Survivin、NRP1在胃癌中的表达及其对胃癌预后的影响

张益明++赵茂森　朱仁武　顾叶春

[摘要] 目的 探讨存活素（Survivin）、神经纤维网蛋白1（NRP1）在胃癌中的表达及其对胃癌预后的影响。 方法 应用免疫组化法测定60例胃癌组织及60例正常胃黏膜组织中Survivin、NRP1表达情况，应用Kaplan-Meier计算Survivin阳性、NRP1阳性患者5年生存率，以Cox风险模型分析影响胃癌患者预后的危险因素。 结果 胃癌组织中Survivin阳性表达率为86.67%，NRP1阳性表达率为83.33%，而在胃正常黏膜组织中的表达分别为6.67%、5.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。Survivin阳性表达率与TNM分期、累及浆膜层、浸润深度、淋巴结转移有关（P<0.05）。NRP1阳性表达率与TNM分期、浸润深度及淋巴结转移有关（P<0.05）。60例胃癌患者术后随访5年，共56例获得随访，5年存活为25例，5年存活率为44.64%，其中Survivin阳性存活率35.42%（17/56），NRP1阳性存活率为32.61%（15/56）。经Cox风险分析可知，Survivin阳性、NRP1阳性是影响胃癌预后的独立危险因素。 结论Survivin、NRP1可能与胃癌发生及进展相关。Survivin、NRP1表达状态是胃癌预后的独立预测因素，其阳性表达可提示患者预后不良。

[关键词] 存活素；神经纤维网蛋白；胃癌；预后

[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）25-0008-04

The impact of Survivin， NRP1 in gastric cancer and its prognosis of gastric cancer

ZHANG Yiming ZHAO Maosen ZHU Renwu GU Yechun

Department of General Surgery， Wenzhou Hospital of Interated Traditional Chinese and Werstern Medicine in Zhejiang Province， Wenzhou 325001， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of Survivin， nerve fiber web protein 1（NRP1）in gastric and its impact on the prognosis of gastric. Methods The Survivin， NRP1 of 60 cases of gastric cancer and 60 cases of normal gastric mucosa were detected with immunohistochemistry method. The 5-year survival rate of Survivin positive， NRP1 positive were applicated with Kaplan-Meier.The risk factors of patients with gastric cancer were analyzed with Cox hazard regression model. Results Survivin expression in gastric cancer was 86.67%， NRP1 positive rate was 83.33%， while expression in normal gastric mucosa were 6.67%， 5.00%（P<0.05）. Survivin expression rate was related with TNM stage， involving the serosa， depth of invasion and lymph node metastasis（P<0.05）. NRP1 positive expression rate was related with TNM stage， depth of invasion and lymph node metastasis（P<0.05）. 60 gastric cancer patients were followed up for 5 years， 56 patients were followed up， 5-year survival of 25 cases， 5-year survival rate was 44.64%， which Survivin positive survival rate 35.42%（17/56）， NRP1 positive survival rate was 32.61%（15/56）. Survivin positive， NRP1 positives were independent risk factors for gastric cancer prognosis with Cox risk analysis. Conclusion Survivin， NRP1 may occur with gastric cancer and related progress. Survivin， NRP1 expression status is an independent predictor of prognosis of gastric cancer， and its expression may indicate a poor prognosis.

[Key words] Survivin； Neuropil protein； Gastric cancer； Prognosis

胃癌的死亡率居我国恶性肿瘤的首位，癌细胞侵袭及转移是导致胃癌死亡的重要因素之一，因此对影响胃癌侵袭及转移的相关因素进行分析对预测胃癌预后具有重要的意义[1-2]。近年来研究指出[3]，通过检测胃癌相关蛋白凋亡及表达情况对预测胃癌侵袭及转移具有一定的作用。存活素（Survivin）属凋亡抑制因子IAPs家族中一员，具有广谱恶性肿瘤表达特效。Survivin蛋白表达与多种恶性肿瘤侵袭、转移及预后有关[4-5]。神经纤维网蛋白1（NRP1）是血管内皮生长因子（VEGF）新型的受体，在多种恶性肿瘤细胞中均为高表达，且参与恶性肿瘤发生及进展过程[6-7]。本研究应用免疫组织化学法检测胃癌组织Survivin、NRP1表达情况，并结合临床病理特征，探讨Survivin、NRP1表达与胃癌侵袭、转移及预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集2010年6月～2011年6月本院普外科胃癌根治手术60例患者的临床资料，患者术前均未接受过放化疗治疗，其中男35例，女25例，年龄48～74岁，平均（56.8±2.2）岁。肿瘤直径< 5 cm 22例，≥5 cm 38例，累及浆膜层 35例，低分化腺癌30例，中高分化腺癌30例。TNM分期：Ⅰ期 20例，Ⅱ期18例，Ⅲ期 14例，Ⅳ期 8例。淋巴结转移28例，无淋巴结转移 32例。肿瘤浸润：T1～T2 32例，T3 28例。病理组织的临床分类参照WHO胃癌临床病理学分类，每份病理标本均留取肿瘤组织及距肿瘤5 cm以上的正常胃黏膜组织，病理组织离体后迅速将其置于液氮中保存以便行病理组织学分析。

1.2 免疫组织化学法

应用免疫组化法测定Survivin、NRP1蛋白表达，Survivin鼠抗人单克隆抗体购于Sigma公司，NRP1鼠抗人单克隆抗体购于NeoMarkers公司，Survivin试剂盒购于上海酶联实业有限公司，NRP1试剂盒购于上海钰博生物科技有限公司。染色步骤具体如下：将胃癌组织及正常胃黏膜组织标本蜡块切成4 μm厚切片，常温下乙醇梯度脱水，二甲苯脱蜡，应用3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，采用0.01 mol/L磷酸缓冲液冲洗标本2次，常温下应用正常羊血清工作液封闭样本10 min，依次加入Survivin鼠抗人单克隆抗体及NRP1鼠抗人单克隆抗体，采用磷酸缓冲液冲洗标本2次，加入辣根过氧化物酶标记的链霉素工作液，于37℃恒温培养箱中（型号：DNP-9022；上海精宏实验设备有限公司）孵育25 min，经磷酸缓冲液冲洗后，经DAB染色，苏木素复染，采用中性树胶封固。

结果判定参考相关文献[8]：胞浆内呈现棕黄色为Survivin阳性，呈现红褐色荧光为NRP1阳性。根据染色深度及染色面积进行计分，Survivin染色深度评分：0分为无显色或显色不清，1分为浅黄色，2分为深黄色，3分为褐黄色。染色面积：0分：0%～5%，1分：>5%～35%，2分：>35%～65%，3分：>65%。染色深度与面积之和≥1分则为Survivin免疫组化法染色阳性。NRP1染色深度评分：0分为无显色或显色不清，1分为浅红色，2分为深红色，3分为红褐色。染色面积：0分：0%～5%，1分：>5%～35%，2分：>35%～65%，3分：>65%。染色深度与面积之和≥1分则为NRP1免疫组化法染色阳性。

1.3 统计学方法

采用SPSS19.0对数据进行分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料用率表示，采用χ2检验，应用Kaplan-Meier计算生存率，影响胃癌术后预后的危险因素应用Cox回归分析，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Survivin、NRP1在胃癌组织及正常胃黏膜组织中的表达

胃癌组织中Survivin阳性表达率为86.67%，NRP1阳性表达率为83.33%，而在胃正常黏膜组织中的表达分别为6.67%、5.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2 Survivin、NRP1表达与胃癌组织临床特征的关系

Survivin阳性表达率与TNM分期、累及浆膜层、浸润深度、淋巴结转移有关（P<0.05）。NRP1阳性表达率与TNM分期、浸润深度及淋巴结转移有关（P<0.05）。

2.3 Survivin、NRP1阳性患者预后因素分析

60例胃癌患者术后随访5年，共56例获得随访，5年存活为25例，5年存活率为44.64%，其中Survivin阳性存活率35.42%（17/56），NRP1阳性存活率32.61%（15/56）。肿瘤直径、累及浆膜层、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移、Survivin阳性、NRP1阳性与胃癌5年生存率显著相关（P<0.05）。

2.4 影响胃癌术后生存率的Cox多因素分析

经Cox多因素分析，患者临床分期、淋巴结转移、Survivin阳性、NRP1阳性是影响胃癌远期预后的独立危险因素。

3 讨论

Survivin是目前发现最强的凋亡抑制因子，具有调节细胞有丝分裂及抑制细胞凋亡的双重作用。大量研究发现[9-12]，Survivin与恶性肿瘤发生及进展有密切的关系，Survivin不仅能抑制凋亡蛋白酶活性，阻断凋亡信号传导，而且能在细胞有丝分裂前期特异性结合纺锤体微管导致肿瘤细胞异常分裂及增殖。孙娟等[13]研究指出Survivin在所有能被检测的恶性肿瘤组织中均有不同程度的表达，且与多种肿瘤生物学特征有密切的关系。Cheng等[14]研究指出，Survivin在胃癌组织中阳性表达率为85.2%，且Survivin阳性表达与胃癌侵袭、转移及淋巴管浸润有密切的关系。本研究应用免疫组化法测定胃癌组织中Survivin表达情况，结果显示，60例胃癌组织患者中Survivin阳性表达率为86.67%，而在胃正常黏膜组织中的表达分别为6.67%，差异有统计学意义（P<0.05），且Survivin阳性表达率与TNM分期、累及浆膜层、浸润深度、淋巴结转移有关，因此通过检测胃癌组织中Survivin表达能有效判断胃癌发生及进展情况。本研究发现，Survivin表达与临床分期、淋巴结转移等传统病理学指标一样，是影响胃癌术后5年生存率的独立危险因素，因此，作为TNM及淋巴结转移的补充，可将Survivin阳性表达作为判断胃癌预后的有价值指标之一。

NRP1在肿瘤发生及病情进展中的作用机制非常复杂[15]。Shahrabi等[16]发现NRP1除了在肿瘤细胞中表达外，还可在血管内皮细胞中表达，从而提示NRP1可能在这两个位置发挥作用。在内皮细胞中，NRP1作为受体，可与VEGF结合，并增加其活性，从而增强VEGF诱导血管内皮细胞有丝分裂及细胞趋化性，进而促进肿瘤血管生成[17]。研究发现[18]，部分肿瘤细胞中无VEGF表达，因此NRP1在肿瘤细胞中可通过信号传导途径或与VEGF结合形成相关配体从而实现肿瘤的侵袭及转移过程。Talagas等[19]也发现，非小细胞肺癌患者肿瘤细胞中NRP1可通过调控P13K/AKT信号通路及上调VEGF表达水平等途径同时影响肺癌的远期预后。Shahrabi等[20]研究指出，NRP1表达与肿瘤细胞微血管生成及VEGF表达水平上调有密切的关系。本研究结果显示，正常胃黏膜组织中NRP1水平显著低于胃癌组织，NRP1水平与胃癌NRP1mRNA表达量与淋巴结转移、TNM分期等临床特征有关，表明NRP1高表达水平可促进肿瘤微血管生成并与胃癌侵袭及转移等生物学行为关系密切，通过测定胃癌组织中NRP1表达可判断胃癌侵袭性及转移性。此外，本研究经Cox风险模型分析显示，NRP1阳性表达是影响胃癌患者术后预后的独立危险因子，可作为评价胃癌病情发生、进展及预后的预测指标。

综上所述，Survivin、NRP1可能与胃癌发生及进展密切相关。Survivin、NRP1表达状态是胃癌预后的独立预测因素，其阳性表达可提示患者预后不良。

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（收稿日期：2016-07-01）