朱唇化学成分预实验及止血活性研究

罗泽萍潘立卫

（1.河池学院化学与生物工程学院，广西 宜州 546300；

2.广西高校微生物及植物资源开发利用重点实验室，广西 宜州 546300）

朱唇化学成分预实验及止血活性研究

罗泽萍1,2潘立卫1,2

（1.河池学院化学与生物工程学院，广西 宜州 546300；

2.广西高校微生物及植物资源开发利用重点实验室，广西 宜州 546300）

目的：初步探讨朱唇可能的化学成分及研究其止血活性。方法：采用系统预实验法对朱唇的提取物可能含有的化学成分进行初步研究。并通过体外促凝血实验，研究朱唇的止血活性。结果：朱唇中可能含有多糖、苷类、黄酮等丰富化学成分。另外，朱唇提取物具有显著的止血作用。结论：初步鉴定朱唇含有丰富的活性成分，为深度研究和开发朱唇的植物资源提供实验基础。朱唇提取物具有较好止血活性，为寻找新止血药物提供基础。

朱唇；预实验；化学成分；止血活性

朱唇（Salvia coccinea L.）是唇形科鼠尾草属植物，原产于美洲的一年生或多年生草本植物，该品种通常作为观赏植物，在我国多地有栽培，如：广东、广西、陕西、浙江、上海、江西、安徽等。朱唇全草均有药用价值，具有凉血、止血，清热利湿等功效，可以用于治疗妇女血崩，高热及腹疼不适［1］等。现代药理研究表明朱唇水溶性部位可明显提高小鼠耐缺氧能力［2］。目前国内外对朱唇的研究主要集中在植物资源、组织培养和园林景观等［3-6］；而对其化学成分的研究甚少。本实验首次对朱唇的化学成分进行初步研究。

出血是诸多疾病中常见并发症之一，出血过多甚至会导致休克，存在生命危险，因此及时的进行止血显得尤为重要。目前，止血药的需求和使用日益剧增，使得市场上对止血新药的研发更加迫切，寻找更为廉价、安全可靠的止血药，是目前的研究热点。为研究朱唇的止血作用，本实验通过家兔体外促凝血实验研究朱唇的止血活性。旨在深入研究和开发新的止血药物提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料仪器

朱唇采自广西都安县保安乡，经河池学院邓晰朝副教授鉴定为唇形科鼠尾草属朱唇（Salvia coccinea L.）；家兔由河池学院药理实验室提供；D2KW-4电子恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司）、WKH-1.7-A烘箱（青州市精诚医药装备制造有限公司）、JA2003B电子天平（上海越平科技仪器有限公司）、WFH-203三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）、WKF-180万能粉碎机（青州市京城医药装备有限公司）、云南白药标准品（云南白药股份有限公司）、TDL-5A离心机（上海安宁科学仪器厂）。

1.2 实验方法

朱唇药材粗粉制备后采用试管预试法进行实验。根据供试液可能含有的化学成分类型的理化性质，选择其特有的化学反应如颜色反应、沉淀反应等做定性试验。

1.2.1 样品制备

取一定量的朱唇，阴干，粉碎成粗粉即为实验品粗粉。

1.2.2 水供试液制备

取朱唇药材粗粉10g，各两份，分别加水100ml，冷浸12小时。取其中一份滤液做为冷水供试液。另一份于60℃水浴上加热30分钟，过滤，即得。

1.2.3 醇供试液制备

取朱唇药材粗粉10g，加10倍量的95%乙醇，经水浴回流1小时，过滤，即得醇供试液。取一部分滤液浓缩成膏状，加5%HCl溶解，过滤，得到乙醇酸水供试液。

1.2.4 石油醚供试液制备

取朱唇粗粉1g，加10ml石油醚，密封放置2～3小时，过滤即得石油醚供试液。

1.2.5 朱唇水提取物的制备

称取朱唇粗粉100 g，加入10倍量蒸馏水，煎煮三次，每次1 h，合并提取液，浓缩干燥，即得朱唇水提物。

1.2.6 朱唇醇提物的制备

将朱唇药材粉碎，得朱唇粗粉，称取朱唇药粉100 g，用10倍量75 % 乙醇回流提取三次，每次1 h，合并提取液，浓缩干燥即得。

1.2.7 氯化钙溶液配制［7，8］

准确称取取无水氯化钙1.400 g，加去离子水定容至 50 mL混匀。

1.2.8 抗凝血液的制备［7，8］

准确称取1.900g枸橼酸钠，加去离子水定容至50mL混匀，然后与新鲜家兔血按1∶9 比例轻轻混匀，待用。

1.2.9 去钙血浆的制备［7，8］

取抗凝血液1500 r/min离心30 min即得。

1.2.10 凝血时间（Clotting time，CT）的测定

采用凝血板法和试管法［7，8］测定，所取指标为凝血时间。设立空白对照及云南白药阳性对照，每样品进行 6次平行实验，并计算平均值。下同。

1.2.11 血浆复钙时间（recovery-calcium time，RT）的测定

采用试管法［9］进行测定。

1.2.12 统计方法

实验数据以（均数±标准差）即（ ） 表示，组间比较采用t 检验，数据采用Microsoft Excel 统计软件进行分析。凝血时间缩短率计算方法如下：

2 结果与分析

2.1 水提取液预试

冷水供试液做氨基酸、多肽、蛋白质成分检查，热水供试液做糖、多糖、皂苷、苷类、鞣质、有机酸成分检查。结果见表1。

表1 水提取液预试结果

2.2 乙醇提取液预试

乙醇供试液做黄酮、蒽醌、香豆素、植物甾醇、强心苷的检查，乙醇酸水供试液做生物碱检查，结果见表2。

表2 乙醇提取液预试结果

2.3 石油醚提取液预试

石油醚供试液分别做挥发油和油脂检查，结果见表3。

表3 石油醚提取液预试结果

2.4 朱唇提取物凝血板法实验结果

表4 凝血板法测定凝血时间（n=6，±S）

图1 凝血板法测定凝血时间缩短率

由表4、图1可以看出，用凝血板法测定朱唇提取物的凝血作用，与空白组对照，其水提物和醇提物均明显缩短（P＜0.01），朱唇醇提物比水提物凝血时间短（P＜0.01），说明醇提物凝血效果较佳。凝血时间缩短率顺序：醇提物（17.03%）＞云南白药（8.74%）＞水提物（2.10%），表明朱唇提取物能明显缩短凝血时间，有较好的止血作用。

2.5 朱唇提取物试管法实验结果

表5 试管法测定凝血时间（n=6，±S）

表5 试管法测定凝血时间（n=6，±S）

样品（0.5%）（0.5%） 　　空白对照 　　云南白药对照 　　醇提物 　　水提物T（min） 　2.49± 0.28 　2.03±0.14**# 　2.01±0.12* 　2.07±0.12*

图2 试管法测定凝血时间缩短率

由表5、图2可以看出，用凝血板法测定朱唇提取物的凝血作用，与空白组对照，其提取物具有显著差异（P＜0.05），朱唇醇提物与水提物凝血效果相当，无显著性差异（P＞0.05）。凝血时间缩短率：云南白药（18.60%）＞水提物（16.79 %）＞醇提物（15.85%），表明朱唇提取物能明显缩短凝血时间，有较好的止血作用。

表6 血浆复钙时间测定（n=6，±S）

图3 血浆覆盖时间测定凝血时间缩短率

3 讨论

化学成分预实验结果表明，朱唇中可能含有多糖、苷类、黄酮类等化学成分。本实验为进一步研究该植物化学成分提取、分离、纯化和相关药理活性提供一定科学依据，拓宽朱唇药用资源的开发利用。

凝血时间是指在动物血液在机体外完全凝固所需要的时间［10］，常用的测定凝血时间方法有凝血板法、试管法、毛细玻管法。凝血板法和试管法测定凝血时间值的原理为体外血液中的Ⅻ因子被异物表面（凝血板表面、试管内表面）活化，由于血小板因子及钙离子的作用，发生复杂的连锁反应，生成的纤维蛋白可抑制机体出血［11］。本文采用凝血板法和试管法对鸡体外血液，设立空白对照组及云南白药对照组对朱唇提取物进行凝血时间比较，来判断止血效果。结果发现朱唇提取物能明显缩短凝血时间，有较好的止血作用（P＜0.05），其中凝血板法测定凝血时间结果显示醇提取凝血效果比水提物好（P＜0.05）。血浆复钙时间是指去掉钙的血浆中重新加入钙，使内源性凝血过程重现，其原理是离体血液经过抗凝剂二水合柠檬酸三钠处理，离心后血浆中缺少钙离子，凝血功能失效，再加入钙离子可令其还原，但此时凝血因子减少，凝血时间会缩短，即血浆复钙时间减短［12］。本研究发现朱唇提取物血浆复钙时间与空白组对照，其醇提物具有极显著差异（P＜0.05），朱唇醇提物比水提物有较好的凝血效果（P＜0.05）。结果表明朱唇提取物具有止血作用，但使去钙血浆恢复凝血作用的能力较弱。本实验主要考察了朱唇提取物的止血活性，而其止血活性物质结构还未明确，有待进一步的分离纯化及结构鉴定，从而明确止血的物质基础。同时，以价格低廉的朱唇为原料的止血药具有广泛的开发前景，充分开发利用了野生中草药资源，拓宽止血药领域。

［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（66）［M］.北京：科学出版社，1977.

［2］ 郭济贤，顺庆生，马虹新，等.防治冠心病中草药的研究（Ⅰ.鼠尾草属植物的筛选）［J］.上海第一医学院学报，1979，2（6）：83-89.

［3］ 王涛.川西鼠尾草属植物观赏资源调查与引种及果实和叶片形态学研究［D］.四川：四川农业大学，2012.

［4］ 杨在君，缪金城，张利，等.四川和重庆鼠尾草属植物的种类及药用资源［J］.时珍国医国药，2008，4（19）：904-908.［5］ 陈博.朱唇栽培指南［J］.中国花卉报，2014，（6）：1.

［6］ 窦剑，屠跃祥.南京市朱唇“红衣女郎”自结实种子两季播种育苗技术初报［J］.现代园艺，2014，（1）：9-10.

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［9］ 李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科学技术出版社，1991：493-505.

［10］ 陈奇.中药药理研究方法学（第二版）［M］.北京：人民卫生出版社，2006：479.

［11］ 陈奇.中药药理研究方法学（第二版）［M］.北京：人民卫生出版社，2006：480.

［12］ 张茅宏.实用血液病学［M］.济南：山东科学技术出版社，1990：68.

Preliminary tests for chemical components and hemostatic activity of Salvia coccinea L.

Obiective： To identify the chemical components and hemostatic activity of Salvia coccinea L.. Methods：The extracted from Salvia coccinea L. was studied using test tube method， the chemical components of Salvia coccinea L. were preliminarily demonstrated . And the hemostatic active of Salvia coccinea L in vitro were observed by procoagulation. Results： Salvia coccinea L. might exist variety of hemostatic effect in Salvia coccinea L.， for example， polysaccharide， glycosides， flavonoids， etc. In addition， Salvia coccinea L. has evident hemostatic function. Conclusion：Diverse chemical components exist in Salvia coccinea L.， which provides foundation for further study and application of Salvia coccinea L.. Diverse hemostasis natural products exist in Salvia coccinea L. extract，which provide a basis for developing new hemostasis drug.

Salvia coccinea L.； preliminary test； chemical components； hemostasis

R285.5

A

1008-1151（2016）01-0038-03

2015-12-15

广西高校科学技术研究项目（KY2015LX366）；河池学院校级青年科研课题立项项目（2014QN-N002）；生物化工广西重点学科（河池学院）建设基金（201308）。

罗泽萍（1987-），女，广西梧州人，河池学院讲师，研究方向为生化药理学。

潘立卫（1987-），男（壮族），广西都安人，河池学院实验师，研究方向为中草药有效成分研究。