川归补肾通络胶囊的质量标准研究

梁朝锋 祁 俊 荣娟娟

安徽省芜湖市中医医院制剂室，安徽芜湖241000

川归补肾通络胶囊的质量标准研究

梁朝锋 祁 俊 荣娟娟

安徽省芜湖市中医医院制剂室，安徽芜湖241000

目的研究建立川归补肾通络胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱法对方中当归、川芎、三七、龙血竭、地龙进行定性鉴别。当归、川芎展开剂为环己烷-乙酸乙酯（9：1）；三七展开剂为三氯甲烷-甲醇-水（13：7：2）10℃放置的下层溶液；龙血竭展开剂为三氯甲烷-甲醇（9：1）；地龙展开剂为甲苯-丙酮（9：1）。采用UV-HPLC法对丹参中丹酚酸B含量进行测定。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18，流动相为乙腈-0.1%甲酸（22：78），流速为1.0mL/min，检测波长为286 nm。结果TLC法鉴别当归、川芎、三七、龙血竭、地龙，其方法专属性强；丹酚酸B在22.16～221.60μg/mL范围内线性关系良好（r2=0.9997），平均回收率为103.9%，RSD=1.82%；3批样品含量测定结果分别为4.83、4.46、4.74mg/g。结论本方法可用于川归补肾通络胶囊的质量控制。

川归补肾通络胶囊；薄层色谱；UV-HPLC；丹酚酸B

股骨颈骨折在临床上发生率＜为3.58%［1］，其治疗方法主要是复位内固定术，但由于其解剖血供的特殊性，术后股骨头坏死及骨不愈合成为骨科领域的难题［2］。

川归补肾通络胶囊由当归、川芎、丹参、三七、龙血竭、炮山甲、土鳖虫、地龙、鹿茸、龟甲、淫羊藿、肉桂、海星、人中黄、冰片15味药物组成，具有补益肝肾、强筋壮骨、活血通络、行气止痛的作用，主要用于股骨颈骨折术后股骨头缺血性坏死中晚期患者血瘀、肝肾亏虚型，症见疼痛、活动不利、骨不愈合等症。为了控制本制剂的质量，采用薄层色谱法对方中当归、川芎、三七、龙血竭、地龙进行定性鉴别，采用UVHPLC法测定了丹参中丹酚酸B的含量，建立了川归补肾通络胶囊的质量控制方法。

1 器与试药

高效液相色谱仪（安捷伦1200）；电子天平（Mettler，XP-205）；KQ-500DB数控超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；丹酚酸B（111562-201111）；当归对照药材（120927-201014）；川芎对照药材（120918-201110）；三七对照药材（120941-201108）；龙血竭对照药材（121252-201303）；地龙对照药材（120987-201107）；硅胶G板（青岛海洋化工厂分厂）；乙腈（HPLC/Spectro，TEDIA公司）；川归补肾通络胶囊样品（130704、130712、130719，均由芜湖市中医医院制剂室提供）；其他试剂如甲醇等均为分析纯。对照药材及对照品均购于中国食品药品检定研究；。

2 法与结果

2.1 当归、川芎TLC

取本品3 g，加乙醚30 mL，超声10min，滤过，滤液挥干，加乙酸乙酯1mL溶解，制成供试品溶液［3-5］。另取当归、川芎对照药材各0.5 g，同法制成1 mL乙酸乙酯液，作为对照药材溶液。按处方称取饮片（当归、川芎除外），按工艺及供试品制备方法制成阴性样品液。吸取上述溶液各2μL，咖于同一薄层板（硅胶G）上，展开剂为环己烷-乙酸乙酯（9：1），展开后取出晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。见图1。

图1 当归、川芎TLC色谱图

2.2 三七TLC

取本品5 g，加乙醚40mL，超声10min，滤过，滤渣挥尽乙醚味，加甲醇50 mL，超声30 min，滤过，滤液蒸干，加水50 mL溶解，用水饱和的正丁醇提取3次（50、30、30 mL），合并提取液，用5%氢氧化钠溶液洗2次（30mL/次），弃去洗涤液，用水洗3次（30mL/次），弃去水液，正丁醇液蒸干，加甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液［6-8］。另取三七对照药材0.5 g，加乙醚40mL，同法制成2 m L甲醇液，作为对照药材溶液。按处方称取饮片（三七除外），按工艺及供试品制备方法制成阴性样品液。吸取上述3种溶液各2μL，咖于同一薄层板（硅胶G）上，展开剂为三氯甲烷-甲醇-水（13：7：2）10℃放置的下层溶液，展开后取出晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热显色。见图2。

图2 三七TLC色谱图

2.3 龙血竭TLC

取本品3 g，加乙醚30mL，超声10min，滤过，滤液挥干，加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液［9-11］。另取龙血竭对照药材0.1 g，同法制成1mL乙酸乙酯液，作为对照药材溶液。按处方饮片（龙血竭除外），按照制备工艺及供试品制备方法制成阴性样品及阴性样品溶液。吸取上述3种溶液各2μL，咖于同一薄层板（硅胶G）上，展开剂为三氯甲烷-甲醇（9：1），展开后取出晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。见图3。

图3 龙血竭TLC色谱图

2.4 地龙TLC

取“2.3”项下样品溶液作为供试品溶液。另取地龙对照药材1 g，加三氯甲烷20 mL，超声30 min，滤过，滤液蒸干，加三氯甲烷1 mL溶解，制成对照药材溶液［12-13］。按处方称取饮片（地龙除外），按工艺及供试品制备方法制成阴性样品液。吸取上述3种溶液各1 μL，咖于同一薄层板（硅胶G）上，展开剂为甲苯-丙酮（9：1），展开后取出晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。见图4。

图4 地龙TLC色谱图

2.5 丹酚酸B的含量测定

2.5.1 色谱条件以Agilent Zorbax SB-C18（4.6mm×15mm，5μm）为色谱柱，以乙腈-0.1%甲酸（22：78）为流动相，检测波长为286 nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000［14-17］。

2.5.2 对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇制成每毫升含100μg的溶液，即得。

2.5.3 供试品溶液及阴性样品溶液的制备取本品装量差异下的内容物＜1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50m L，密塞，称定重量，超声处理（功率350W，频率40 kHz）30min，放冷后再称定重量，用75%甲醇补足重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。按处方称取除丹参外的其他饮片，按照工艺及供试品制备方法制成阴性样品及阴性样品溶液。

2.5.4 专属性试验取上述丹酚酸B对照品溶液、供试品及阴性溶液各10μL，按照色谱条件依法测定，丹酚酸B和供试品中其他组分分离度良好，阴性色谱峰在相应位置未检出相应峰。见图5。

2.5.5 线性关系的考察精密称取丹酚酸B适量，置50 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得0.4432 mg/mL对照品溶液。精密移取各0.25、0.5、1、1.5、2、2.5m L置5 mL量瓶中，用甲醇溶解定容，摇匀，配成22.16、44.32、88.64、132.96、177.28、221.60μg/mL的对照品溶液，摇匀，进样量为10μL。分别以峰面积和进样浓度为纵坐标（Y）、横坐标（X），进行线性回归，得回归方程为Y=10.394X-76.319，r2=0.9997，表明丹酚酸B在22.16～221.60μg/mL范围内呈现良好的线性关系。

2.5.6 精密度试验取供试液，进样10μL，重复进样6次，计算RSD=0.64%，表明精密度良好。

2.5.7 稳定性试验取供试液，精密吸取10μL，每隔2 h进样1次，连续进样10 h，测定峰面积，计算RSD=0.31%，表明样品在10 h内稳定。

2.5.8 重复性试验精密称取同一批次样品按照“2.5.3”项下方法制备供试品，平行6份，按照“2.5.1”项色谱条件进样测定计算，丹酚酸B的平均含量为4.80mg/g，RSD=1.18%。表明样品的重复性良好。

图5 川归补肾通络胶囊HPLC图谱

2.5.9 加样回收率试验精密称取已测定含量的样品（批号：130704）0.5 g，6份，加入丹酚酸B适量，按照“2.5.3”项下方法制备供试品，再按“2.5.1”项下色谱条件进行测定，得到平均加样回收率为103.9%（RSD= 1.82%），表明加样回收率符合规定。结果见表1。

表1 丹酚酸B加样回收率试验结果

2.5.10 样品测定按照“2.5.3”项下方法制备供试品，再按“2.5.1”项下色谱条件进行测定，计算样品中含量。结果见表2。

表2 3批样品含量测定

3 论

股骨头缺血性坏死目前具体的发病机制尚不明确［18］，但中医学认为［19］，骨折后脉络损伤，致经血积淤，骨折部位血运行不畅，导致股骨头缺血坏死。故治疗股骨颈骨折除了内固定外，还应以活血化瘀、散瘀强筋、培补固体的原则来服药治疗，以改善各关节周围血液循环，改变局部血氧情况，且通过中药增加骨骼强度，增强骨痂的力学性能，促进血管再生与重建，改变术后股骨头坏死及骨不愈合的状况，提高患者的生存质量。

川归补肾通络胶囊中当归补血活血，为君药，旨在祛除瘀血、养血生血；川芎、三七、龙血竭、丹参、炮山甲、土鳖虫、地龙具加强活血化瘀、破血消癥之效，为臣药；鹿茸、龟甲、肉桂、淫羊藿可补肾壮阳、强筋骨，益精血为佐药；冰片加强消肿止痛之效为使药。全方大多药物活血祛瘀兼顾补血养血，行气止痛而不伤正，各药配伍得当，相得益彰。

研究开发有效的临床经验方是现代中药复方研究的重要方向和热咖，但医院制剂的质量控制水平也要提高［20］。本研究建立了当归、川芎、三七、龙血竭、地龙的薄层色谱鉴别法和丹酚酸B的高效液相含量测定法，专属性强，操作简便，结果准确且重现性好，能够有效控制川归补肾通络胶囊的质量。

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Quality control of Chuangui Bushentongluo Capsules

LIANG Chaofeng QIJun RONG Juanjuan
Preparation Room，Wuhu Hospital of TCM，Anhui Province，Wuhu 241000，China

Objective To establish the quality standard of Chuangui Bushentongluo Capsules.Methods TLC was conducted for the content determination of angelica，rhizoma chuanxiong，notoginseng，dragons blood and lumbricus in the preparation.The developer for angelica and rhizoma chuanxiong were cyclohexane-ethyl acetate（9：1）；for the notoginsengwas low solution of chloroform-methanol-water（13：7：2）at10 degress；for the dragonsblood was chloroform-methanol（9：1）；for the lumbricus was toluene-acetone（9：1）.UV-HPLC was conducted for the content determination of salvianolic acid B.The column was Agilent Zorbax SB-C18with acetonitrile-0.1%formic acid solution（22：78）at a flow rate of 1.0 mL/min，the detection wavelength was 286 nm.Resu lts Angelica，rhizoma chuanxiong，notoginseng，dragons blood and lumbricus of TLC was specific.The linear ranges of salvianolic acid B was 22.16-221.60μg/mL（r2=0.9997）.The average recoveries ofwas 103.9%，RSD=1.82%.The results of the three batches of samples were 4.83 mg/g，4.46 mg/g and 4.74 mg/g.Conclusion Themethod can be used for the quality control of Chuangui Bushentongluo Capsules.

Chuangui Bushentongluo Capsules；TLC；UV-HPLC；Salvianolic acid B

R927.11

A

1673-7210（2016）05（c）-0146-04

2016-01-29本文编辑：赵鲁枫）

安徽省科技惠民计划（2015hm09）。

梁朝锋（1982-），男，硕士，主要从事中药制剂的开发研究。