杨 洁 田 梅 赵兴鑫 崔荣飞
(石家庄市畜产品质量监测中心,河北石家庄 050000)
牛奶黄曲霉毒素的检测方法
杨 洁 田 梅 赵兴鑫 崔荣飞
(石家庄市畜产品质量监测中心,河北石家庄 050000)
黄曲霉毒素(Aflatoxin,AF)是一类化合物,化学结构类似,是二氢呋喃香豆素的衍生物,由黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生。寄生曲霉菌产生黄曲霉B1、B2、G1和G2,其中黄曲霉毒素B1是强致癌物质。黄曲霉毒素能破坏细胞膜的稳定性,损害人畜的肝脏和肾脏。可导致人患肝癌甚至死亡,使畜禽减少增重,降低免疫力,减少繁殖率。
黄曲霉毒素已证实是人类癌症的一个重要的致癌源,1993被世界卫生组织(WHO)列为I类致癌物。至今已分离出的黄曲霉毒素及其衍生物有20多种,主要是B1、B2、G1、G2及其代谢产物M1、M2。在天然食物中以黄曲霉毒素B1最为多见,危害性也最强,黄曲霉素M1、M2是黄曲霉毒素B1的代谢产物,是从牛奶中发现。
由于谷物很容易被黄曲霉毒素污染,尤其是玉米和花生,因此各个国家对饲料中的黄曲霉毒素B1和牛奶中的黄曲霉毒素M1都规定了限量值,却不能要求完全不可检出。
动物食用含有黄曲霉毒素的饲料后,一部分蓄积在动物的体内,另一部分进入乳汁和尿液中,转化率一般3.45%~11.39%。因此,为了保证牛奶中的黄曲霉毒素M1不超过0.5μg/kg,美国食品与药品监督管理局(FDA)规定饲料中的黄曲霉毒素B1不得超过30μg/kg。
我国GB 13078-2001《饲料卫生标准》对饲料中的黄曲霉毒素限量也有着严格要求。牛奶中黄曲霉毒素M1的限量,我国与美国、日本一致,都是0.5μg/kg,欧盟成员国以及与欧盟有贸易的非洲、亚洲、拉丁美洲部分国家相对严格,为0.05μg/kg,而欧盟对婴幼儿配方食品,包括婴幼儿配方牛奶则限量0.025μg/kg。
表1 主要国家乳及乳制品中AFM1限量标准
全世界每年大约有25%的谷物受到霉菌毒素的影响,FAO/ WHO明确规定:谷物中黄曲霉素B1的含量不得超过20μg/kg,否则禁止投放市场。
黄曲霉毒素M1结构稳定,一旦产生便很难被破坏,牛奶常见的三种消毒方法(巴氏消毒法、高温快速(HTST)的巴氏消毒、超高温(UHT)灭菌)都无法破坏其结构。因此,牛奶中黄曲霉毒素M1的含量测定十分重要。
该法利用酶联免疫竞争原理,首先将抗AFM1抗体包被于固相的聚乙烯微孔上,加入作为抗原的AFM1标准品或含AFM1的样品,同时加入AFM1酶结合物,与抗体进行免疫竞争反应,经洗板后,多余的AFM1-酶标抗体结合物被除去,再加入显色剂进行显色,通过标准品孔、样品孔的吸光度值比较来确定样品中是否含有AFM1。
此法快速简便,但只能作定性检测,检出限是0.5μg/kg,如需进行定量检测,则需选择其他方法,如:高效液相色谱法、薄层色谱法。
该法利用免疫亲和柱中含有的能够与AFM1特异性结合的单克隆抗体来吸附样品中的AFM1,再用乙醚等洗脱剂洗脱出吸附在免疫亲和柱中的AFM1,再加入三氟乙酸,最后用高效液相色谱仪进行检测。
此法检测限低,液态乳为0.008μg/L,乳粉为0.08μg/kg,可对牛奶进行定量检测。但免疫亲和柱成本较高,所以应用受限。
首先制备能够吸附AFM1的平板,将活性物质均匀涂成0.25mm的薄层,将浓缩的待检样品点在薄层板上,放入展开缸进行展开,样品出现分层后,用365nm紫外照射,利用荧光强度得到AFM1的浓度。
此法操作简便,可对AFM1进行定量检测,但灵敏度较差,有待进一步改进。
[1]王蕾.牛奶中黄曲霉毒素M1检测方法的建立及饲料中黄曲霉毒素对牛奶品质的影响[D].河南农业大学,2008.
[2]张宗城.乳与乳制品中黄曲霉毒素M1的限量确定及测定方法[J].农产品质量与安全,2010,(6):36-39.
[3]翟红艳,黄天壬.黄曲霉毒素与肝癌关系研究现况[J].医学研究杂志,2008,(1):93-95.