基于透明质酸基质油茶油软膏的制备及其效果研究

朱雨涵 蒋革 罗锋 吴艳华 杨泽庆

摘要：[目的]筛选基于透明质酸基质油茶油软膏的配方，并观察其伤口愈合效果。方法]以正交设计法筛选出软膏最佳配比，并通过眼刺激实验、愈伤性实验观察其毒副作用及伤口愈合效果。[结果]透明质酸0.5g、油茶油15g、PEG-40氢化蓖麻油0.7g、卡波姆2g、蒸馏水81.7g、NaOH极少量可作为软膏的配方，通过动物实验得到无毒、无刺激性软膏，对伤口愈合有一定功效。[结论]上述配方所制备的基于透明质酸基质油茶油软膏性质稳定，可有效促进伤口愈合，为油茶油的开发提供科学依据。

关键词：透明质酸;油茶油;软膏剂

中图分类号：G642.0     文献标志码：A     文章编号：1674-9324（2016）42-0080-03

透明质酸（HA）[1]具有良好保湿作用，又是皮肤和其他组织中广泛存在的天然生物分子，被誉为理想的天然保湿因子，HA通过促进表皮细胞的增殖和分化以及清除氧自由基的作用，可促进受伤部位皮肤再生。

油茶油[1]，又名山茶（籽）油，是从山茶科山茶属植物普通油茶的成熟种子中提取的纯天然高级食用植物油。油茶油中不饱和脂肪酸含量高达80%，富含维生素E、茶多酚和山茶甙等物质。在治疗刀伤、烫伤、防紫外等方面有良好功效。油茶是我国特有的品种，分布于我国十三四个省，适生范围广泛[2-3]。然而茶油的利用还仅仅集中在食用方面，利用率极低。迄今为止，国内尚无上市的油茶油外用制剂及相关临床研究。

本次研究将具有保水及促进药物吸收作用的HA作为软膏的基质促进皮肤对油茶油的吸收，增大有效作用率，为油茶油多功能性的开发提供科学依据，具有重要意义和广泛应用前景。

一、仪器与材料

1.仪器。电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）;85-2型恒温磁力搅拌器（上海仪表集团供销公司）;GL—20G—II型离心机（上海安亭科学仪器厂）;DV215CD型电子天平（美国Ohaus公司）。

2.材料。油茶油（深圳华之贡食品有限公司）、透明质酸（新疆阜丰有限公司）、卡波姆（武汉诺辉医药化工有限公司）、PEG-40氢化蓖麻油、精确pH试纸（上海生工生物工程有限公司）、小鼠（大连医科大学）。

二、方法与结果

1.辅料的选择。PEG-40氢化蓖麻油是一种高效增溶剂，可作为乳化剂使软膏稳定均一。卡波姆[4]具有良好的乳化性、增稠性、助悬性和成膜性，对人安全，未见刺激性、过敏性或变应性反应。在pH值和浓度合适时，对眼、鼻均无刺激性，是迄今唯一被认为可作内服用的药品级树脂，于半固体制剂中使用浓度通常为0.5%—3.0%，可作为软膏的增稠剂。油茶油本身具有抑菌作用，故本品不需添加防腐剂。

2.实验方法。

（1）油茶油软膏剂制备方法。

水相：称取HA粉末、蒸馏水溶解并70℃预热30min。

油相：称取油茶油、PEG-40氢化蓖麻油70℃预热30min。

将水相缓缓加入油相，边加边搅拌，乳化20—30min成软膏。取卡波姆加入软膏中继续搅拌直至溶解，逐滴加入1%NaOH溶液调节pH至7.0—7.4。

（2）耐热、常温、耐寒实验。将制备的软膏分别置于45℃、20℃、-20℃环境下，观察分层、色泽、粘性、质地等情况，若产品未出现分层及液化现象，色泽透彻，粘性适中，质地细腻均一则为最佳[5]。

（3）离心实验。将制备的软膏分装至15ml离心管5—10ml，置于离心机3000r/min离心20min，观察油水分层情况，若产品未出现分层、色泽透彻、粘性适中、质地细腻均一则为最佳。

3.正交实验设计筛选主料配比。为寻求软膏剂主成分的最佳配比，采用正交设计法进行筛选，以寻得最佳范围的理化指标。

（1）因素与水平的确定。确定考察因素为透明质酸（A）、PEG-40氢化蓖麻油（B）、油茶油（C）的处方量，每个因素安排低、中、高3个浓度水平进行优选[6]，实验因素与水平安排见表1。

（2）正交实验筛选处方比例。以上述确定的3因素3水平按照L9（34）正交表的设计制备9份软膏样品。依据乳剂型软膏的性状以及经验，选取考察软膏的几项指标，并设定各项的权重。通过耐寒、耐热、常温、实验进行稳定性评分，时间设为24h（即温度对软膏的影响，各占总评分的25%）;离心稳定性评分（占总评分的25%）。综合评分10分为满分，其中综合评分=耐寒稳定性评分×25%+耐热稳定性评分×25%+常温稳定性评分×25%+离心稳定性评分×25%。正交设计表及结果分析见表2[7]。

极差R的大小反映了考察的3个因素对配方质量的影响程度，由表3的结果得知，3个因素对配方影响程度为A>C>B。得出最优实验结果为A3B2C3，即透明质酸0.01 g/ml，油茶油0.15 g/ml，PEG-40氢化蓖麻油0.005 g/ml。由于此处理结果未出现于上述实验中，故设计验证实验以确定该处理结果的正确性。经证实含HA（透明质酸）1% g/ml，PEG-40氢化蓖麻油0.5% g/ml和油茶油15% g/ml为最优实验组。结果见表3。

4.配比微调优化处方。

（1）乳化剂用量。为确定透明质酸和油茶油含量，将乳化剂PEG-40氢化蓖麻油中浓度（0.5%）范围内设置5个梯度：0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%并按1—5依次编号。通过耐寒、耐热、常温、实验进行稳定性评分确定其最佳配比为0.7%。结果见表4。

（2）辅料添加。考虑到透明质酸高浓度时不利于药品透皮吸收，且价格较为昂贵，为增强软膏效果，缩减高昂的成本，将透明质酸成分量减至0.5%，使用卡波姆增稠稳定。设置6个浓度梯度：0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%，通过耐寒、耐热、常温、实验进行稳定性评分确定其最佳配比为2.0%。结果见表5。

综上述实验结果，确定软膏的配方为透明质酸0.5g、油茶油15g、PEG-40氢化蓖麻油0.7g、卡波姆2g、蒸馏水81.7g、NaOH极少量。

5.油茶油软膏的质量检查。

（1）稳定性实验。取上述配方所得软膏样品在45℃、20℃、-20℃环境下分别放置10d，20d，30d，通过耐寒、耐热、常温实验进行稳定性评分并测定pH值（取适量蒸馏水，加入足量软膏至饱和，使用精密pH试纸测定）[8]。稳定性实验结果见表6。

（2）软膏的眼刺激性实验。选择健康成年小鼠6只（眼睛已做检查），雌雄各半，轻轻拉开小鼠一侧眼睛的下眼睑，将受试物0.05mL（1滴）滴入结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合1s，以防止受试物丢失。另一侧眼睛不处理作自身对照。1h、12h、24h后分别用强光照射并用放大镜进行观察。结果小鼠视线无异常，由此可知，软膏温和无刺激。

（3）软膏效果实验。选择健康成年小鼠6只，雌雄各半，分开饲养，将小鼠背部脊柱两侧毛脱去面积各约1㎡，消毒，再用注射针头将去毛消毒皮肤划破，以有渗血为度。给药一侧伤口，另一侧不处理作自身对照。12h给药一次，持续10d，每天拍照观察两侧伤口恢复情况[9-13]。结果证明软膏有良好的愈伤功效。

三、讨论

实验结果表明，以透明质酸0.5g、油茶油15g、PEG-40氢化蓖麻油0.7g、卡波姆2g、蒸馏水81.4g、NaOH极少量制备的油茶油软膏稳定性高，有抑菌愈伤功效，天然无刺激性、涂抹肤感油性适中，色泽好，因此可以采用此配方制备基于透明质酸基质油茶油软膏制剂。但对其透皮吸收功能以及祛疤等功效需要进一步地深入研究。

本制剂成分天然单纯，制备工艺简单，所使用成分均有益于人体。以透明质酸为基质更使膏体及皮肤保湿细腻，本实验制备的基于透明质酸基质油茶油乳剂型软膏天然保湿，愈伤祛疤，为进一步开发油茶油的应用奠定了基础。

参考文献：

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Study on Preparation and Effect of Oil Tea Ointment Based on Hyaluronic Acid

ZHU Yu-han，JIANG Ge，LUO Feng，WU Yan-hua，YANG Ze-qing

（College of life science and technology，Dalian University，Dalian，Liaoning 116622，China）

Abstract：[Objective]The formula of oil tea ointment based on hyaluronic acid matrix was screened，and observe the wound healing effect.[method] the optimal ratio of ointment was selected by orthogonal design method，and the effect of toxicity and wound healing was observed by eye irritation test.[results] hyaluronic acid 0.5g，camellia oil 15g，PEG-40 hydrogenated castor oil 0.7g，card 2g Bohm，distilled water 81.7g，NaOH very little can be as a paste formulation.Through animal experiments to be non-toxic，non irritating ointment，the wound healing has a certain effect.[Conclusion] the preparation of the above formula based on hyaluronic acid matrix oil ointment is stable，can effectively promote wound healing，and provides a scientific basis for the development of camellia oil.

Key words：hyaluronic acid;camellia oil;ointment