不同中医证型食道癌对化疗药物敏感性的相关性分析

辛　伟　周勇锋　张　帆

(陕西省宝鸡市中医医院胸外科，宝鸡，721000)



不同中医证型食道癌对化疗药物敏感性的相关性分析

辛伟周勇锋张帆

(陕西省宝鸡市中医医院胸外科，宝鸡，721000)

目的：分析不同中医证型食道癌和化疗药物敏感性的相关性。方法：随机选取2013年4月至2016年3月，于我院就诊经胃镜取病理组织活检并确诊为食管鳞癌的患者60例，通过中医辨证论治，将其证型分为痰瘀互结型19例、气阴两虚型17例、津亏热结型13例、痰气交阻型11例，其中年龄在40～60岁之间，平均年龄(47.6±6.8)岁，其中男37例，女23例。体外肿瘤组织细胞液制备均由手术切除的食管癌患者提供新鲜组织块，体外加入不同浓度的紫杉醇、伊立替康、泽菲、5-氟尿嘧啶、顺铂等化疗药物，细胞MTT测试计算各个中医证型中化疗药物对肿瘤细胞的抑制率。结果：在用5种不同化疗药物分别对60例食管癌患者的食管癌细胞进行体外抑制试验，结果显示各药物对癌细胞敏感度的基本情况为：紫杉醇>顺铂>5-氟尿嘧啶>伊立替康>泽菲。各组间经统计学比较，痰瘀互结型、津亏热结型和痰气交阻型各组间经统计学比较，无统计学意义(P>0.05)。痰瘀互结型、津亏热结型和痰气交阻型的化疗药物敏感性均高于气阴两虚型(P<0.05)。结论：不同中医证型食道癌与化疗药物敏感性存在相关性，其中气阴两虚型存在耐药性。

中医证型；食道癌；化疗药物敏感性；相关性

食道癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，食道癌对人体的生命和健康造成严重的威胁，在消化道恶性肿瘤中其死亡率仅次于胃癌[1]。临床上鳞状细胞上皮瘤是食道癌中最常见的分型，而腺癌相对少见。食道癌的生存率较低，仅10%～15%[2]，其治疗难点在于确诊时几乎都是属于中晚期[3]，早期患者病情较隐匿，容易被当做轻症治疗[4]。食道癌的临床治疗目的就是尽可能延长患者的生存期和提高患者的生存质量，而主要治疗方式目前仍是化疗[5]。化疗药物和化疗方案不断的更新以期提高患者化疗效果的持续性和提高患者的生存时间，目前临床上使用的化疗药物是疗效较为认可的新的细胞毒性药物[6]，如顺铂(DDP)、氟优(5-氟尿嘧啶，5-FU)等迄今为止临床上食道癌的标准化化疗方案是DDP联合5-FU，由于食道癌中肿瘤对化疗药物的敏感性存在差异，该方案有效率为20%～50%[7]。有研究发现[8]中医辨证论治进行个体化治疗，疗效显著，而食道癌不同的中医辨证分型及其病理分型有关。因此本研究旨在从化疗药物敏感性的角度探讨其与不同中医证型的相关性。现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料随机选取2013年4月至2016年3月，于我院就诊经胃镜取病理组织活检并确诊为食管鳞癌的患者60例，通过中医辨证论治，将其证型分为痰瘀互结型19例、气阴两虚型17例、津亏热结型13例、痰气交阻型11例，其中年龄在40～60岁之间，平均年龄(47.6±6.8)岁，其中男37例，女23例，体外肿瘤组织细胞液制备均由手术切除的食管癌患者提供新鲜组织块，各组在例数、年龄、性别、病程等方面均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。纳入标准：1)所有病例西医参照《现代肿瘤学》中食道癌的诊断标准[9]，中医证型参照王永炎主编的《中医内科学》(1999年上海科学技术出版社)[10]；2)年龄40～65岁，既往未经中医药或者放化疗治疗；3)原发性食道癌，病理为食管鳞癌；4)所有患者签署知情同意书。排除标准：1)高龄患者，年龄>80岁；2)其他原发性恶性肿瘤转移食道；3)合并心脏系统、内分泌、血液系统、精神系统和肝肾疾病的患者。

表1　各证型间一般资料比较±s)

1.2研究方法

1.2.1细胞MTT测试(MTT)各个中医证型的食道癌患者手术切除后，将新鲜的肿瘤组织块无菌提取制备单细胞悬液，单细胞悬液的细胞浓度为1×106mL，注入96孔培养板中，以100 μL单细胞悬液加100 μL细胞培养液配比成200 μL的总量，设空白对照组和实验组，并增加3行平行复孔，在饱和湿度为5%CO2、常温为37 ℃的培养箱中培养。4 h后，除空白对照组外，实验组分别加入20 μL经生理盐水稀释过的不同的化疗药物：DDP(顺铂，规格10 mg，批号：H37021358，厂家：齐鲁制药有限公司)4.0 μg/mL、5-FU(5-氟尿嘧啶，规格10 mL∶0.25 g，批号：H12020950，厂家：天津金耀氨基酸有限公司)40.0 μg/mL、紫杉醇(规格5 mL∶30 mg，批号：H20061276，厂家：海口市制药厂有限公司)0.36 μg/mL、泽菲(规格10 mL∶0.25 g，批号：H20029195，厂家：江苏亚邦爱普森药业有限公司)20.0 μg/mL、伊立替康(规格5 mg，批号：H20061276，厂家：江苏恒瑞医药股份有限公司)5.0 μg/mL。孵育48 h后，快速翻板弃上清，所有组别每孔均加入20 μL，5 g/L的MTT，孵育4 h，离心，丢弃上清液，加入100 μL二甲基亚砜终止液终止反应，振荡10 min，酶标仪(型号：E2500型，厂家：美国BioRad公司)测定光密度值(OD值)，计算各个中医证型中化疗药物对肿瘤细胞的抑制率=(空白对照孔OD值-化疗药孔OD值)/空白对照孔OD值×100%。抑制率<30%为耐药，抑制率>30%为敏感，且数值越大，敏感性越强。

1.2.2统计学方法采用SPSS 17.0分析软件进行统计学处理，计数资料采用非参数卡方等检验。以P<0.05差异有统计学意义。

2　结果

2.1各种药物抑制率比较在用5种不同化疗药物分别对60例食管癌患者的食管癌细胞进行体外抑制试验，结果显示各药物对癌细胞敏感度的基本情况为：紫杉醇>顺铂>5-氟尿嘧啶>伊立替康>泽菲。5种常用化疗药物对食管癌细胞抑制率经统计学分析无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2　5种化疗药物体对食道癌细胞体外抑制率比较

2.2不同证型间抑制率比较痰瘀互结型食管癌细胞的抑制率从高到低依次为：紫杉醇>顺铂>5-氟尿嘧啶>伊立替康>泽菲；津亏热结型食管癌细胞的抑制率从高到低依次为：紫杉醇>顺铂>伊立替康>5-氟尿嘧啶>泽菲；痰气交阻型食管癌细胞的抑制率从高到低依次为：紫杉醇>顺铂>5-氟尿嘧啶>伊立替康>泽菲；气阴两虚型食管癌细胞的抑制率从高到低依次为：伊立替康>紫杉醇>顺铂>5-氟尿嘧啶>泽菲，各组间经统计学比较，痰瘀互结型、津亏热结型和痰气交阻型各组间经统计学比较，无统计学意义(P>0.05)。痰瘀互结型、津亏热结型和痰气交阻型的化疗药物敏感性均高于气阴两虚型(P<0.05)。见表3。

表3　5种化疗药物对不同证型食道癌细胞体外抑制率比较±s,%)

3　讨论

食管癌按其临床表现可将其归类到中医学“噎膈”的范畴。根据历代医家的相关理论及研究，噎膈的病因病机大致可归结为[11]：七情所伤、脏腑虚损、饮食不节、湿毒内蕴、年老体弱，津液亏虚，痰瘀互结等。而在食管癌疾病的发展过程中，其病机症候也各不相同。在疾病发生的早期，因“脾胃受伤，……，痰则塞而不通，气则上而不下，”其正气初衰，外邪实盛，故以痰气交阻表现为主；随着疾病进一步发展，外邪入里，中伤阴精，“阴伤则精血枯涸；气不行则噎嗝病于上，精血枯涸则燥结病于下”，久则瘀毒内结，耗伤正气，其病虚实夹杂，多表现为痰瘀互结、津亏热结之相；而疾病进入末期，病程日久，脾肾阳气俱虚，气血化生无源，无以御邪外出，多表现为气血阴阳俱虚，故患者预后生存极差。本研究多方参考历代医家理论经验及现代学者的相关研究[12]，故将食管癌分为痰气交阻、痰瘀互结、津亏热结、气阴两虚4型[13]。

食道癌的生存率较低，仅10%～15%，其治疗难点在于确诊时几乎都是属于中晚期，早期患者病情较隐匿，容易被当做轻症治疗。目前临床上使用的化疗药物是疗效较为认可的新的细胞毒性药物，如顺铂(DDP)、氟优(5-氟尿嘧啶，5-FU)等迄今为止临床上食道癌的标准化化疗方案是DDP联合5-FU，由于食道癌中肿瘤对化疗药物的敏感性存在差异，该方案有效率为20%～50%。寻找类似中医的辨证论治，可以提前预测患者对化疗药物的敏感性，因人制宜的用药将提高化疗的疗效，节约医疗资源。目前国内外预测肿瘤细胞对化疗药物敏感性的方法有[14-16]：流式细胞仪法、MTT比色法等体外实验方式[17]，其中流式细胞仪法对操作人员和设备的要求较高，不利于推广[18]；而MTT比色法简捷、经济便利、设备无放射污染等，有利于推广应用[19]。MTT比色法[20]是常用的检测细胞活力的实验方法，常备应用于肿瘤药物筛选和敏感性测定的研究中，本研究采用此法研究结果显示，在用5种不同化疗药物分别对60例食管癌患者的食管癌细胞进行体外抑制试验，结果显示各药物对癌细胞敏感度的基本情况为：紫杉醇>顺铂>5-氟尿嘧啶>伊立替康>泽菲。5种常用化疗药物对食管癌细胞抑制率经统计学分析无统计学意义(P>0.05)。与李少荣等[8]研究结果相似。

进一步检测分析发现，痰瘀互结型食管癌细胞的抑制率从高到低依次为：紫杉醇>顺铂>5-氟尿嘧啶>伊立替康>泽菲；津亏热结型食管癌细胞的抑制率从高到低依次为：紫杉醇>顺铂>伊立替康>5-氟尿嘧啶>泽菲；痰气交阻型食管癌细胞的抑制率从高到低依次为：紫杉醇>顺铂>5-氟尿嘧啶>伊立替康>泽菲；气阴两虚型食管癌细胞的抑制率从高到低依次为：伊立替康>紫杉醇>顺铂>5-氟尿嘧啶>泽菲，痰瘀互结型、津亏热结型和痰气交阻型各组间经统计学比较，无统计学意义(P>0.05)。痰瘀互结型、津亏热结型和痰气交阻型的化疗药物敏感性均高于气阴两虚型(P<0.05)，说明不同中医证型食道癌对化疗药物敏感性存在差异。本研究中结果显示气阴两虚型食道癌患者对化疗药物的抑制率均低于30%，即存在耐药性。研究提示了不同中医证型食道癌对化疗药物敏感性存在一定的相关性，临床临症时应该中西医结合，辨证论治，为患者提供个性化的治疗方案。

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(2016-06-20收稿责任编辑：徐颖)

Correlation Analysis of the Sensitivity to Chemotherapy Drugs among Different TCM Syndrome Patients with Esophageal Cancer

Xin Wei,Zhou Yongfeng,Zhang Fan

(Thoracic Surgery of Baoji City Chinese Medicine Hospital, Baoji 721000, China)

Objective:To analyze the correlation between different TCM syndromes of patients with esophageal cancer and chemotherapy drug sensitivity.Methods:A total of 60 cases of patients with esophageal squamous cell carcinoma in March 2013 to April 2016 in our hospital were diagnosed by gastroscope pathological biopsy.Through the syndrome differentiation，the patients were divided into 19 cases of combined phlegm and stasis syndrome 17 cases of deficiency of both qi and yin，13 cases of fluid consumption and heat accumulation and 11 cases of combined phlegm and qi.Their ages were between 40 to 60，with average age(47.6±6.8 years)，including 37 male patients，and 23 female patients.In vitro tumor tissue cell fluid was obtained by fresh tissue of surgical resection of esophageal carcinoma patients and mixed with different concentrations of Paclitaxel>CDDP 5-FU irinotecan，gemcitabine chemotherapy drugs.Inhibitory rate of chemotherapy drugs on tumor cells in various TCM Syndrome Types were detected with MTT test.Results:In the inhibition test of the five different chemotherapy drugs，it was found that the cancer cell sensitivity of the drugs was Paclitaxel>CDDP>5-FU>irinotecan>gemcitabine.Among the groups，there were no significant differences among the combined phlegm and stasis group，fluid consumption and heat accumulation and combined phlegm and qi group.But the drug sensitivity of phlegm and blood stasis，deficiency of fluid thermal junction and gas exchange resistance group was significantly higher than that of deficiency of both qi and yin group(P<0.05).Conclusion:There is positive correlation between different TCM syndromes of esophageal cancer and chemotherapy drug sensitivity，the drug tolerance in deficiency of both qi and yin syndrome.

TCM syndrome； Esophageal cancer； Chemotherapy drug sensitivity； Correlation

陕西省卫生厅科研基金中标项目(编号：2010H27)

辛伟(1979.03—)，男，硕士研究生，主治医师，研究方向：胸外科疾病，E-mail：xinweidoctor@126.com

R241

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.09.070