脐带血干细胞治疗原发性SS合并周围神经病的疗效研究

张敏，聂淑科，张清安，张允建

脐带血干细胞治疗原发性SS合并周围神经病的疗效研究

张敏，聂淑科，张清安，张允建

目的观察脐带血干细胞移植治疗原发性干燥综合征（SS）伴周围神经病患者的临床疗效。方法前瞻性纳入2010年1月～2014年6月治疗的原发性SS合并周围神经病患者30例，随机分为对照组和干细胞组（n=15），对照组给予常规抗风湿及营养神经治疗，干细胞组在对照组治疗基础上给予脐带血干细胞静脉注射（单次干细胞数量为5.0×107，每3 d 1次，共3次）。分别于治疗前及治疗3个月后，采用Fugl-Meyer运动量表（FMA）和四肢肌电图检查评估两组四肢运动功能及神经功能恢复情况。结果治疗前两组的FMA评分及神经传导速度差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后，两组的FMA评分及正中神经、桡神经及腓肠神经传导速度均较治疗前显著改善，而干细胞组改善幅度优于对照组（P＜0.05）。结论脐带血干细胞治疗有助于恢复原发性SS伴周围神经受损的神经功能。

脐带血；干细胞，原发干燥综合征；周围神经病；神经功能

原发性干燥综合征（SS）是常见的自身免疫性疾病，主要累及外分泌腺，临床表现为口干、眼干，唾液及眼泪减少，同时也可累及神经系统、肾脏及血液系统等多个系统［1］。约有10%～40%的原发性SS患者合并周围神经受损，严重影响患者的生活质量和工作，同时加重其经济负担［2］。近年来，大量研究表明，间充质干细胞可分化为神经细胞，并可促进髓鞘的再生和再髓鞘化［11］，促进周围神经及中枢神经功能的恢复。人脐带血来源丰富，采集过程简便，含有丰富的造血干/祖细胞，不存在胚胎干细胞的伦理和成瘤性问题，亦不存在自体骨髓间充质干细胞的高龄患者细胞治疗和分化能力下降的问题，在细胞治疗和再生医学的应用中有巨大的潜力和前景［3］。目前国内尚无脐带血治疗原发性SS合并周围神经病的研究。本研究对原发性SS合并周围神经病的患者进行脐带血干细胞治疗，观察对周围神经功能的修复效果。

1 资料与方法

1.1 病例资料选择2010年1月～2014年6月在荆门市神经内科住院的30例SS合并周围神经病变的患者，均符合2002年国际风湿学年会修订的干燥综合征诊断标准［4］。排除标准：其他原因引发的周围神经病变，如尿毒症、脊椎病、重金属中毒；正在或曾服用过神经毒性药物；合并糖尿病、甲状腺功能亢进症、长期饮酒、腰椎病等。30例患者按入院时间完全随机设计分为两组各15例，对照组：男2例，女13例；年龄36～59（46.73±6.30）岁。干细胞组：男3例，女12例；年龄35～57（48.13±6.92）岁。两组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），患者均签署治疗知情同意书，所有患者的治疗方案均经医院医学伦理委员会批准。

1.2 治疗方法对照组采取常规治疗模式，给予强的松1 mg/kg，1次/d；羟氯喹0.2 g，2次/d；肌肉注射鼠神经生长因子30 μg，1次/d，连续治疗2 w。干细胞组在对照组治疗基础之上，给予脐带血干细胞治疗，具体方法如下：

1.2.1 干细胞提取在我院妇产科专科医生协助下，选择无血液系统传播疾病的健康产妇，签署知情同意书，采集脐带血，严格无菌操作。于产妇分娩后取脐带血100 ml，采用脐带血细胞分离试剂盒（济南赛尔生物科技有限公司）分离脐带血干细胞：（1）去除血细胞：将采集的脐带血与A液混匀，然后再加入B液，彻底混匀，室温静置于25 min，可见红细胞沉淀至底层；（2）使用高压灭菌的移液管吸取上清后，2500 r/min离心5 min，弃上清，生理盐水稀释收集细胞；（3）向50 ml左右的干细胞稀释液中加入25 ml C液，取中间细胞悬浮液于另一含有25 ml的C液，1800 r/min离心30 min后，吸取中间云雾状细胞层，加入生理盐水至50 ml后，2500 r/min离心5 min，弃上清；（4）生理盐水稀释混匀，1800 r/min离心3 min，反复5次后，取底层细胞悬液保，调节细胞浓度至1.0×107/ml，冰水浴保存。

1.2.2 干细胞移植患者签署同意书后，完成术前检查，将5 ml细胞悬液（细胞浓度为1.0×107/ml）用生理盐水稀释为50 ml静脉滴注，用生理盐水100 ml冲管，分别在入院后第2、5、8 d各滴注1次，共3次。

1.3 疗效评估分别在患者入院后第1 d和治疗3个月后，进行下述检查：（1）Fugl-Meyer运动功能［12］评估：每项0～2分，其中0分：无任何运动；1分：部分运动；2分：正常运动。评判标准：＜50分：严重运动障碍；50～84分：中度运动障碍；85～100分：轻度运动障碍。（2）肌电图检查：采用肌电图诱发定位仪（型号NDI-092，上海海神医疗电子仪器有限公司）检查尺神经、正中神经、桡神经、胫神经、腓肠神经、腓浅神经神经感觉支等的神经传导速度。

1.4 统计学方法数据应用SPSS16.0统计软件进行处理，计量资料以x±s表示，组内治疗前后比较采用配对t检验，组间比较采用独立样本t检验；计数资料用例和率表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗前后运动功能评分及神经传导速度测定

治疗前，两组的FMA评分及四肢周围神经传导速度差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后，两组的FMA评分及正中神经、桡神经及腓肠神经传导速度均较治疗前显著改善，而干细胞组改善幅度优于对照组（P＜0.05，表1）。

2.2 免疫排斥反应及不良反应干细胞组未见严重不良反应及免疫排斥现象。

3 讨论

原发性SS伴周围神经病的发病机制目前还未完全明确，目前普遍认为有以下两种假说：（1）SS引起的血管炎与免疫复合物介导的免疫及淋巴细胞活化有关［5］；（2）细胞免疫或者体液免疫介导的抗神经元免疫反应［6］。腓肠神经活检表明，神经外膜有大量炎性细胞浸润，腓肠神经有严重的脱髓鞘表现，据此推测T淋巴细胞浸润后根神经节是感觉神经受损的主要原因，而且体液免疫也与发病有关［7］。总之，原发性SS神经受损与免疫功能紊乱密不可分。由于临床上缺乏有效缓解周围神经受损的方法，给患者及其家庭带来严重的负担。

治疗原发性SS并发周围神经病的关键在于改善周围神经的血供，抑制神经细胞周围的免疫反应，促进神经细胞的再生。大量研究表明，脐带血间充质干细胞进入体内后能被诱导分化为神经细胞、胶质细胞、血管细胞等，同时能分泌大量的细胞营养因子，如脑源性神经营养因子、血管内皮生长因子、碱性成纤维生长因子等，均可促进神经的再生［8］，还可分泌外源性基质细胞衍生长因子等促进血管再生［9］，干细胞还可以促进Treg/Th17细胞亚群平衡诱导的免疫耐受参与调节免疫，能减轻炎性反应，抑制异常免疫，帮助免疫系统恢复正常［10］。干细胞这些分化和分泌功能，能从SS并发周围神经病的发病机制上解决神经受损问题。本研究表明，脐带血干细胞治疗SS并发周围神经病能明显改善患者周围神经的传导速度，从而改善患者肌力，提高患者的生活能力。

表1 两组治疗前后运动功能评分及神经传导速度测定（n=15）

脐带血干细胞是间充质干细胞的一种，来源充足，其不能识别异体基因抗原标准簇，并且因缺少免疫激活相关信号通路而免疫耐受，移植物抗宿主反应发生率低；同时不存在自体骨髓间充质干细胞因高龄患者其细胞治疗和分化能力下降的问题，与骨髓间充质干细胞相比其更为原始，扩增能力更强；从脐带处取血，获取方便，应用不涉及伦理问题，在临床干细胞治疗中有非常广阔的应用前景。本研究中并未发现明显的免疫排斥和不良反应，表明通过静脉途径输注脐带血干细胞治疗原发性SS合并周围神经病是安全可靠的。

本研究的不足之处在于，由于原发性SS合并周围神经病变的患者发病率较低，本研究无法纳入足够例数的样本。同时缺乏长期的随访研究和深入的机制阐述，移植后远期的安全性和干细胞分化过程中的具体机制等，还需要下一步深入研究。

综上所述，脐带血干细胞治疗是一种具有巨大潜力的治疗神经系统相关疾病的方法，其有助于恢复原发SS伴周围神经受损的神经功能，为临床治疗决策提供了重要参考。

［1］Gary S.Firestein编著；栗占国，唐福林主译.凯利风湿病学［M］.北京:北京大学医学出版社，2011:1217-1238.

［2］Delande S，Seae J，Fauchais AL，et a1．Neurologic manifestations in primary Sjogren's syndmme:a study of 82 patients［J］．Medicine，2002，83（5）：280．

［3］顾东生，刘斌，韩忠朝.脐带血干细胞的基础与应用研究［J］.生命科学，2006，18（4）：323-327.

［4］Vitali C，Bombardieri S，Jonsson R，et a1．Classification criteria for Sjogren's syndrome：a revised version of the European criteria proposed by the American-European consensus group［J］．Ann Rheum Dis，2002，61：554-558．

［5］李越星，吴丽娟，陈清棠．干燥综合征患者伴神经系统损害7例临床及病理变化［J］．中华神经科杂志，2001，34（6）：344-345．

［6］吴东海，王国春.临床风湿病学［M］.北京：人民卫生出版社，2008:320.

［7］张英爽，万宇，张斌，等.干燥综合征患者伴周围神经病变的临床电生理及病理特点［J］．中华医学杂志，2014，11：855-857.

［8］Hagg T.Fromneurotransmitterstoneurotrophicfactorsto neurogenesis［J］.Neuroscientist，2009，15（1）:20-27.

［9］Grochot-PrzeczekA，DulakJ，JozkowiczA.Therapeutic angiogenesis for revascularization in peripheral artery disease［J］. Gene，2013，525（2）:220-228.

［10］Belmont HM．Treatment of systemic lupus erythematosus-2013 update［J］．Bull Hosp Jt Dis，2013，71（3）：208-213．

［11］Chen CJ，0u YC，Liao SL，et a1．Transplantation of bone marrow stromal cells for peripheral nerve repair［J］．Exp Neuml，2007，204（1）：443-453．

［12］闫国平，臧大维，王志芬.低频电刺激周围神经对脑梗死偏瘫伴偏身感觉障碍患者疗效的影响［J］.中华物理医学与康复杂志，2009，31（6）:397-399.

Research on curative effects of umbilical cord blood stem cell transplantation on patients with primary Sjogren's syndrome associated with peripheral neuropathy

Zhang Min1，Nie Shuke2，Zhang Qing'an1，Zhang Yunjian21.Department of Neurology，the First People's Hospital Jingmen City，Jingmen，Hubei，448000，China；2.Department of Neurology，Xiehe Hospital of Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan，Hubei，430022，China

ObjectiveTo investigate the clinical curative effects of the umbilical cord blood stem cell transplantation on patients with primary Sjogren's syndrome（SS）associated with peripheral neuropathy.MethodsThirty patients with primary SS associated with peripheral neuropathy treated between January 2010 and June 2014 were respectively selected and randomly divided into control group and stem cell group（15 cases in each group）.Both groups were given the conventional anti-rheumatic and neurotrophic treatment，while the stem cell group also received the intravenous injection with umbilical cord blood stem cells（5.0×107per time，once every three days，3 times in total）.Fugl-Meyer motor scale and limb EMG were used to evaluate the quadruped locomotion function and rehabilitation of nerve function of the two groups before and three months after the treamtent.ResultsThere was no significant difference in the FMA scores and nerve conduction velocity between the two groups（P＞0.05）.After the treatment，compared with the situation before the treamtent，the FMA scores and nerve conduction velocity of median nerve，radial nerve，and sural nerve in the two groups were significantly improved after the treatment，and the improvement extent in the stem cell group was superior to that in the control group（P＜0.05）.ConclusionThe umbilical cord blood stem cell transplantation can recover the nerve function damage in patients with primary SS associated with peripheral neuropathy.

umbilical cord blood；stem cell；primary Sjogren's syndrome；peripheral neuropathy；nerve function

R 749.24

A

1004-0188（2016）05-0472-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.05.003

2015-06-04）

荆门市2012年市级研究与开发引导计划项目（2012YD34）

448000湖北荆门，荆门市第一人民医院神经内科（张敏，张清安）；华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科（聂淑科，张允建）