷酸多态性(SNP)与系统性红斑狼疮(SLE)易感性之间的关联。方法 采用Taqman实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)分析技术检测366例SLE患者、218例健康对照者IRF2基因rs13146124位点多态性，计算和分析基因型和等位基因频率。结果 SLE患者IRF2 rs13146124位点 AA、AG、GG基因型频率分别为0.011、0.246、0.743，与对照组间差异无统计学意义(χ2值分别为0.093、0.205、0.136；P值分别为0.761、0.651、0.712)；SLE患者IRF2 rs13146124位点A、G等位基因的频率分别为0.13、0.87，与对照组间差异无统计学意义(χ2=0.071，P=0.790)。IRF2 rs13146124位点等位基因A和G与抗核抗体(ANA)、抗双链DNA抗体(dsDNA)等特异性抗体之间差异无统计学意义(P>0.05)。IRF2 rs13146124位点的等位基因与关节炎、肾损伤等临床特征无相关关系。结论 IRF2 rs13146124基因位点的多态性可能与贵州人群SLE的易感性无关。

系统性红斑狼疮；干扰素调节因子；基因多态性

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE) 是一种自身免疫性疾病[1]，以体内大量自身抗体产生和免疫复合物形成为特点，发病机制尚不明确。全基因组关联研究(GWAS)及SLE候选基因的研究已经确定了70多个易感位点，但许多易感基因仍有待确定[2]。近年来研究证实干扰素通路中的多个基因的变异参与了SLE的发病。干扰素调节因子(interferon regulator factor，IRF)是一类多功能的转录因子，目前已发现10个IRFs成员：IRF1～IRF9 和病毒 IRF( V-IRF)[3]。IRF可诱导干扰素的产生及调控相关基因的表达，在SLE的发病中起作用。近来日本学者Kawasaki等[4]报道，IRF2 rs13146124与亚洲人群SLE易感性相关，而国内尚未见该基因与SLE的相关报道。本研究拟对贵州地区人群SLE患者与健康人群IRF2基因进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)检测，以探讨IRF2基因多态性与SLE易感性之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 SLE组：收集2010年10月至2016年3月贵州省人民医院肾内科门诊及住院患者366例，其中男36例，女330例，年龄9～86岁，平均(32.89±13.28)岁。所有病例均符合1997年美国风湿病学会(ACR)关于SLE的分类修订标准[5]。对照组：贵州省人民医院体检健康者218例，排除1型糖尿病、类风湿性关节炎、SLE等自身免疫病患者，其中男20例，女198例，年龄14～76岁，平均(38.41±13.62)岁，年龄、性别与SLE组相匹配。所有研究对象均无亲缘关系。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取 采集受检者静脉血2 mL，用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝，采用非离心柱法提取基因组DNA。

1.2.2 引物设计与合成 由美国ABI公司设计合成，在特异性杂交荧光探针的5′端结合荧光发光基团(FAM)，在3′端结合荧光吸收基团(VIC)。产品目录号：C_31861563_10(IRF2)。

1.2.3 IRF2基因聚合酶链式反应(PCR)扩增 PCR反应体系总体积25 μL。扩增条件：50 ℃ 2 min，95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s ，60 ℃ 1 min，共40个循环。

1.2.4 等位基因分型 ABI 7500 FAST 通过检测荧光强度来确定基因型，并利用终点法对等位基因进行定性，SDS软件检测和分析处理PCR扩增后的FAM和VIC荧光信号。

1.3 统计学处理 采用SPSS17.0软件对研究数据进行统计分析。样本的群体代表性采用Hardy-Weinberg平衡检验检测。等位基因频率=(2×纯合子+杂合子)/(2×受检人数)。计数资料以例数或百分率表示，基因型及等位基因频率组间，自身抗体组间，临床症状组间计数资料比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 IRF2基因 rs13146124基因型及等位基因频率分布 IRF2基因rs13146124原始数据见图1，等位基因纯合子分别沿X轴、Y轴分布，杂合子则沿对角线分布。IRF2 rs13146124基因型频率在SLE组和对照组人群中符合Hardy-Weinberg遗传平衡(χ2=1.328，χ2=0.254，均P>0.05)，说明样本具备群体代表性，可进行遗传分析。IRF2 rs13146124位点存在的3种基因型AA/AG/GG，等位基因为A和G。通过χ2检验，基因型AA、GG、AG在两组间的频率总体分布差异无统计学意义 (χ2值分别为0.093，0.205，0.136；P值分别为0.761，0.651，0.712)，等位基因A/G频率在两组人群中的分布差异无统计学意义(χ2=0.071，P=0.790)，见表1。

X轴：基因型AA；Y轴：基因型GG。

图1 rs13146124位点等位基因分型结果

2.2 IRF2基因 rs13146124 位点多态性与抗体的关系 通过病例-病例分析[比如抗Sm抗体(+)的SLE患者与抗Sm抗体(-)的SLE患者之间rs13146124等位基因频率的差异]，rs13142164位点等位基因A和G与抗核抗体(ANA)、抗双链DNA抗体(dsDNA)等特异性抗体之间差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.3 SLE患者的临床资料 366例SLE患者中，可提供临床资料分析的共262例。其中较为常见的临床症状有关节炎 120例( 45.80%)、肾损伤 109 例(41.60%)，其次为颧部红斑、盘状红斑、浆膜炎、光敏感，阳性率分别为32.44%、5.34%、6.11%、4.58%，见表3。

表2 SLE组特异性抗体与rs13146124等位基因的相关性分析

表3 rs13142164位点 SLE 患者的主要临床症状

2.4 基因分型结果与临床表现的关系 关节炎、肾损伤、颧部红斑、盘状红斑等临床特征与 rs13146124位点的等位基因之间无明显相关性(P>0.05)，见表4。

表4 rs13146124 等位基因频率与 SLE 临床表现的关联性分析

续表4 rs13146124 等位基因频率与 SLE 临床表现的关联性分析

3 讨 论

SLE是一种以产生多种自身抗体、激活补体、免疫复合物沉积，以导致组织和器官的损伤为特征的自身免疫性疾病，可累及多系统、多脏器，临床表现复杂多样[1]。迄今为止，其发病机制尚未完全阐明，一般认为是由遗传因素和环境因素共同作用，导致多种免疫异常，致 T淋巴细胞、B 淋巴细胞和树突状细胞的功能失调及大量自身抗体产物形成。SLE是一种多基因遗传病，多个微效易感基因可能共同参与了SLE的发生与发展[6]。迄今为止，已发现并确证多个SLE的易感区域或基因，如HLA区域、ITGAM、IRF5、STAT4、PTPN22、BLK、BANK1、TNFSF4 等。随着SNPs检测技术的进展，在大规模人群中对SNPs进行检测日益得到广泛应用。

有文献报道Ⅰ型干扰素通路在SLE的发病机制中扮演着重要角色[7]。Ⅰ型干扰素信号传导通路受多种基因调控，他们的SNPs对SLE的发病有不同贡献，其中IRF5和STAT4是主要的Ⅰ型干扰素相关基因[8-9]，他们的多种SNPs与SLE发病相关[10]，但目前国内未见IRF2有关SNP的报道。

IRF2属于干扰素调节因子家族的一员，基因定位于4q35.1，编码区1 047 bp，由349个氨基酸组成，被认为是负性调节Ⅰ型干扰素信号[11]。IRF2主要通过与IRF1竞争性结合相同的顺式作用元件，相互协调来调节Ⅰ型干扰素基因和干扰素刺激应答基因(interferon stimulated gene，ISG)的表达。IRF2能强烈启动Thl 应答，通过与IRF8的相互作用来增加 白细胞介素(IL)-12和IL-23 的p40 亚基表达，促进Th1的分化，从而引起SLE的发病[12]。此外，IRF2也参与了乳腺癌、黑色素瘤、食管癌等多种肿瘤的形成[13-14]。

Kawasaki等[4]于2014年在日本对834例SLE患者和817例健康者做了IRF2 (rs13146124、rs66801661、rs62339994)的基因SNP与SLE的关联性研究，结果发现rs13146124多态性与SLE具有相关关系。本次研究检测了贵州省人群中SLE患者和健康对照人群中IRF2基因rs13142164位点的多态性。在SLE组和对照组中，rs13142164 位点都存在A和G等位基因。SLE组和对照组的等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)；比较两个位点的基因型频率，发现SLE组中3种基因型频率与对照组的分布差异也无统计学意义(P>0.05)。表明该位点与贵州地区SLE易感性不相关。本研究结果与其他报道不一致，原因可能与研究地区、种族差异相关，也可能与不同人群中SLE遗传的异质性有关。

笔者还将IRF2 rs13146124分别与SLE 7种特异性抗体和临床表现之间的相关性进行了分析。结果显示：IRF2 rs13146124位点等位基因A和G与ANA、dsDNA、Anti-nRNP、Anti-Sm等7种抗体之间差异无统计学意义(P>0.05)。在纳入研究的262例SLE患者中以关节炎、肾损伤、颧部红斑为主要临床表现，rs13146124位点等位基因A和G与关节炎、肾损伤、颧部红斑等7种临床表现之间差异无统计学意义(P> 0.05)。进一步说明rs13146124位点可能与贵州地区SLE的发病不存在关联。

笔者采用群体相关研究策略，运用TaqMan-PCR技术发现IRF2 rs13146124与SLE易感性无关。SLE作为多因素疾病，受到众多危险因素的影响。本次只选取了IRF2基因上的单个SNP 位点，在接下来的研究中可进一步探索其他 SNP位点与SLE发病的关联。并深入探讨 IRF2 SNP位点对其转录水平及其蛋白表达水平的影响，进一步对SLE发病相关机制进行深入研究。

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Study on the relationship between polymorphism site rs13146124 of IRF2 and systemic lupus erythematosus patients﹡

Cui Xiaoli1,Li Hongmei2#,Liu Shuihe2,Ye Zhenxuan2,Zhang Hua2△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,ZunyiMedicalCollege,Zunyi,Guizhou563000,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,GuizhouProvincePeople′sHospital,Guiyang,Guizhou550001,China)

Objective To investigate the correlation between single nucleotide polymorphism rs13146124 of interferon regulatory factor2(IRF2) on type Ⅰ interferon pathway and systemic lupus erythematosus(SLE) in a population from Guizhou Province.Methods The polymorphism IRF2(rs13146124) was detected by using Taqman-PCR in 366 cases of patients with SLE and 218 healthy controls.The genotype and allele frequencies were calculated and analyzed.Results The genotype frequencies of AA,AG and GG in IRF2 rs13142164 site in patients with SLE were 0.011,0.246 and 0.743 respectively,compared with the control group,the difference was not statistically significant (χ2=0.093,0.205,0.136;P=0.761,0.651,0.712).The allele frequencies of A and G in IRF2 rs13146124 site in SLE patients were 0.13,0.87 respectively,compared with the control group,the difference was not statistically significant(χ2=0.071,P=0.790).There was no significant difference between the allele frequencies of A and G in IRF2 rs13146124 site in SLE and ANA,dsDNA and other specific antibodies.There was no correlation between the allele frequencies of A and G in IRF2 rs13146124 site in SLE and clinical features such as arthritis,kidney damage,etc.Conclusion The polymorphism of rs13146124 in IRF2 may not be associated with SLE in the population from Guizhou Province.

systemic lupus erythematosus;interferon regulatory factor;gene polymorphism

贵州省科技厅国际合作基金资助项目(黔科合外G字[2012]7046号)。作者简介：崔晓丽(1991-)，在读硕士，主要从事临床检验诊断学研究。#：共同第一作者。△

R392.9;R593.24+1

A

1671-8348(2016)30-4230-03

2016-03-01

2016-06-14)