子实体组织分离法制备食用菌母种

王秀艳

（赤峰学院　生命科学学院，内蒙古　赤峰　024000）

子实体组织分离法制备食用菌母种

王秀艳

（赤峰学院生命科学学院，内蒙古赤峰024000）

针对食用菌价格飞涨,菌种供应严重不足的矛盾,开展利用地方食用菌资源，利用子实体组织分离法分离母种的可行性研究.研究结果表明,子实体组织分离法制备母种,可使生产成本大大降低,使菇农获得更好的经济效益，产生较好的社会效益.

子实体；菌丝；母种

食用菌在分类上属于菌物界真菌门，绝大多数属于担子菌亚门（如平菇、香菇），少数属于子囊菌亚门（如羊肚菌）.食用菌历来是世界人民喜爱的副食品，它具有很高的营养价值，含有丰富的蛋白质、有机酸、糖类、维生素、矿物质盐及少量的脂肪，维生素和矿质元素含量也非常丰富.

发展食用菌生产，对改善人民的食品结构，增加食品中的营养品种，提高食物的营养水平，增进国民的健康水平，都有极为重要的意义.食用菌不仅营养丰富，味道鲜美，脆嫩爽口的佳肴，而且还有很高的药用价值[1].

目前许多以食用菌制成的新药被陆续研制出来，如“猴头菌片”、“参杞灵胶囊”、“疏木甘宁食用菌胶囊”、“立爽食用菌胶囊”、“北虫草胶囊”、“美宝眠牌康眠胶囊”、“和胃猴菇精胶囊”、“脉根食用菌胶囊”等.可见进一步深入研究和探讨食用菌的药用价值及用途，必将给人类的卫生医疗事业带来更大的好处.

食用菌生产可改善和平衡农业生态环境，在工农业生产加工中的许多副产品以及下脚料，如木屑、玉米芯、玉米杆、高粱壳、棉籽壳以及牲畜粪便等都含有纤维素、半纤维素、木质素等.这些有机物质，很难被人类直接利用，牲畜的利用率也很低.常被白白浪费掉了，如果将它充分利用起来发展食用菌生产，便能将这些价值很低又很难以直接利用的有机养分，转变为人类可以直接利用的营养物质，为人类提供大量的优质食品.

1　实验材料

香菇子实体平菇子实体滑子菇子实体金针菇子实体双孢蘑菇子实体杏鲍菇子实体（购买于赤峰西城菜市场）

2　试验培养基

PDA斜面培养基：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂18-20克、蒸馏水1000毫升.

3　试验方法

本试验采用斜面培养法并使用常规培养方法进行菌丝培养，具体工艺流程如下：制备并检测PDA斜面培养基→选择种菇→处理种菇→分离接种→培养→鉴定

3.1制备PDA斜面培养基

选择质量较好的马铃薯（无病、未出芽、不干缩）洗净去皮，挖去芽眼，切成3㎜厚的薄片，称取200g,加水1000mL,煮沸10-15min，至酥而不烂的程度，用6层纱布过滤一次，取其滤液，加入琼脂20g,用小火加热至琼脂全部溶解，煮沸后加入葡萄糖20g，使药品全部溶解[2].制备好的培养基趁热分装到试管中，分装好的试管塞上棉塞，防止杂菌污染[3].

塞好棉塞的试管用三层报纸包扎好，竖直固定在搪瓷缸后放入高压锅内灭菌30min，灭菌压力为1.47×105Pa[3].

“‘煤炭老板！’我喊道，那急切的声音裹在呼出的热气里，在严寒中显得格外沉浊。”“‘不能马上’这两个词多么像钟声啊，它们和刚才听到的附近教堂尖塔上晚钟的声响混合在一起，又是怎样地使人产生了错觉啊！”

灭菌后，待灭菌锅内的温度降到60℃时取出试管然后制备成斜面，斜面长度约占试管总长度的3/4为宜[3].

凝固后的斜面培养基，在使用前应进行无菌检测，将斜面试管培养基置于30±1℃恒温培养箱中培养3d，如果3d后培养基表面光滑，无杂菌出现方可使用.

3.2处理种菇

3.2.1选择标准.采摘不能超过24小时，品系纯正，生长健壮，朵形美观，肉质肥厚，菌盖未完全展开，无腐烂无病虫害.3.2.2处理方法.将选好的种菇，剪掉菇柄，用75%的酒精棉球进行表面擦拭，放置于超净工作台内，用紫外线照射30分钟，准备接种.

3.3分离接种

将选择并处理好的种菇、解剖刀或者镊子、斜面试管培养基、酒精灯置于超净工作台内，紫外线照射30分钟，打开吹风机，点燃酒精灯，首先用镊子夹取子实体在酒精灯外焰上快速灼烧正反两面，然后纵向撕开菌盖，用镊子夹取黄豆大小的菌肉组织（不能带外部组织，夹取时用力不能过大，以免夹伤或夹死组织块），快速把组织块接入PDA斜面培养基的中部，塞上棉塞，整个过程要严格进行无菌操作，动作要快，尽量缩短斜面培养基暴露在空气中的时间，防止杂菌污染，连续操作，每种食用菌子实体分离3管.

3.4培养

将接入子实体组织块的试管，及时移入已消毒的培养箱或培养室内培养，温度控制在23±1℃左右，培养过程中及时观察记录，如有感染杂菌及时检出，避免感染其他试管.组织块分离后1～2天，菌丝即萌发，并在培养基上蔓延生长，经10～15天培养，菌丝长满试管斜面.

3.5测量与鉴定

一方面是测量试管内的菌丝生长长度和记录生长时间来计算满管时间，满管时间越短越好.

另一方面是观察菌丝的长势，具体包括菌丝的颜色、整齐度、浓密度和粗细方面的鉴定.洁白度高，生长整齐浓密，粗细均匀的为优质菌种[4].

4　结果与分析

从表1和图1可以看出，平菇、香菇、杏鲍菇组织块萌发最快、其次是双孢菇、最慢是金针菇和滑子菇，从定植时间来看平菇最快，其次是杏鲍菇、双孢菇、香菇、金针菇、滑子菇最慢，满管时间来比较最快的是滑子菇、其次是平菇、杏鲍菇、香菇、金针菇，最慢是双孢菇.

图1　食用菌菌丝各生长阶段时间比较

5　结论

5.1通过对平菇、双孢菇、香菇、金针菇、滑子菇和杏鲍菇分离的组织块菌丝生长的情况分析得出，用子实体组织分离法均能够培育出上述食用菌母种.

5.2六种食用菌在子实体组织分离法培育母种时，各母种之间的菌丝生长情况有所不同；

5.2.1萌发最快的是平菇、香菇和杏鲍菇，萌发时间都是18h；萌发最慢的是滑子菇和金针菇，分别是56.3h和56.2h.

5.2.2定植最快的是平菇和杏鲍菇，分别是56.3h和63.3h；最慢的是金针菇和滑子菇，分别是92.3h和93h.满管最快的是滑子菇和平菇，分别是7天和10天，满管最慢是香菇和金针菇，都是20天.

5.2.3菌丝长势各不相同，最适合子实体组织分离法培育菌种的是平菇，菌丝浓密洁白，粗细均匀；其次是香菇和滑子菇，菌丝洁白粗细均匀，但生长稀疏；双孢菇不适合用子实体组织分离法培育菌种，菌丝质量最差，菌丝细弱、稀疏、发黄、生长不旺盛.

〔1〕黄毅.食用菌栽培[M].北京：高等教育出版社，2008.7125-169.

〔2〕王桂芹，王秀艳.食用菌栽培.内蒙古科学技术出版社，2001.2-5

〔3〕王秀艳.VB1对平菇天达300液体菌种菌丝体和胞外多糖含量的影响[J].

〔4〕吴越.常见食用菌优良母种的质量鉴定.吉林农业，2012（24）.

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