饲料中黄曲霉素B1的检测

李倩

（辽宁省葫芦岛市兽药饲料畜产品质量安全检测中心，辽宁葫芦岛　125000）

饲料中黄曲霉素B1的检测

李倩

（辽宁省葫芦岛市兽药饲料畜产品质量安全检测中心，辽宁葫芦岛125000）

饲料中的霉菌毒素污染问题早在上个世纪60年代已引起各个国家和地区的普遍重视。据世界粮农组织（FAO）统计，全球每年由于霉菌及其毒素污染饲料、粮食及食品所造成的损失高达数亿美元。

哺乳类动物摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料或食品后，通过羟基化作用转化成黄曲霉毒素M1，物理化学性质相当稳定，不被巴氏消毒法破坏，所以在一般的巴氏消毒牛奶中残留的黄曲霉毒素对人体的危害相当严重。而牛奶中黄曲霉毒素残留的源头，还是我们饲喂动物所用的饲料。

1　实验部分

1.1实验材料发霉饲料：鸡全价配合饲料（葫芦岛南票区沙锅屯忠成饲料厂）。

1.2实验仪器小型粉碎机（天津泰斯特）；分样筛；电动震荡器（IKA）；移液器（Eppendorf）；酶标仪（Model 680）；黄曲霉素B1（AFB1）试剂盒（北京华安麦科生物技术有限公司）；离心机（Throme）；分析天平（赛多利斯BS224S）。

1.3实验试剂甲醇（SIGMA）；去离子水（屈臣氏）。

1.4试剂盒组成包被抗体的酶标反应板（96T）；标准品5瓶；AFB1酶标物；AFB1抗试剂；底物液A液；底物液B液；终止液；浓缩洗涤液。

1.5溶液的配制洗涤工作液：用去离子水将浓缩洗涤工作液按1:9体积比进行稀释。

60%甲醇：用去离子水将甲醇按3:2体积比进行稀释。

1.6样品的处理取堆放时间不同的五份饲料。每份分析测定用的样品应用大样（有毒霉粒的比例小，同时分布不均匀。为避免取样带来的误差必须大量取样，并将该大量粉碎样品均匀混合，才有可能得到确实能代表一批样品的相对可靠的结果，因此采样必须注意）。经粉碎与连续多次四分法缩减至0.5～1kg，全部粉碎。样品全部通过20目筛，混匀，取样时应搅拌均匀。

取5g有代表性的样品置入50mL离心管中，加入60%甲醇12.5mL与其混合；于震荡器上剧烈震荡10min，取液体于4000r/min离心5min，再用定量滤纸过滤；取上清液1mL，再加入4mL去离子水，震荡摇匀，取50μL进行分析。样品稀释倍数为25。

1.7试样分析

（1）将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上。

（2）取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放入原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封。

（3）编号:将样本和标准品对应微孔按序编号，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

（4）加入标准品或样本50μL到对应孔中，加入AFB1酶标物50μL/孔，再加入AFB1抗试剂50μL/孔，轻轻震荡混匀，用盖板膜盖板后25℃避光环境中反应30min。

（5）小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250μL/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干。

（6）加入底物液A液50μL/孔，再加入底物液B液50μL/孔，轻轻震荡混匀，盖板后25℃避光环境中反应15min。

（7）加入终止液50μL/孔，轻轻震荡混匀，设定酶标仪于450nm处，测定每孔的吸光度值。

2　结果与讨论

测得标准曲线如表1，回收率为97.6%。

表1　标准曲线参数

根据测得的吸光度值，利用Ridasoft Win软件进行数据的处理和分析，最终测得五份样品的AFB1含量，结果如下：

表2　样品中AFB1的含量

根据实验结果，得知发霉饲料堆放天数与AFB1含量的关系如下：

表3　饲料堆放时间与AFB1含量关系

通过表3看到发霉饲料堆放的时间越长，所产生的AFB1的浓度越大。所以，在贮存饲料及运输过程中应严格控制温度和水分，保持环境通风干燥。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．11.109