穿心莲内酯对小鼠早期感染性休克的影响*

王小青 王剑 赵诗云 吴东风 刘丹#

（1江西省中医药研究院 南昌 330046；2南昌大学第一附属医院 江西 南昌 330006）

中西药苑

穿心莲内酯对小鼠早期感染性休克的影响*

王小青1王剑2赵诗云1吴东风1刘丹1#

（1江西省中医药研究院 南昌 330046；2南昌大学第一附属医院 江西 南昌 330006）

目的：建立感染性休克小鼠动物模型后，观察穿心莲内酯对早期感染性休克小鼠的影响。方法：采用小鼠腹腔注射内毒素（LPS）造成感染性休克模型，观察穿心莲内酯对模型小鼠的影响。结果：穿心莲内酯能明显改善感染性休克小鼠的肠道水肿，同时可以降低肺、肾、肝脏器损害程度。结论：穿心莲内酯对LPS建立的小鼠感染性休克具有保护作用。

穿心莲内酯；小鼠；感染性休克模型；内毒素

感染性休克也称败血症性休克或中毒性休克，是由病原微生物及其毒素等产物直接或间接地激活宿主的各种细胞和体液系统，产生细胞因子和内源性介质，作用于机体各种器官、系统，引起急性微循环灌注不足，导致组织缺氧，细胞损害、代谢和功能障碍，甚至多器官功能衰竭的危重综合征［1～2］。本研究应用内毒素（Lipopolysaccharide，LPS）腹腔注射小鼠建立感染性休克模型，观察穿心莲内酯对早期感染性休克小鼠的影响。现报告如下：

1 材料与方法

1.1 材料健康KM小鼠30只，雌雄各半，体重18～22 g，购自江西中医药大学实验动物管理中心（合格证号：JZDWNo：2016-0064）。内毒素购自Sigma。穿心莲内酯滴丸（国药准字Z20040078）。

1.2 方法

1.2.1 动物分组、模型制备及标本留取KM小鼠随机分成正常空白对照组、模型组（LPS 40 mg/kg）、给药组，每组10只。其中空白对照组每天灌胃0.2 ml生理盐水，模型组腹腔注射LPS 40 mg/kg后每天灌胃0.2 ml生理盐水，给药组腹腔注射LPS 40 mg/kg后每天再灌胃给药穿心莲内酯0.18 g/kg，观察小鼠情况，并做好记录［3］。死亡小鼠立即解剖，取出组织器官包括大肠、肝、肺、肾脏，用4%福尔马林固定，剩余小鼠在72 h后采用颈椎脱臼法处死小鼠，取出肠、肝、肺、肾脏，用4%福尔马林固定过夜；经脱水包埋、切片（3～5 μm）、展开后，进行HE染色［4］。显微镜下观察并拍照，比较脏器损伤程度。

1.2.2 肠含水量测定将刚死小鼠立即解剖，剪取肠道近胃端10 cm；其他小鼠72 h后处死，剪取肠道近胃端10 cm，分别准确称取其湿重于60℃烘箱烘24 h，分别称取其肠干重。按照公式：肠含水量（%）=［（肠湿重－肠干重）/肠湿重］×100%，计算肠含水量。

1.2.3 石蜡切片组织病理学观察按顺序进行如下操作：常规取材、标本固定、梯度酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋、修块、切片、贴片、脱蜡、HE染色、二甲苯透明、封片，做石蜡HE染色。光镜下观察各组织病理学改变。

1.3 统计学处理利用SPSS软件进行方差分析，实验数据用（±s）表示，数据比较进行组间t检验。

2 结果

2.1 存活率实验小鼠模型组腹腔注射LPS后，半小时后小鼠逐渐出现活动减少，全身颤抖，双眼紧闭及黏液便，12 h后开始出现死亡，72 h后只剩1只存活，给药组24 h内小鼠死亡2只，后续没有小鼠死亡。72 h后模型组小鼠的存活率为10%，给药组存活率为80%，空白对照组存活率为100%。

2.2 肠水肿率结果表明，模型组含水量均明显高于空白对照组，有极其显著性差异（P＜0.01），给药组含水量略高于空白对照组，但无显著性差异。见表1。

表1 各组小鼠肠含水量比较（±s）

表1 各组小鼠肠含水量比较（±s）

注：与空白对照组比较，*P＜0.05。

组别空白对照组给药组模型组含水量（%）78.57±0.2379.10±1.7983.27±2.11*

2.3 脏器的病理改变模型组小鼠肠道水肿明显，局部结构损失，可见糜烂；肺组织支气管周围有炎性细胞，肺泡壁充血，间隔增宽；肾组织出现细胞水肿，红细胞溢出，肝脏呈充血瘀血改变，细胞坏死。给药组肠道、肺、肾组织、肝脏损伤程度明显轻于模型组。见图1～图15。

图1 正常小鼠肠（10×10）

图2 正常小鼠肠（10×40）

图3 模型组小鼠肠（10×10）

图4 模型组小鼠肠（10×40）

图5 给药组小鼠肠（10×10）

图6 给药组小鼠肠（10×40）

图7 正常小鼠肝（10×40）

图8 模型组小鼠肝（10×40）

图9 给药组小鼠肝（10×40）

图10 正常小鼠肺（10×10）

图11 模型组小鼠肺（10×10）

图12 给药组小鼠肺（10×10）

图13 正常小鼠肾（10×10）

图14 大剂量小鼠肾（10×10）

图15 给药组小鼠肾（10×10）

3 讨论

感染性休克目前公认的动物模型有内毒素诱导、细菌注射、腹膜炎模型［5］。内毒素诱导模型具有制模方便、快捷、模型稳定、易于评定等优点［6］。现在文献报道的感染性休克模型主要为大鼠、狗、兔等，还没有小鼠模型的报道。我们采用内毒素诱导小鼠感染性休克模型实验结果表明，本方法采用40 mg/kg剂量的内毒素，可以较好的复制感染性休克模型。实验过程中，我们还对小鼠的血常规进行了测定，结果小鼠模型组和正常组血常规没有明显差异，无统计学意义，故未将血常规列入感染性休克模型的指标之一。通过本实验研究证明穿心莲内酯对感染性休克造成的脏器损伤具有明显的保护作用，对以后临床提供了很好的实验依据。

［1］王勇.儿茶酚胺类药物对内毒素休克兔心肌的影响［D］.南京：南京医科大学，2005

［2］张鸣号，王秀玉，张炎.氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肌组织损伤的保护作用［J］.宁夏医科大学学报，2010，32（8）：876-878

［3］王雪莲，赵悦，马力，等.内毒素诱导感染性休克动物模型的建立及血清TNF-α测定［J］.中国医科大学学报，2004，33（5）：390-394

［4］代蓉，董柳慧，石安华，等.HPA轴抑制大鼠感染性休克模型的建立及四逆汤对该模型的作用［J］.云南中医学院学报，2012，35（6）：1-5

［5］陈光，丁晓飞，吴应良.注射用生脉对感染性休克的影响［J］.实用药物与临床，2013，16（4）：304-306

［6］陈晓兵，许铁，李小民，等.不同剂量乌司他丁对感染性休克兔肺损伤的保护作用及其机制探讨［J］.临床合理用药杂志，2011，4（5C）：8-13

Effect of Andrographolide on Mice of Early Septic Shock

WANG Xiao-qing1，WANG Jian2，ZHAO Shi-yun1，WU Dong-feng1，LIU Dan1#
（1Jiangxi Academy of Traditional Chinese Medicine，Nanchang330046；2The First Affiliated Hospital of Nanchang University，Nanchang330006）

Objective：Establishing mice model of septic shock，to observe the effect of andrographolide on early septic shock. Methods：The mice model with septic shock caused by intraperitoneal injection of lipopolysaccharide（LPS），to observe the effect of andrographolide on early septic shock.Results：Andrographolide could significantly improve intestinal edema，and reduce lung，kidney，hepatic lesion degree of mice model with septic shock.Conclusion：Andrographolide has protective effect of mice with septic shock caused LPS.

Andrographolide；Mice；Model of septic shock；LPS

R96

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2016.08.043

2016-01-14）

江西省卫生计生委中医药科研课题（编号：2014A006）

#通讯作者：刘丹，E-mail：liud@syzxyjhlc.com