恩施地区人群MTHFR C677T多态性和饮酒在肝癌中的交互作用研究

雷蕾　李旭　贺建华　马兵　黎磊



·调查研究·

恩施地区人群MTHFR C677T多态性和饮酒在肝癌中的交互作用研究

雷蕾李旭贺建华马兵黎磊

目的探讨恩施地区人群MTHFR C677T多态性与肝癌关联性及与饮酒交互作用。方法采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分析121例肝癌患者和129例正常对照MTHFR C677T基因型。非条件Logistic分析各基因型与发病中易感性关系以及与饮酒的交互作用。结果携带C(CC/CT)基因个体患病风险较非C基因携带者(TT)风险明显增加 (OR=1.44,95%CI:1.28,1.61,P=0.000校正OR=1.53,95%CI: 1.31,3.01,P=0.000);非条件Logistic分析表明携带CC/CT基因型饮酒 个体肝癌罹患风险是携带TT基因非饮酒个体的3.39倍(OR=3.39,95%CI:2.66,5.36,P=0.000)(RERI=1.83,95%CI:1.21,2.78;API=0.46,95%: 0.28, 0.76;S=1.31,95%CI:1.08,2.17)。结论MTHFR C677T多态性增加恩施地区肝癌罹患风险,且与饮酒在肝癌发病中存在协同效应。

MTHFR C677T;多态性;肝肿瘤;易感性;交互作用

肝癌是我国常见的消化道肿瘤之一。肝癌发病极其复杂,目前认为主要与生活环境,饮食,遗传以及肝炎病毒感染有关[1]。最近发现叶酸DNA甲基化在肝癌的发生发展过程中也发挥着至关重要的作用[2]。亚甲基四氢叶酸还原酶是不可逆地催化5,10亚甲基四氢叶酸转变成5,甲基四氢叶酸的限速酶，参与叶酸的代谢及DNA甲基化的过程[2]。若既往研究发现MTHFR多态性会影响该酶的活性从而影响到叶酸的代谢途径及DNA合成和甲基化,成为疾病风险因子[3]。采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应探讨恩施MTHFR C677T 多态性与肝癌易感性关系以及与饮酒的交互作用，基于MTHFR C677T-159C/T基因多态性在肿瘤中发挥着重要的作用[3-5]。为此, 本研究通过采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应探讨恩施MTHFR C677T 多态性与肝癌易感性关系以及与饮酒的交互作用。

1　资料与方法

1.1一般资料病例组选取2013年2月至2015年1月于我院住院患者121例；对照组选取体检中心健康个体129例。病例组经病理切片确诊为肝癌。本文若男性酒精消耗>140 g/周,女性>70 g/周至少2年则定义为饮酒,每日吸烟至少1支至少2年定义为吸烟。受试者年龄范围41～76岁，所有受试者常规乙肝病毒相关检查。收集年龄、性别、体重指数、吸烟史、饮酒史等一般资料。

1.2MTHFR C677T多态性性检测采取经典酚-氯仿方法提取外周血基因组DNA。根据MTHFR C677T基因的核苷酸序列设计各个位点的扩增引物使用PCR扩增目的基因片段。PCR 扩增引物序列:MTHFR C677T(MTHFR C677T)引物为:上游:5’-TGCCAGAGCCGTGGCCTGGG-3’;下游:5’-ACTCCCCGCCTCTTTTCCGAC-3’;PCR反应体系(25 μl)包含100 ng提取DNA,1.0 UTaq酶,2 μl上游以及下游引物2×PCR buffer。PCR反应条件: 95℃变性6 min;94℃ 30 s,60℃ 30 s,72℃ 45 s 30个循环;最后72℃延伸10 min。限制性内切酶BsaHI, NlaIII酶切。酶切产物进行3%琼脂糖电泳;EB染色成像以此判定酶切基因型。

2　结果

2.1一般情况2组年龄、性别比、体重指数差异无统计学意义(P>0.05)。而吸烟、饮酒、乙型肝炎、肝癌家族史差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1　2组一般资料比较

2.2MTHFR C677T多态性与肝癌易感性MTHFR C677T 对照组和病例组均符合Hardy-Weinberg平衡法(χ2=0.34,P=0.24,χ2=0.41,P=0.19);MTHFR C677T基因型CT的患病风险是基因型TT的1.14倍(OR=1.14,95%CI: 1.05,1.52,P=0.038);CC基因型者患病风险是基因型TT的1.54倍(OR=1.54,95%CI: 1.22,2.89,P=0.000);C基因携带者(CC+CT)患病风险是非C基因携带者(TT)的1.44倍(OR=1.44,95%CI: 1.28,2.61,P=0.000),利用非条件logistic回归分析校正吸烟、家族史、乙型肝炎等因素T基因携带者(TT/CT)患病风险是非T基因携带者(CC)1.53倍(OR=1.53,95%CI: 1.31,3.01,P=0.000)。见表2。

表2　MTHFR C677T基因型分布以及肝癌易感性关系

注：*:校正吸烟、家族史、饮酒、乙型肝炎

2.3MTHFR C677T多态性与饮酒交互作用采用非条件Logistic分析MTHFR C677T多态性与饮酒交互作用,以携带TT基因不饮酒个体相比, 携带CT/CC基因型不饮酒 个体罹患肝癌风险增加1.26倍(OR=1.26,95%CI:1.12,1.97,P=0.024),携带TT基因型饮酒个体罹患肝癌风险增加1.19倍(OR=1.19,95%CI: 1.06,2.14,P=0.041)，携带CT/CC基因型饮酒 个体罹患肝癌风险增加3.39倍(OR=3.39,95%CI: 2.66,5.36,P=0.000;RERI=1.83,95%CI:1.21,2.78;API=0.46,95%CI:0.28,0.76;S=1.31,95%CI:1.08,2.17)RERI和AP值95%CI不包括0、S值95%CI不包括1。相加交互作用分析结果表明OR=1.67,95%CI:1.21,2.87。见表3。

3　讨论

人类MTHFR C677T基因位于染色体因定位于染色体4q11～q15区，目前发现其该基因存在近10个多态性位点, MTHFRC催化生成的叶酸在不同个体水平呈现一定的差异，这可能与MTHFRC677T多态性有关[7,8]。肝癌发病除与肝炎病毒感染有关外,还与饮食以及遗传感染密切相关[1]。现已有研究报道提示MTHFR C677T多态性与各种肿瘤易感性密切相关[4]。近年来,流行病学不断证实遗传因素在肝癌发病中发挥着重要作用。从遗传易感性角度确定肝癌高危人群，并进行针对性的预防是目前降低肝癌发生风险的有效措施。迄今为止，国内外MTHFRC677T 多态性与肝癌易感性的关系可见报道。我国发现在我国西南四川地区人群中肝癌发病MTHFR C677T多态性有明显相关[8]。而另外研究发现上海地区男性肝癌发病与MTHFRC677T多态性无明显的相关[9]。上述结果提示不同地区MTHFRC677T基因多态性与肝癌的关联性表现出一定的差异。恩施处于我国西南地区,为此我们选取恩施地区个体为研究对象, 探讨恩施地区人群MTHFRC677T 多态性与易感性关联性及多态性与饮酒交互作用。

表3　MTHFR C677T多态性与饮酒 二者交互作用

注：*: 校正吸烟,家族史,乙型肝炎;Padd:相加交互作用P值;Pmulti:相乘交互作用P值

本文通过病例-对照实验分析发现MTHFRC677T 携带C(CC/CT)基因个体患病风险较非C基因携带者(TT)风险明显增加1.44倍。吸烟,家族史,饮酒,乙型肝炎均为肝癌的危险因素[1]。为了排除这些混杂因素在MTHFRC677T 多态性与肝癌关联性研究中的影响,本文采取非条件Logistic回归予以校正,校正后发现MTHFRC677T 多态性与肝癌仍有显著的关联性。众所周知肝癌患病是个体遗传因素与外界环境因素共同作用的结果[1],为了进一步探讨MTHFRC677T多态性与饮酒 对肝癌患病是否有交互作用。本文可采用非条件Logistic回归分析予以验证[5]。结果还表明携带CC/CT基因型饮酒 个体肝癌罹患风险是携带TT基因非饮酒个体3.39倍,提示MTHFRC677T多态性与饮酒在肝癌发病中存在协同作用MTHFRC677T多态性和饮酒在肝癌病及其他疾病中交互作用鲜见报道,其机制目前尚无法阐明。日本学者报道MTHFRC677T多态性与饮酒存在肺癌发病中存在协同效应[10]。参照MTHFRC677T多态性可以影响叶酸生成的相关报道[7,8], MTHFRC677T既可直接增加肝癌易感性[11],同时也可以影响叶酸的生成而间接增加肝癌易感性而发挥协同效应[1]。本研究存在一定不足,最显著的是诊断是只考虑了是否饮酒 ,而没有充分考虑饮酒的严重程度。其次,本文仅仅考虑饮酒,而没有考虑生活习惯以及环境因素的影响。再次,研究中样本量较小,需要进一步扩大样本量。

综上所述, MTHFRC677T多态性可以增加个体肝癌罹患风险,且和饮酒在肝癌发病中发挥着协同作用，本研究存在一定不足,为更好研究MTHFR C677T 多态性在肝癌易感性以及与饮酒的交互作用尚需要开展更大样本量,设计更严谨的研究。

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9Zhu ZZ,Cong WM,Liu SF,et al.A study on the association of MTHFR C677T polymorphism with genetic susceptibility to hepatocellular carcinoma.Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi,2006,14:196-198.

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10.3969/j.issn.1002-7386.2016.21.042

445000湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院消化科(雷蕾、李旭、贺建华)，普通外科(马兵、黎磊)

R 735.7

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1002-7386(2016)21-3339-03

2016-04-14)