黄芪灵芝口服液对雏鸡免疫功能的影响

周泽伟，刘浩，王凯，余峥嵘，殷冬来，韩玲玲，张雨梅，2

（1.扬州大学兽医学院，江苏扬州225009；2.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009）

黄芪灵芝口服液对雏鸡免疫功能的影响

周泽伟1，刘浩1，王凯1，余峥嵘1，殷冬来1，韩玲玲1，张雨梅1，2

（1.扬州大学兽医学院，江苏扬州225009；2.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009）

为了研究黄芪灵芝口服液对雏鸡免疫功能的促进作用，将180只7日龄雏鸡随机分成9组，1～3组为黄芪灵芝口服液高、中和低剂量组；4～6组分别是环磷酰胺（CY）+黄芪灵芝口服液高、中和低剂量组；7～9组分别为环磷酰胺组、阳性对照组及生理盐水组。分别于用药后5、10 d和15 d测定免疫器官指数、脾淋巴细胞增殖及血清中IL-2水平。结果表明，黄芪灵芝口服液高、中、低剂量组的胸腺指数显著高于生理盐水组，与环磷酰胺共处理各组的胸腺指数均显著高于CY组（P＜0.05）。高、中剂量组的脾脏指数显著高于生理盐水组（P＜0.05）。高、中、低剂量组脾淋巴细胞增殖及IL-2水平显著高于生理盐水组；与环磷酰胺共处理组淋巴细胞刺激指数和IL-2水平显著高于CY模型组（P＜0.05）。黄芪灵芝口服液对雏鸡免疫功能具有促进作用，在一定程度上能有效拮抗环磷酰胺引起的免疫抑制，可望作为一种免疫增强剂。

黄芪；灵芝；雏鸡；免疫功能；免疫增强剂

我国传统的中草药作为免疫增强剂已有上千年的历史，分布广阔，种类多达5 000余种，研究表明，具有肯定免疫增强作用的中药有200多种［1］，并且随着研究种类在不断增加。中草药免疫增强剂主要为补益类药，能够扶正固本，提高正气驱除邪气，如黄芪、灵芝、人参、枸杞子、五味子、何首乌、肉桂等。其中补益类药黄芪和灵芝的主要有效活性成分分别为黄芪多糖和灵芝多糖，均具有抑菌抗病毒、抗肿瘤、抗应激及调节机体代谢等作用［2-4］，可作为免疫调节剂或促进剂。

黄芪灵芝多糖口服液，是由一定工艺提取的黄芪多糖和灵芝多糖复配而成的新制剂，有效成分为黄芪多糖和灵芝多糖。本研究采用环磷酰胺复制免疫抑制模型，通过测定免疫器官指数、脾淋巴细胞转化率、血清中IL-2含量。考察黄芪灵芝口服液对雏鸡免疫功能的促进作用。

1材料与方法

1.1试验鸡1日龄黄羽肉鸡200只，以及饲料，均购自中国农业科学院家禽研究所（扬州），常规饲养，适应1周后用于试验。

1.2药品黄芪灵芝口服液，某动物保健品有限公司提供，有效成分为黄芪多糖（5.5 mg/mL）和灵芝多糖（0.5 mg/mL），批号20131222。注射用环磷酰胺（CY），200 mg/支，江苏恒瑞医药股份有限公司。黄芪精口服液，10 mL/支，为含6.5 mg/mL黄芪多糖的水溶液，批号13092402，江苏聚荣制药集团有限公司。

1.3主要试剂RPMI 1640培养基，美国Gibco公司；胎牛血清，HyClone公司；RPMI1640完全培养液内含200 IU/mL青霉素、200 μg/mL链霉素、10%胎牛血清。刀豆蛋白AⅣ，Sigma公司。淋巴细胞分离液（1.077±0.002），北京索莱宝科技有限公司；鸡IL-2 ELISA试剂盒，杭州贝硕生物科技有限公司；其他试剂为国药集团化学试剂有限公司。

1.4方法

1.4.1试验分组7日龄黄羽肉鸡，随机分成9组，每组20只。试验分组如下：黄芪灵芝口服液高剂量（10 mL/kg体重）、中剂量（5 mL/kg体重）和低剂量组（1 mL/kg体重）；80 mg/kg体重环磷酰胺组；环磷酰胺+黄芪灵芝口服液高、中和低剂量组；1 mL/kg黄芪精口服液阳性对照组，生理盐水阴性对照组。黄芪灵芝口服液、阳性对照及生理盐水灌服给予，每天1次连用5 d。环磷酰胺肌肉注射，每天1次连用3 d。分别于用药后5、10、15 d随机取6只鸡，测定免疫器官指数、脾脏淋巴细胞转化率及血清中IL-2水平。

1.4.2免疫器官指数称量体重、胸腺、腔上囊、脾脏的重量，分别计算胸腺指数、脾脏指数、腔上囊指数。

免疫器官指数=免疫器官鲜重（g）/体重（kg）1.4.3脾淋巴细胞增殖试验鸡脾淋巴细胞悬液制备，淋巴细胞转化试验及刺激指数计算同文献［5］。1.4.4血清中IL-2测定按鸡IL-2 ELISA试剂盒操作说明书进行，测定雏鸡血清中IL-2水平。

1.5数据分析采用SPSS17.0软件进行数据分析。采用单因素方差分析Duncan′s法进行统计分析。

2结果与分析

2.1黄芪灵芝口服液对雏鸡免疫器官的影响不同剂量黄芪灵芝口服液对雏鸡脾脏、胸腺及腔上囊指数的影响见表1。

表1不同剂量黄芪灵芝口服液对雏鸡免疫器官指数的影响

由表1可以看出，环磷酰胺组脾脏、胸腺及腔上囊指数均显著低于生理盐水组（P＜0.05）。与环磷酰胺组比较，环磷酰胺+黄芪灵芝口服液各组脾脏指数虽增加，但差异不显著（P＞0.05）；胸腺指数均显著提高；给药后15 d中剂量组腔上囊指数差异显著（P＜0.05）。黄芪灵芝口服液高、中剂量组及阳性对照组雏鸡脾脏指数显著高于生理盐水组（P＜0.05），高、中剂量组与阳性对照组无显著性差异。与生理盐水组比较，黄芪灵芝口服液高、中、低剂量组，胸腺指数差异显著（P＜0.05），与阳性对照组比较无显著性差异（P＞0.05）；高、中、低剂量组腔上囊指数均高于生理盐水组，但只有中剂量组差异显著（P＜0.05）。

2.2黄芪灵芝口服液对雏鸡脾淋巴细胞增殖的影响不同剂量黄芪灵芝口服液处理后，雏鸡脾淋巴细胞刺激指数见表2。

表2不同剂量黄芪灵芝口服液对雏鸡脾淋巴细胞刺激指数的影响

除了用药10 d时高、低剂量组外，用药5～

15 d，黄芪灵芝口服液各组脾淋巴细胞刺激指数均显著高于生理盐水组（P＜0.05）。环磷酰胺+黄芪灵芝口服液高、中、低各组脾淋巴细胞刺激指数均高于对应日龄的环磷酰胺组（P＜0.05），从对脾脏淋巴细胞增殖的影响，可以说明黄芪灵芝口服液可有效对抗环磷酰胺造成的免疫抑制。

2.3黄芪灵芝口服液对雏鸡血清中IL-2水平的影响雏鸡经不同处理后，ELISA法测定血清中

IL-2的数据见表3。

表3不同剂量黄芪灵芝口服液对雏鸡血清中IL-2的影响（OD450）

由表3可以看出，环磷酰胺及生理盐水对照组鸡血清中IL-2水平无显著差异（P＞0.05）。用药15 d时黄芪灵芝口服液单独处理或与环磷酰胺共处理各组，血清中IL-2的水平均显著高于生理盐水组和环磷酰胺对照组（P＜0.05），与阳性对照组无显著性差异（P＞0.05）。用药5～10 d时，除了用药10 d时环磷酰胺组+黄芪灵芝口服液中剂量组显著高于生理盐水组和环磷酰胺组（P＜0.05）外，其他处理组差异均不显著（P＞0.05）。

3讨论

腔上囊、胸腺和脾脏是禽类的主要免疫器官，介导全身的体液免疫和细胞免疫。因此，对免疫器官的影响是评价其对机体免疫调节效果的重要指标。本试验表明，不同剂量的黄芪灵芝口服液能促进免疫器官的发育，并能有效地拮抗环磷酰胺对脾脏和胸腺的免疫抑制，与以往研究报道相似［6-8］。

淋巴细胞转化是评价机体免疫功能的重要指标之一。黄芪灵芝口服液能够促进脾脏淋巴细胞增殖并能有效的拮抗环磷酰胺造成的免疫抑制，且具有一定的剂量效应。Chen等［9］报道，黄芪多糖能协同ConA刺激鸡脾淋巴细胞的增殖，在40、80、160 μg/mL时增殖作用呈剂量依赖性增加。黄芪灵芝口服液一定程度上还能够提高血清中IL-2含量，与类似研究结果一致［10］。

综上所述，黄芪灵芝口服液能够促进雏鸡机体的免疫功能，可作为一种新型的免疫增强剂。

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S853.7

B

0529-6005（2016）08-0059-03

2015-07-10

江苏省高校优势学科建设工程项目资助；扬州大学“新世纪人才工程”资助

周泽伟，男（1988-），硕士生，研究方向为兽医药理与毒理学，E-mail：dzwzhilu@163.com

张雨梅，E-mail：zym@yzu.edu.cn