AA3型连续流动分析仪测定山楂酒中总酚含量

张文叶，张磊，李小娟，吴庆伟，吴刚

（郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州450001）

AA3型连续流动分析仪测定山楂酒中总酚含量

张文叶，张磊，李小娟，吴庆伟，吴刚

（郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州450001）

采用AA3连续流动分析仪测定山楂酒中总酚含量。结果表明：标准曲线在0～500mg/L范围内有很好的线性关系（R2=0.999 9），精密度和准确度高，回收率在100％～110％之间，操作简便易行，能够满足对山楂酒中总酚含量进行定量分析。

连续流动分析仪；山楂酒；总酚

植物多酚是天然食物中存在的一大类植物化合物的总称，具有较强的抗氧化作用，同时具有抗肿瘤、防治心血管疾病、降血压、降血糖、抑菌抗病毒、预防泌尿系统感染、抗龋齿护齿及防紫外线照射等药理作用［1-3］。山楂中含有丰富的多酚类物质，Thomas等［4］在中国山楂果实中发现了40多种酚类化合物；而山楂酒中总酚含量与酒的抗氧化性呈正相关［5］。常用的测定总酚的方法一般为分光光度计法［6-7］，但是此法试剂配制、样品处理繁琐，消耗时间，不适合大量样品进样。

AA3型连续流动分析仪是一种现代化化学分析仪，近年来发展迅速。经典的连续流动分析仪一般由自动进样器、高精度蠕动泵、化学分析模块、比色计和数据处理系统组成。可以实现从取样到得出检测结果的全自动化操作，大大简化了分析作业，同时也减少了人为误差，具有操作简便、分析速度快、重现性好和应用广泛等特点［8］。目前报道的有夏颖毅等［9］应用AA3连续流动分析仪测定地表水中挥发酚含量；黄小红等［10］应用AA3连续流动分析仪测定地表水中总氮含量；张桃英等应用［11］AA3连续流动分析仪测定水中硫化物的方法研究。

本文初次应用AA3连续流动分析仪测定山楂酒中总酚含量，以期为山楂的开发利用及其研究提供理论参考。

1　材料与方法

1.1仪器与设备

AA3型连续流动分析仪：德国SEAL，配置有多酚反应模块，自动进样器，蠕动泵，比色计等，含AACE操作软件。

1.2主要试剂

铁氰化钾（AR）：天津市永大化学试剂有限公司；4-氨基安替比林（AR）：国药集团化学试剂有限公司；没食子酸（AR）：天津市光复精细化工研究所；氨水（25％～28％）：烟台市双双化工有限公司；Brij-35（22％）：德国SEAL。

1.2.1试剂配制

1.0％铁氰化钾溶液：精确称取5 g铁氰化钾于500mL烧杯中，然后用400mL超纯水溶解，转移至500mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度（加入0.5mL Brij-35）；1.0％4-氨基安替比林溶液：精确称取5 g4-氨基安替比林于500mL烧杯中，然后用400mL超纯水溶解，转移至500mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度；20％氨水溶液：准确量取330mL氨水于500mL容量瓶中，然后加入100mL超纯水混匀，最后定容至刻度（加入0.5mLBrij-35）。

1.3试验原理［8］

样品中的多酚物质在碱性条件下与铁氰化钾和4-氨基安替比林反应生成一种橙红色化合物，并且流入比色池，在510 nm波长下检测，结果由仪器软件分析处理。仪器工作原理由图1所示。

图1　总酚测定流程图Fig.1 Flow chartof totalpolyphenolsdeterm ination

1.4测定参数

取样速率50个/h；进样与清洗时间比：3∶2；基线：5.0％；主峰：75％；平滑：40；增益：35。

1.5试验步骤与方法

1.5.1标准曲线配制

准确配制5 g/L的没食子酸标准储备液，然后分别移取0、2、4、6、8、10mL于100mL容量瓶中，用超纯水定容至100mL，标准系列浓度分别为：0、100、200、300、400、500mg/L，然后用AA3连续流动分析仪上样分析。

对不同批次的山楂酒酒样进行分析，上样分析前样品经0.45μm的滤膜过滤，然后用超纯水稀释2倍～3倍，使待测样品中总酚含量在0～500mg/L范围内。

1.5.3仪器操作步骤

压好所用管路后，盖上泵压盘，依次打开检测器、蠕动泵、进样器、电脑等开关，先将各试剂管放入超纯水中，打开AACE6.10联机软件运行系统，待基线稳定后，将各管路放入对应的试剂中等待基线再次稳定。基线稳定后设置增益，然后运行系统对标准曲线及样品进行上样分析。样品依次进入进样器、蠕动泵、多酚分析模块、比色计、数据处理系统。全程使用AACE 6.10软件系统控制。

2　结果与分析

2.1标准曲线

上述试验条件下，配制的标准浓度系列（mg/L）与其信号值（峰高）具有良好的线性关系，回归方程y= 0.136x+0.189，相关系数R2=0.999 9，标准曲线见图2。

图2　总酚测定标准曲线Fig.2 Standard curve for determ ination of totalpolyphenols

2.2精密度测定

对同一山楂酒样进行测定，平行测定6次，结果见表1。

表1　精密度测定结果Table1 Resultsof precision determ ination

由表1可知，平行6次的结果标准偏差为3.82mg/L，相对标准偏差为1.39％，说明该方法有良好的精密度。

2.3准确度测定

准确配制一定浓度的标准样品，然后连续进样6次，结果见表2。

由表2可知，标样总含量为250mg/L，仪器测定平均值为255.76mg/L，相对误差为2.30％，说明该方法具有较高的准确度。

2.4加标回收率测定

取已知浓度的山楂酒样，平均分成6份，分别加入一定量的没食子酸标准溶液，然后按照上述方法测定其回收率。结果见表3。

由表3可知，该方法的回收率在100％～110％之间，平均回收率为106.43％，能够满足山楂酒中总酚含量的测定。

2.5山楂酒中总酚含量的测定

根据上述方法测定不同批次的山楂酒样，结果如表4所示。

表4　山楂酒中总酚含量Table4 Contentsof totalpolyphenols in haw thorn wine

由表4可知，测定的不同批次的山楂酒样中总酚含量在643.46mg/L～830.88mg/L之间。

3　结论

采用AA3连续流动分析仪测定山楂酒中总酚含量，标准曲线在0～500mg/L范围内具有较好的线性关系（R2=0.999 9），精密度和准确度高，回收率在100％～110％之间，操作简便易行，适合大批量上样，能够满足对山楂酒中总酚含量进行定量分析。

［1］HOLIMAN CH，HERTOGG L，KATANM B．Analysis and health effectsof flavonoids［J］.Food Chemistry，1996，57（1）：43-46

［2］吴东．浆果中活性多酚的生物功能［J］．科技信息，2009（25）：29-30

［3］荣茂，刘梅森，何唯平．天然功能性食品添加剂茶多酚［J］．中国食品添加剂，2004（2）：56-60

［4］Thomas F，Thierry H，Francoise M，et al.Phenolic profiles and antioxidative effects of hawthorn cell suspensions，fresh fruits，and medicinaldried parts［J］.Food Chemistry，2009，115：897-903

［5］Guifen H，Jialin S，Jinhua D，et al.Characteristics and antioxidant capacitiesof five hawthornwines fermented by differentwine yeasts［J］.InstituteofBrewing＆amp;Distilling，2013，119：321-327

［6］Shwartz E，Glazer I，Bar-Ya’akov I，etal.Changes in chemical constituents during the maturation and ripening of two commercially importantpomegranateaccessions［J］.Food Chemistry，2009，115（3）：965-973

［7］徐辉艳，孙晓东，张佩君，等.红枣汁中总酚含量的福林法测定［J］.食品研究与开发，2009，30（3）：126-128

［8］唐春晖，王文浩.Seal-AA3型连续流动分析仪测定水中挥发酚的方法探讨［J］.科技论文与案例交流，2015（5）：49-52

［9］夏颖毅，周军，蒋蕾蕾.AA3连续流动分析仪测定地表水中挥发酚的方法探讨［J］.现代科学仪器，2008（1）：82-84

［10］黄小红，别娜娜，周圣东.连续流动分析仪测定地表水中的总氮［J］.分析仪器，2010（4）：36-38

［11］张桃英，崔悦，曹冬.AA3型连续流动分析仪测定水中硫化物的方法研究［J］.中国卫生检验杂志，2013，23（5）：1115-1117

Determ ination of Total Polyphenols in Haw thorn W ine by AA3 Continuous Flow Injection Analysis Instrument

ZHANG Wen-ye，ZHANG Lei，LI Xiao-juan，WU Qing-wei，WU Gang
（College of Food and Bioengineering，Zhengzhou University of Light Industry，Zhengzhou 450001，Henan，China）

Based on AA3 continuous flow injection analysis instrument，the content of total polyphenols in hawthornwine was determined.The results suggested that the standard curve showed good linearity in the range of0-500mg/L（R2=0.999 9）.The method had highly accuracy and precision，and recovery ranged from 100％ to 110％，sample operation，it could meet the quantitative analysis of total polyphenols content in hawthorn wine.

continuousflow injectionanalysisinstrument；hawthornwine；totalpolyphenols

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.18.029

研究生科技创新基金项目（2014029）；河南省科技攻关项目（142102110061）

张文叶（1965—），女（汉），教授，硕士，研究方向：食品生物技术。

2015-10-23