金水宝胶囊联合二甲双胍对糖尿病勃起功能障碍大鼠糖代谢、AGEs及AngⅡ的实验研究

尤传静 吴强 杨晓玉

【摘要】目的：观察金水宝胶囊对糖尿病勃起功能障碍大鼠血糖、糖化血红蛋白、晚期糖基化终产物（AGEs）及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的影响。方法：采用SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ），造模后第3d、第1周、第2周断尾取血检测血糖，当血糖大于16.6 mmol/L时同时颈项皮肤松软处注射阿朴吗啡无勃起，提示糖尿病勃起功能障碍大鼠模型造模成功。将动物随即分为金水宝高剂量治疗组、金水宝中剂量治疗组、金水宝低剂量治疗组、阳性对照组、模型组各10只，各组间大鼠体重、血糖无显著性差异。同时留10只作为空白对照组。给药8周后测定大鼠血糖浓度、糖化血红蛋白含量、AGEs及AngⅡ水平。结果：与模型组相比，金水宝高、中、低剂量治疗组均能够降低血糖、糖化血红蛋白、AGEs及AngⅡ水平（P<0.01），但以金水宝高剂量组最显著（P<0.01），其中血糖监测中，金水宝中、低剂量组治疗组之间无意义，糖化血红蛋白中，金水宝低剂量治疗组与阳性对照组之间无意义。AGEs及AngⅡ水平的金水宝中、低剂量治疗组之间无统计学意义（P>0.05）。结论：金水宝能有效协助降低血糖、糖化血红蛋白、AGEs及AngⅡ水平，其中金水宝高剂量治疗组疗效最显著，为该制剂临床用于治疗糖尿病勃起功能障碍提供了实验理论依据。

【关键词】金水宝胶囊；血糖；糖化血红蛋白；晚期糖基化终产物；血管紧张素

Effect of Jinshuibao Capsuleand melbine on blood glucose， AGEs and AngII levels in rats with diabetic erectile dysfunctionYOU Chuanjing1， WU Qiang1△， YANG Xiaoyu2. 1. Andrology Department， Shuyang County Traditional Chinese Medicine Hospital， Suqian 235000， Jiangsu， China； 2. Reproductive Medicine Center， Jiangsu Province Peoples Hospital， Nanjing 210029， Jiangsu， China

【Abstract】Objectives： To observe the influence of Jinshuibao Capsule and melbine on blood glucose， GHb， AGEs and AngII levels in rats with diabetic erectile dysfunction. Methods： Rats were injected with intraperitoneal STZ to establish their DED model and randomly divided into five groups： control group， model group and Jinshuibao capsule high/ medium /low dose group. The fasting blood glucose concentration， glycated hemoglobin levels and advanced glycation end-products and angiotensin of rats were determined in 8 weeks later. Results： Compared with model group， Jinshuibao capsule high， medium and low dose group and melbine can decrease the AngII level （P< 0.01）， the most significant in high dose group （P< 0.01）. Medium and low dose group had no statistically significant difference in blood glucose， FPG and AGEs and AngII （P>0.05）； low dose group and control group had no statistically significant difference in glycosylated hemoglobin （P>0.05）. Conclusions： Jinshuibao Capsule can reduce blood glucose and glycated hemoglobin level， AGEs and AngII expression， especially used in high dose， which provides basis for clinical treatment of diabetic neuropathy.

【Key words】Jinshuibao Capsule； Blood glucose； Glycated hemoglobin； Advanced glycation end-products； Angiotensin

【中图分类号】R698+.1；R-33；R96；R587.1【文献标志码】A

糖尿病（diabetesmellitus， DM）是由遗传、环境及其他多方面因素共同影响而引起的一系列以糖代谢紊乱为主要临床表现的综合征。目前我国糖尿病患者已有几千万，为全球糖尿病患者最多的国家。到目前为止无法根治，仅仅可以通过药物、饮食、生活习惯等加以控制。糖尿病本身并不致命，但糖尿病引发的各种急慢性并发症，往往影响了患者的工作及生活，甚至危及生命[1]。糖尿病引起的勃起功能障碍是其常见的并发症之一。冬虫夏草是虫草菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫绿蝙蝠幼虫体上的子座及幼虫尸体。据相关研究表明，冬虫夏草具有降糖、降血脂、抗氧化及提高免疫力等作用[2，3]。本实验用药为冬虫夏草的提取物，用于糖尿病神经血管病变，本实验在链脲佐菌素性糖尿病勃起功能障碍大鼠上观察其对血糖、糖化血红蛋白、晚期糖基化终产物（AGEs）及血管紧张素（AngⅡ）的影响，为进一步应用提供实验理论依据。

1材料与方法

1.1主要仪器及试剂

血糖仪及试纸（强生医疗有限公司，批号：01387129）、电子天平（北京赛多利斯天平有限公司 B303型，批号：K20080229）、STZ（美国Sigma公司，批号：F20130226）、AGEs试剂盒及AngⅡ试剂盒（上海源叶生物科技有限公司，批号：F09082011）、GHb检测试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：21751370）、755B紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司，批号：I001023）、枸橼酸缓冲液（北京中杉实验公司，批号：F20100809）、金水宝胶囊（江西济民可信金水宝有限公司，规格0.33g/粒，批号：150220，国药准字：Z1089003）、二甲双胍片（上海信谊药业有限公司，规格0.25g/粒，批号：1150435，国药准字：150220）。

1.2实验动物及分组

选取180～220g健康雄性SD大鼠80只，均购自安徽医科大学动物实验中心，许可证号：SCXK（皖）2011-002。分笼饲养，标准饲料，自由饮水。动物房适应1周后，造模前断尾测血糖，所有大鼠血糖均在正常范围内（3.9～6.1mmol/L）。参照文献[4]进行造模。造模前所有大鼠禁食12h，然后给予STZ 60mg/kg，腹腔注射，造模后第3d、第1周、第2周断尾取血检测血糖，当血糖大于16.6mmol/L时，提示糖尿病模型造模成功。80只SD雄性大鼠，10只作为空白对照组，70只用于糖尿病造模，13只大鼠在造模过程中死亡，57只大鼠糖尿病模型成功。糖尿病模型造模成功后，在黑暗及安静环境下，在大鼠颈项皮肤松软处给予阿朴吗啡（APO）100μg/kg注射，然后仔细观察30min，阴茎头充血及末端阴茎体露出则判断为阴茎勃起。没有勃起则提示糖尿病勃起功能障碍大鼠模型造模成功。其中2只大鼠勃起功能障碍造模失败。再次造模成功的大鼠按随机数字表法被随机分成五组：金水宝高、中、低剂量治疗组各10只、阳性对照组10只、模型组15只。各组间大鼠体重、血糖无显著性差异。5只模型组大鼠在饲养过程中死亡，可能与持续的高血糖状态有关。金水宝高、中、低治疗组剂量分别为金水宝胶囊各1.5g/kg·d、1.0g/kg·d、0.5g/kg·d联合二甲双胍g/kg·d灌胃，阳性对照组仅为二甲双胍0.2g/kg·d灌胃。模型组大鼠及空白对照组大鼠均喂以普通饲料至实验结束。

1.3检测指标及方法

检测血糖使用断尾取血法，使用血糖仪检测。实验结束禁食12h，戊巴比妥钠（35mg/kg）腹腔注射麻醉后，腹主动脉取血，离心，留取血清，标记后置冰箱保存备用，以检测糖化血红蛋白及AGEs。同时用血管紧张素放射免疫法测定血浆AngⅡ水平。

1.4统计方法

采用SPSS17.0 for windows统计软件，各组计量资料以均数±标准差（±s）表示，符合正态分布的资料，治疗前后比较采用配对t检验，组间比较采用两样本t检验，不符合正态分布的资料，用秩和检验。多样本间比较用方差检验。P<0.01有极显著差异，P<0.05为有显著差异。

2结果

2.1血糖的变动情况

与空白组相比较，模型组大鼠血糖显著升高（P<0.01），各组均能够降低血糖，金水宝高、中、低剂量治疗组及阳性对照组与模型组相比均有意义，其中金水宝中、低剂量治疗组之间无统计学意义（P>0.05）。金水宝高剂量治疗组在降低糖尿病大鼠的血糖水平协助作用明显。见表1。

2.2糖化血红蛋白水平的改变

与空白对照组相比较，模型组大鼠糖化血红蛋白升高明显（P<0.01），各组均能够降低糖化血红蛋白水平，金水宝高、中、低剂量治疗组及阳性对照组与模型组相比均差异显著，其中金水宝低剂量治疗组与阳性对照组之间相比无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.3AGEs及AngⅡ的改变

与空白对照组比较，模型组AGEs及AngⅡ显著上升（P<0.01）；与模型组相比，金水宝高、中、低治疗组皆可降低AGEs及AngⅡ的水平（P<0.01）；阳性对照组亦可降低AGEs及AngⅡ水平，经分析有统计学意义（P<0.01），但金水宝中剂量治疗组与低剂量治疗组相比无统计学意义（P>0.05）。见表2。

3讨论

糖尿病勃起功能障碍属中医“消渴”、“阳痿”等范畴。消渴之名，首见于《素问·奇病论》：“此肥美之所发也，此人必数食甘美而多肥也，肥者令人内热，甘者令人中满，故其气上溢，转为消渴。” “消渴”往往辨证为肾虚血瘀，最后发展为阴阳两虚之症。《外台秘要·消渴消中》说：“房室过度，致令肾气虚耗故也，下焦生热，热则肾燥，肾燥则渴。”《临证指南医案》曰：“心境愁郁，内火自燃，乃消证大病。”明代张介宾在《景岳全书》中也有阳痿的专章论述。指出阳痿的病因“多由命门火衰、精气虚冷，或以七情劳倦，损伤生阳之气……亦有因湿热炽盛，以致宗筋驰纵。”本病的基本病机为心、肝、脾、肾、肺受损，气血阴阳亏耗，尤其是阳气不足，以致宗脉失养；久病入络，脉络瘀阻，宗筋失用。其中以阳气亏虚为主，或兼夹气滞血瘀﹑肝郁脾虚和湿热痰浊。本病乃为本虚标实，虚实夹杂之证，较为复杂。金水宝胶囊的主要成分为冬虫夏草的提取物，冬虫夏草本身具有补益肺肾之气及滋阴强精之效，和“消渴”之症候符合。

血糖的检测，往往只能反映当时的血糖水平，不能作为评价糖尿病控制情况的指标，而糖化血红蛋白可以则反映在一定的时间内整体血糖的控制情况，它是在血液中可以和葡萄糖结合的血红蛋白，血糖的浓度越高，其基化的速度越快，同时造成长寿组织蛋白糖化，加速AGEs及AngⅡ的生成，进一步诱发糖尿病的神经血管病变[5]。糖尿病大血管病变会直接影响到阴茎血流的灌注量，再加上长期微血管病变，起到了协同作用，导致阴茎海绵体组织缺氧、缺血，进而进一步破坏海绵体的超微结构，如平滑肌减少、纤维化增多和白膜损伤等。勃起功能障碍是糖尿病的常见并发症，在糖尿病人群中，国内外报道的发病率为19%～86.3%[6，7]，是非糖尿病患者的2～5倍[8，9]。Fedel等[10]研究表明，26%（360/1383）的1型糖尿病患者和37%（3098/8373）的2型糖尿病患者存在ED，2型高于1型。孙清元等[11]调查发现糖尿病伴有勃起功能障碍的患病率为47.62%，明显高于正常人群。糖尿病人患ED的发病率高达75%，尤其是中年男性患者，比非糖尿病患者高出3～5倍，并随年龄和病程的增长明显增加[12，13]。AGEs在血管壁的大量堆积能引起胶原纤维间过度的共价交联，使胶原纤维机械强度增加，血管硬化。因此AGEs可以通过各种途径引起糖尿病血管病变，从而促进勃起功能障碍的发生发展。同时AGEs的形成是糖尿病神经病变的重要因素，糖尿病患者不仅仅血清AGEs增加，周围神经组织中的含量也增多，最终损伤神经功能和病理改变。其导致病变的机制可能为：改变蛋白质的结构进而改变其功能、抑制NO的生成、与细胞膜上的ARGE结合，改变信号传导途径，导致氧化应激及免疫反应[14]。糖尿病患者血液中AngⅡ浓度升高，尤其阴茎组织局部AngⅡ显著增高，一方面可使得海绵体血管及海绵体平滑肌产生收缩，减少进入阴茎海绵体中的血液流量，同时AngⅡ还可以引起血管壁增厚，损伤血管舒缩功能，造成勃起功能障碍。有关研究表明，DM动物的血浆和组织中的AngⅡ浓度、ACE的活性显著高于正常动物[15]。本实验结果表明，高剂量治疗组能明显降低大鼠血糖及糖化血红蛋白的含量，同时降低AGEs及AngⅡ，为临床用于治疗糖尿病引起的勃起功能障碍提供了理论支持。研究表明，金水宝高、中、低治疗组之间，区别较明显，说明疗效与药物浓度之间可能存在一定的关系。同时中药提取物相对传统中药有服用简单方便、易于吸收、副作用小的优点，更容易被患者接受，配合原降糖药，可以达到协助降糖，同时控制糖尿病相关神经血管病变的作用，值得临床推广。

参考文献

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