高效液相色谱法测定复方鱼腥草合剂中连翘苷的含量

王湘妍，翟雪东

（河南应用技术职业学院，河南郑州 450000）

高效液相色谱法测定复方鱼腥草合剂中连翘苷的含量

王湘妍，翟雪东

（河南应用技术职业学院，河南郑州 450000）

建立高效液相色谱法测定复方鱼腥草合剂中连翘苷的含量。采用Agela Promosil C18（250mm×4mm，5μm）分析柱，流动相为乙腈-0.2%冰醋酸（24∶76），流速为1.0mL/min，检测波长为277nm。结果：连翘苷在0.051 2μg～0.512 0μg范围内线性关系良好（r=0.999 4），平均回收率为99.0%（n=6）。本方法专属性强，准确、快速，适用于复方鱼腥草合剂的质量控制。

高效液相色谱法；复方鱼腥草合剂；连翘苷

复方鱼腥草合剂是由鱼腥草、连翘、黄芩和板蓝根等5味中药组成的复方制剂，用于外感风热引起的咽喉疼痛；急性咽炎、扁桃腺炎有风热证候者。处方中连翘的有效成分连翘苷有具有清热、解毒、散结排脓等功效。其质量标准收载于文献［1］中，但无连翘苷的含量测定方法，为了有效控制药品质量，确保该制剂的疗效，本实验采用HPLC法测定复方鱼腥草合剂中连翘苷的含量。

1 仪器与试药

仪器高效液相色谱仪戴安U3000：Sartorias电子天平（CPA-225D）；

连翘苷（110821-200610），中国药品生物制品检定所提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱

Agela Promosil C18（4.6mm×100mm，5μm）；流动相：乙腈-0.2%冰醋酸（24∶76），流速为1.0mL·min-1，检测波长为277 nm，柱温为30℃；进样量10μl。

2.2 标准曲线的绘制

在上述条件色谱下，精密吸取上述对照品溶液5、10、20、30、50μL，注入液相色谱仪，测得峰面积。以对照品峰面积为纵座标，以进样量为横坐标作标准曲线，并以最小二乘法计算得回归方程：Y=12.942 X-3.556 8，R2=0.999 4连翘苷在0.051 2μg～0.512 0μg范围内有良好线性关系。

2.3 精密度试验

取同供试品溶液溶液，连续进样6次，结果连翘苷RSD为0.75%（n=6）。实验结果见表1。

2.4 稳定性试验

取供试品溶液分别在2h、4h、8h、12h、16h、20h、24h进样1次，结果连翘苷RSD为0.95%（n=7）。

2.5 加样回收试验

精密量取已知含量的复方鱼腥草合剂6份2mL，精密加入对照品溶液0.5mL、0.5mL、1mL、1mL、1.5mL、1.5mL，照本法制备供试品溶液，按本法进行含量测定并计算回收率。

2.6 样品的测定

精密量取3个批号的样品各2份，按本法制得供试品溶液，按本法进行含量测定结果批号为 20120911，20130108，20130304的样品连翘苷含量分别为3.24μg/mL，2.98μg/mL，3.62μg/mL。

3 讨论

3.1 检测波长的选择

使用二极管阵列检测器，波长扫描范围设定190～300nm，结果连翘苷在200nm，227nm，277nm 波长处有强吸收，考虑200nm，227nm供试品溶液杂质峰较多不易分离，且冰醋酸在小于240nm波长范围内吸收度较大，故选择277nm为检测波长。

3.2 流动相的选择

本品含有较多蔗糖和蜂蜜，黏度较大，若直接进样，不利于分析；若稀释后进样，样品中连翘苷含量较低，信噪比偏小，误差较大。故采用样品过聚酰胺柱，甲醇洗脱的方法进行净化和富集，结果准确。曾用甲醇-水，甲醇-1%乙腈-水和乙腈-0.2%冰醋酸溶液比较，乙腈-0.2%冰醋酸溶液分离效果较好，保留时间适当，故本实验使用乙腈-0.2%冰醋酸（24∶76）作为流动相。

3.3 分析方法

连翘苷的含量测定方法有薄层扫描法［2］，本实验采用高效液相色谱法，试验结果表明，所建立的方法简单，操作方便，专属性强、重复性好、结果可靠，可作为该制剂的质量控制方法。

［1］ WS-10821（ZD-0821）—2002.国家中成药标准汇编内科肺系（一）分册［S］，2002.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部［M］.北京：化学工业出版社，2010.

［3］ 何绍萍，陈华龙.高效液相色谱法测定小儿清解冲剂中连翘苷含量［J］.中国药业，2011，（3）：21.

［4］ 姬雪礼，李文烈，郑晓杰，等.高效液相色谱法同时测定连翘叶中连翘酯苷A和连翘苷含量［J］.中国药业，2014，（7）：33.

［5］ 陆红柳，谭喜莹，赵陆华，等.连翘中连翘苷HPLC测定方法的改进［J］.中草药.2007，38（06）：936-937.

［6］ 杨棣华，黄兰，郑显辉.不同产地连翘叶中连翘苷和连翘酯苷A的含量测定［J］.临床医学工程，2013，（3）：288.

［7］ 王昌利.高效液相色谱法测定连胶素胶囊中连翘苷的含量［J］.陕西中医学院学报.2005（05），35.

［8］ 曹晓燕，王东浩，思培峰，等.连翘不同部位连翘苷含量的比较［J］.中成药，2009，（4）.

［9］ 史大军，邱海蕴，康红英.HPLC法测定清喉咽颗粒中连翘苷的含量［J］.中国药事，2012，（1）.

［10］ 闵宇航.中药柴胡、何首乌、连翘、枸杞子的质量标准提高研究［D］北京中医药大学，2014.

表1 样品中连翘苷回收率试验结果（n=6）

Determination of Phillyrin in Compound Herba Houttuyniae Mixture by HPLC

Wang Xiang-yan，Zhai Xue-dong

Objective To establish a HPLC method for determination of phillyrin in Compound Herba Houttuyniae mixture.Methods Agela Promosil C18（250mm × 4mm，5μm）column，the mobile phase was Acetonitrile-0.2% glacial acetic acid（24∶76），the fl ow rate was 1.0mL/min，the detection wavelength was 277 nm.Results：phillyrin was 0.051 2～0.512 0μg good linear relationship（r=0.999 4），the average recovery rate was99.0%（n=6）.Conclusion：the method is specific，accurate，rapid，and suitable for quality control of compound Houttuynia cordata Houttuynia mixtur

HPLC；compound Houttuynia cordata mixture；phillyrin

R286.0

A

1003-6490（2016）07-0061-02

2016-07-22

王湘妍（1982—），女，河南开封人，讲师，主要研究方向为中药新制剂研发。