麻疹患儿外周血辅助性T细胞17及其效应因子白介素-17的表达及临床意义

付强,于会娜, 王婷, 吴屏, 刘剑峰,晏霞, 屈悦, 唐临飞, 余孔贵

长江大学第二临床医学院荆州市中心医院儿科，湖北 荆州 434020



麻疹患儿外周血辅助性T细胞17及其效应因子白介素-17的表达及临床意义

付强,于会娜, 王婷, 吴屏, 刘剑峰,晏霞, 屈悦, 唐临飞, 余孔贵

长江大学第二临床医学院荆州市中心医院儿科，湖北 荆州 434020

目的：探讨麻疹患儿外周血辅助性T细胞17(Th17)及其效应因子白介素(IL)-17的表达及临床意义。方法：采用流式细胞仪(FCM)检测20例普通麻疹患儿(无并发症)、15例麻疹并发细菌性肺炎患儿、20例健康对照组儿童外周血Th17细胞的百分率；酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-17、IL-6的水平；并分析了Th17百分率与血清C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)的水平的关系。结果：麻疹并发细菌性肺炎组Th17细胞百分率均值为(4.15±0.76)%、高于普通麻疹患儿(1.71±0.63)%及对照组(1.59±0.58)%(P<0.05)。IL-17、IL-6、CRP、PCT在麻疹合并细菌性肺炎组分别为：(78.04±12.67)、(35.23±10.36)pg/mL、(3.97±0.56)ng/mL和(37.05±9.27)mg/L；在普通麻疹组的均值分别为：(50.21±10.55)、(13.18±6.93)pg/mL、(0.10±0.02)ng/mL和(0.76±0.11)mg/L；在健康对照组均值分别为：(45.95±9.33)、(11.07±6.52)pg/mL、(0.06±0.01)ng/mL和(0.45±0.08)mg/L。麻疹并发细菌性肺炎组各指标均明显高于普通麻疹患儿及健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；普通麻疹患儿与对照组间的差异无统计学意义(P>0.05)。麻疹并发细菌性肺炎患儿外周血Th17比率与CRP、PCT水平呈正相关(r=0.63、0.67，P<0.05)。结论：麻疹患儿外周血Th17细胞及其效应因子IL-17表达升高可能与继发细菌感染有关，可作为监测病情的实验室指标之一

麻疹；辅助性T细胞17；白介素-17； 细菌感染；儿童

麻疹是由副黏病毒引起的小儿常见的急性呼吸道传染病，通过空气飞沫传播，以发热、咳嗽、流涕、结膜炎、口腔麻疹黏膜斑及皮肤特殊性斑丘疹为主要临床表现，部分患儿可继发严重肺炎危及生命[1,2]。辅助性T细胞17(T helper 17 cells, Th17)是一种新发现的CD4+T细胞亚群，在自身免疫性疾病和机体防御反应中均有重要意义[3,4]。Th17细胞的主要效应因子白介素17(Interleukin-17, IL-17)具有强大的招募中性粒细胞的功能，能够促进多种细胞释放炎性因子，可使气道黏液腺分泌大量黏液，增加气道的高反应性[5,6]。Th17细胞及IL-17在麻疹并发细菌性肺炎中有何作用目前尚不清楚。本研究观察了普通麻疹患儿及麻疹并发细菌性肺炎患儿外周血Th17细胞及IL-17的变化，探讨Th17细胞及IL-17在麻疹继发细菌感染中可能的作用及临床意义。

1 对象与方法

1.1 对象

选择2015年1月至2016年2月在我院感染科住院的麻疹患儿35例，诊断符合《诸福棠实用儿科学》第7版的标准[7]，麻疹患儿均为发病后3～6d入院，具有典型麻疹的临床表现，血清经荆州市疾病预防与控制中心检测，麻疹病毒IgM抗体阳性，均排除其他感染性疾病和免疫性疾病。其中20例为普通麻疹患儿，无明显并发症出现，男15例，女5例；年龄6个月～15个月，中位年龄8个月。15例为麻疹并发细菌性肺炎患儿，男9例，女6例；年龄6个月～18个月，中位年龄8个月。麻疹并发细菌性肺炎的诊断除符合上述麻疹的诊断标准外，还需符合下述条件中的4条以上：①咳嗽，咳黄脓痰。②退疹时仍高热或下降后再升高。③胸片示：肺部感染性病变。④血常规示：白细胞及中性粒细胞比例升高。⑤痰培养阳性[8]。平均热程(7.0±2.5)d。21例有心肌受损(血清肌酸激酶同工酶升高或心电图ST-T改变)，5例有肝功能受损(丙氨酸转氨酶升高)，2例行机械通气辅助呼吸治疗，所有患儿均治愈出院，随访3个月无明显异常。另选取20名同期到我院行健康体检的儿童做为健康对照组，近期均无感染性疾病史，留取清晨空腹血进行检测，其中男13例，女7例；年龄5个月～17个月，中位年龄8个月。3组患者年龄、性别无统计学差异。研究方案经医院伦理委员会批准。所有研究对象的家长均知情同意。

1.2 方法

1)标本采集。采集麻疹患儿急性期清晨空腹静脉血3mL，乙二胺四乙酸(EDTA)钾盐抗凝。

2)流式细胞仪(Flow cytometry, FCM)检测Th17细胞比率。取外周抗凝血50μL，与50μL RPMI1640培养液混匀，加入4μL刺激剂，置于37℃、5%CO2培养箱中培养刺激5h。取出刺激后的细胞，混匀，加入CD4-异硫氰酸荧光素(FITC)20μL，室温避光孵育30min，加入破膜剂100μL，混匀，室温放置5min，加抗人IL-17-藻红蛋白(PE) 20μL于实验管，对照管加入同型荧光标记的鼠抗人IgG 20μL，室温孵育30min。洗涤、重悬、然后上机检测Th17细胞占外周血单个核细胞比率。

3)酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-17及白介素6(Interleukin-6, IL-6)的水平。取全血1mL置于普通试管中，离心(3000r/min，15min，离心半径15.2cm)后收集血清，采用ELISA法分别测定血清中IL-17及IL-6的水平，操作步骤严格按试剂说明进行。

4)免疫比浊法检测血清中降钙素(Procalcitonin, PCT)及C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)的水平。半自动免疫比浊仪(r)PLUS、CRP及PCT测定试剂盒均购自ORION公司。采用散色比浊法，反应杯中加入配制好的反应液0.5mL(30mL缓冲液加入0.5mL试剂)，室温(20～25℃)，反应25～35min，然后用免疫比浊仪测定。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 各组间Th17细胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT的比较

各组间Th17细胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT水平比较见表1，其中各组间外周血Th17细胞和IL-17、IL-6、PCT及CRP水平表达的差异均有统计学意义(P<0.05)。两两比较显示，麻疹并发细菌性肺炎组的外周血Th17细胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT水平与普通麻疹组和对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；普通麻疹组与健康对照组间比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。

表1 各组间Th17细胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT的比较

注：健康对照组相比，aP<0.05；与麻疹并发细菌性肺炎组相比,bP<0.05。

2.2 麻疹并发肺炎组外周血Th17细胞表达与CRP及PCT的相关性

麻疹并发细菌性肺炎组的外周血Th17细胞表达与血清CRP及PCT均成正相关(r=0.63、0.67，P<0.05)。

3 讨论

虽然麻疹在我国已经得到了很好的控制，近年来无大规模流行，但有些地区仍有不少病例发生，甚至有小的流行或暴发。感染麻疹病毒后，机体发生暂时性的免疫抑制，表现为抗细菌免疫反应低下，部分患儿可并发严重肺炎危及生命[9]。本研究显示，麻疹并发细菌性肺炎患儿的外周血Th17细胞和IL-17水平明显高于普通麻疹患儿和对照组，同时，IL-6水平也是明显升高的，而普通麻疹患儿与对照组间比较无明显差异，这表明Th17细胞及IL-17参与了麻疹并发细菌性肺炎的发病过程。由此推测，当呼吸道粘膜受到外来细菌侵袭时，树突状细胞分泌产生大量的IL-6，诱导Th0细胞分化成大量的Th17细胞，并使Th17细胞活化和增殖[10]，产生IL-17。IL-17募集大量中性粒细胞到气道，对细菌进行吞噬、清除，并且诱导一系列抗菌肽的产生，如防御素-2β及来自气管上皮细胞的S100家族中的成员等[11-12]。因此，Th17细胞及IL-17对麻疹并发肺炎的呼吸道存在一定的保护作用。

此外，本实验还显示，麻疹并发肺炎患儿血清CRP及PCT均明显升高。CRP和PCT是目前被认为是脓毒血症和细菌感染的诊断指标。CRP是一种急性时相反应蛋白，与炎性反应程度密切相关[13,14]。PCT在健康人体中含量极低，病毒感染状态下，血清PCT通常不升高，而在细菌毒素刺激下增高明显，尤其是在严重感染状态下升高得非常快[15]。麻疹并发肺炎患儿外周血Th17细胞表达与CRP及PCT均呈正相关，表明当麻疹患儿外周血Th17细胞比率及IL-17水平升高时，一定程度上提示着机体可能并发细菌感染，并且其升高的水平与炎症轻重程度一致。

同时，值得注意的是，虽然IL-17具有一定的保护机制，但当麻疹患儿炎症过重，IL-17产生过多，亦或由于麻疹病毒导致的免疫功能紊乱，致使大量炎症因子“瀑布式”释放入血，产生全身炎症反应综合征(SARS)，此时，血CRP、PCT及IL-6会异常升高，机体有可能发生全身多器官功能衰竭、感染性休克、弥漫性血管内凝血(DIC)而危及生命，此时IL-17已经不再是一种保护作用。

综上所述，麻疹患儿外周血Th17细胞及其效应因子IL-17表达升高可能与继发细菌感染有关，可作为监测病情的指标之一，但尚需扩大样本量进行更为深入细致的研究。

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[编辑] 刘阳

2016-07-11

荆州市医疗卫生科技计划项目(2014051)。

付强(1977-)，男，主治医师，博士，主要从事儿科疾病研究；通信作者：余孔贵，fuqiang5918@163.com。

R725.1

A

1673-1409(2016)30-0001-03

[引著格式]付强， 于会娜， 王婷，等. 麻疹患儿外周血辅助性T细胞17及其效应因子白介素-17的表达及临床意义[J]. 长江大学学报(自科版),2016,13(30):1～3,11.