不同产地珠子参的生药学鉴别和含量测定

李　佳　李慢中　邓晓露　邹海艳

(中医络病研究北京市重点实验室首都医科大学中医药学院，北京，100069)



不同产地珠子参的生药学鉴别和含量测定

李佳李慢中邓晓露邹海艳

(中医络病研究北京市重点实验室首都医科大学中医药学院，北京，100069)

目的：对云南、贵州、甘肃产的珠子参药材进行鉴别和含量测定。方法：应用性状、显微及薄层色谱方法对不同产地珠子参药材进行鉴别，显微鉴别方面采用石蜡切片及粉末临时制片进行显微特征观察；采用高效液相色谱法测定了药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量。结果：不同产地珠子参药材形状、颜色和晶体数量等特征具有一定差异，云南、贵州和甘肃产3个批次药材的含量分别为5.55%、1.98%和1.96%。结论：3个产地的珠子参药材的性状、显微特征及竹节参皂苷Ⅳa的含量差异较大，其中以云南产药材的质量较好。

珠子参；性状鉴别；显微鉴别；含量测定

珠子参来源于五加科(Araliaceae)植物珠子参PanaxjaponicusC.A.Mey.var.major(Burk.)C.Y.Wu et K.M.Feng 或羽叶三七PanaxjaponicusC.A.Mey.var.bipinnatifidus(Seem.)C.Y.Wu et K.M.Feng的干燥根茎，为历版《中华人民共和国药典(以下简称《中国药典》)和《云南省药品标准》收载品种。珠子参别名纽子七、疙瘩七、野三七等[1]，其味苦，性甘、微寒，归肝、肺、胃经，具有补肺养阴，祛癖止痛，止血等功效[2]，主要在我国少数民族地区使用，为苗族、彝族、白族等多民族共用药。现代研究表明，珠子参能增强机体造血功能和免疫功能[3-4]，具有镇痛镇静[5]、抗肿瘤、抗实验性溃疡，抗心肌缺血[6-7]等活性，日益受到研究者的关注。珠子参药材主产于云南，在陕西、四川、甘肃、贵州、西藏等地均有分布[8]，不同地区所产药材质量差异较大，本文分析了珠子参的本草记载，并采用2010版《中国药典》方法，对云南、贵州和甘肃3个产地的珠子参药材进行了鉴别和HPLC含量测定，为保证药材质量和临床疗效提供了参考。

1　药用历史

珠子参因其根茎呈串珠状或类圆球形而得名，始见于明代兰茂所著的《滇南本草》：“珠子参，味甘、微苦，性温、平。止血生肌，……。故土方：用珠子参为末，捻刀伤疮，收口甚速”[9]。此后，《本草从新》，《本草纲目拾遗》及《天宝本草》等本草中均有记载。珠子参在本草考证上一直存在争议，历代本草中记载的珠子参原植物主要有两类，除人参属植物外，桔梗科党参属植物莲座状党参CodonopsisrosulataW.W.Sm和鸡蛋参CodonopsisconvolvulaceaKurz.及其变种也做珠子参使用[10]，目前整理出版的《滇南本草》中珠子参植物附图源于《植物名实图考》中记载的“珠子参”，也为桔梗科党参属植物鸡蛋参。但余庆远著《维西见闻纪》中称珠子参：“茎叶皆类人参……味苦而性燥，远不及人参也”；《本草纲目拾遗》中记载：“《救生苦海》说‘血症用之，可代三七’”，而桔梗科鸡蛋参类植物主要有滋补强壮的功效，不具有活血化瘀作用，因此，有学者认为，《滇南本草》历经各代的增订、补注与传抄，有可能出现原植物错误，其所记载的珠子参应为五加科人参属植物[10]。

2　实验材料

2.1仪器与材料Agilent 1200高效液相色谱仪(配有四元泵、自动进样器、柱温箱和DAD检测器)；HW SY11-K电热恒温水浴(北京市长风仪器仪表公司)；101-OAB型电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；TK-218型恒温摊片烤片机(湖北泰维医疗科技有限公司)；Thermo SHANDON FINESSE 325(北京宏嘉泰业科技发展有限公司)、OLYMPUS偏光显微镜(BX61+DP72)，万分之一电子天平(德国Sartorius公司)。

2.2受试药物竹节参皂苷Ⅵa对照品(含量测定用，批号111861-201001)，购于中国食品药品检定研究院，人参皂苷R0对照品(含量测定用，批号14033108)购于成都普瑞法科技开发有限公司；三批珠子参药材分别购于云南昆明新螺狮湾药材市场，四川荷花池药材市场和兰州黄河药材市场，经北京中医药大学药学院张贵君教授鉴别为五加科植物珠子参PanaxjaponicusC.A.Mey.var.major(Burk.)C.Y.Wu et K.M.Feng的干燥根茎。乙腈为色谱纯(美国fisher scientific公司)，其他试剂为分析纯，水为娃哈哈纯净水。

3　实验方法

3.1组织横切制片取珠子参药材按常规石蜡法切片，经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、烘干、脱蜡步骤后，以番红和快绿染色，制成永久石蜡切片，显微镜下观察。

3.2粉末制片将珠子参药材粉碎，过60目筛，取适量粉末于载玻片上，水合氯醛透化，显微镜下观察。

3.3薄层色谱分别取3个产地的珠子参药材粉末1.0 g，加甲醇30 mL，超声处理40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL加热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次(20 mL，15 mL，15 mL)、合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5 mL加热使溶解，作为供试品溶液。另取竹节参皂苷Ⅳa对照品、人参皂苷R0对照品，加甲醇制成每1 mL各含2 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各1 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(5∶10∶0.5∶0.3∶3.5)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视。

3.4含量测定色谱条件：Agilent zorbax XDB C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈-0.2%磷酸水溶液(35∶65)为流动相；检测波长203 nm；柱温30 ℃；进样量20 μL。对照品溶液的制备：取竹节参皂苷Ⅳa对照品适量，精密称定，加60%乙醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：分别取三批竹节参药材粉末约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL称定重量，超声提取40 min，补足减失的重量，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，既得。

4　结果

4.1药材性状云南产珠子参呈圆锥形和扁圆球形，混有节间碎段。长0.5～2 cm，直径0.5～2.5 cm。表面淡黄白色、淡黄色至黄棕色，有明显的沟槽状纵皱纹，膨大部分的一侧或两侧有残存细的节间或有细小的不定根痕，偶有圆形凹陷的茎痕。质坚硬，断面较平坦，黄白色，有黄色点状树脂道。气微，味苦微甘。

贵州和甘肃产珠子参药材性状与云南产药材相似，主要区别在于药材多呈不规则菱角形，大小悬殊，表面颜色较深，为棕褐色或黄褐色，疣状突起明显，除有沟槽状纵纹外，有明显的皱缩状纹理。

图1　珠子参药材图

4.2显微鉴别

4.2.1根茎横切面云南产珠子参为木栓层为5～6层细胞。皮层稍窄，外侧为数列厚角细胞。维管束为无限外韧型，7～10束断续呈环状排列，射线宽。韧皮部有多数树脂道存在，呈类圆形。形成层明显。木质部束呈放射状排列，导管类圆形及类多角形。中央有髓，约占横切片的1/2，薄壁细胞含有草酸钙簇晶，并含淀粉粒。见图1-A。

与云南产珠子参比较，贵州和甘肃产药材根茎横切片主要区别在于，贵州产珠子参药材木栓层为5～8层细胞，维管束常7束断续呈环状排列，髓部较小，约占横切片的1/3；甘肃产珠子参木栓层为6～10层细胞，维管束10～12束断续呈环状排列，髓部较小，约占横切片的1/2～2/3；草酸钙簇晶众多，尤其是皮层及射线部位较多。见图1-B和1-C。

4.2.2粉末特征云南产珠子参药材粉末呈淡黄白色；木栓细胞表面观呈多角形，壁薄，草酸钙簇晶较多，棱角多宽钝，少数较尖。厚角细胞长圆形或类多角形，无色。树脂道呈长方形或细管状，内含淡黄至棕黄色分泌物。淀粉粒众多，多为单粒，类球形、卵形或椭圆形，脐点点状、裂隙状，层纹不明显，复粒由2～8个分粒组成，导管多为网纹，可见螺纹及梯纹导管。见图3。

与云南产珠子参相比，贵州产珠子参草酸钙簇晶较少，棱角多宽钝，淀粉粒复粒由2～4个分粒组成，甘肃产珠子参草酸钙簇晶众多，棱角多宽钝，淀粉粒复粒由2～4个分粒组成。

图2　3个产地珠子参药材根茎横切面图

注：A云南;B贵州;C甘肃。1.木栓层；2.皮层；3.韧皮部；4.形成层；5.木质部；6.髓部；7.树脂道；8.草酸钙簇晶。

4.2.3薄层鉴别上述3个产地的竹节参药材薄层色谱图见图4，由图可知，3个批次的药材的供试品色谱中，在与人参皂苷R0(Rf=0.20)和竹节参皂苷Ⅳa(Rf=0.48)对照品相应的位置上，均显示相同颜色的荧光斑点。

图3　珠子参粉末图

注：1.草酸钙簇晶；2.厚角细胞；3.导管；4.树脂道；5.木栓细胞；6.淀粉粒。

图4　珠子参的薄层色谱图

注：1.竹节参皂苷Ⅳa对照品；2.人参皂苷R0对照品；3.贵州产药材；4.甘肃产药材；5.云南产药材。

4.2.4含量测定采用2010版《中国药典》方法测定并计算3批珠子参药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量，云南、贵州和甘肃产药材的含量分别为5.55%、1.98%和1.96%，根据2010版《中国药典》规定，珠子参中含竹节参皂苷Ⅳa不得少于3.0%，结果表明，除云南产药材外，其余两批药材质量均未达到标准。

5　讨论

实验结果表明，云南、贵州和甘肃所产珠子参药材从性状在形状、表面颜色上差别较大，不同产地珠子参显微特征的差异主要体现在木质部所占的面积和草酸钙簇晶数量，其中甘肃产药材约占横切片的1/2～2/3；草酸钙簇晶较多。

3个产地的竹节参药材薄层色谱图无明显差异，但竹节参皂苷Ⅳa的含量差异较大，其中以云南产药材含量较高，质量较好。珠子参在我国民间药用历史悠久，长期以来主要依赖于野生资源，随着资源的枯竭，近年来，在云南、贵州等地区开始人工栽培[11]，目前市场上，不同产地以及野生和栽培药材品种并存，亟需对药材质量进行控制，以有效地利用和开发该药材。

[1]云南中草药整理组.实用中草药随身手册—云南中草药[M].云南:云南人民出版社,2011:284.

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[3]段径云,陈瑞明.珠子参对血液和造血功能的影响[J].西北药学杂志,1996,11(2):72-73.

[4]朱新华,后文俊,李存德.珠子参总皂甙对脾细胞增殖效应影响的研究[J].昆明医学院学报,1994,15(1):65-67.

[5]贺海波,石孟琼,陈涛,等.珠子参水提物抗炎镇痛作用的实验研究[J].第三军医大学学报,2010,32(20):2224-2227.

[6]赵仁,赵毅,李东明,等.珠子参研究进展[J].中国现代中药,2008,10(7):3-6.

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(2016-01-22收稿责任编辑：张文婷)

Pharmacognostical Study and Content Determination in Largeleaf Japanese Ginseng Rhizomes in Different Producing Areas

Li Jia，Li Manzhong,Deng Xiaolu,Zou Haiyan

(Beijing Key Lab of TCM Collateral Disease Theory Research,School of traditionalChineseMedicine,CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China)

Objective:To provide macroscopic and microscopic identification basis for the Largeleaf Japanese Ginseng Rhizomes in the main producing areas such as Yunnan,Guizhou and Gansu and determine some contents in them.Methods:Macroscopic and microscopic observation and TLC were used to authenticate the crude drugs,the content of chikusetsusaponin IVa in the materials were determined with HPLC.Results:The macroscopic and microscopic characteristics of the three batches of Largeleaf Japanese Ginseng Rhizome were different in shapes colors of surface,and numbers of the crystals.And the contents of chikusetsusaponin IVa were 5.55%(Yunnan),1.98%(Guizhou) and 1.96%(Gansu) respectively.Conclusion:The Largeleaf Japanese Ginseng Rhizomes from three producing areas showed different characteristics in macroscopic and microscopic identification,and the content of chikusetsusaponin IVa in the sample from Yunnan province is higher than the others.

Largeleaf Japanese Ginseng Rhizomes; Macroscopic Identification; Microscopic Identification；Determination

国家自然科学基金项目(编号：81403095)；北京市属高校青年拔尖人才培育项目(编号：CIT&TCD201404175；CIT&TCD201404184)；首都中医药护理专项(编号：14ZY15)

李佳(1974—)，女，副教授，博士，主要研究方向：中药鉴定方法学，E-mail：yueliang2683@sina.com

邹海艳(1974—)，女，副教授，博士，主要研究方向：中药质量控制，E-mail：bwzhy@sina.com

R284.1

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.09.061