外周血调节性T细胞在尿毒症血液透析前后的变化及临床意义

张俊涛，周文英，何冬黎，彭蔚芳(.珠海市第二人民医院肾内科，广东珠海5900；.中山大学附属第五医院检验科，广东珠海59000)

·临床经验·

外周血调节性T细胞在尿毒症血液透析前后的变化及临床意义

张俊涛1，周文英2，何冬黎1，彭蔚芳1
(1.珠海市第二人民医院肾内科，广东珠海519020；2.中山大学附属第五医院检验科，广东珠海519000)

目的探讨尿毒症患者血液透析前后外周血调节性T细胞(Treg)及其细胞因子转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)的变化及临床意义。方法选择2014年8月至2016年2月期间我院收治的行血液透析治疗的50例尿毒症患者纳入观察组，50例健康体检者纳入对照组，检测对照组入组次日及观察组透析治疗前、治疗1个月、3个月及6个月时外周血Treg及IL-10、TGF-β1水平，并同时检测肾功能水平。结果观察组治疗前Treg及其细胞因子TGF-β1、IL-10含量分别为(2.08±0.23)%、(1.78±0.21)%、(1.56±0.19)%，均低于对照组的(7.27±1.02)%、(5.28±0.88)%及(4.79±0.75)%，Scr、BUN分别为(998.47±100.38)μmol/L、(32.19±5.22)mmol/L，均高于对照组的(78.56±30.18)μmol/L、(5.53±3.21)mmol/L，差异均有统计学意义(P＜0.05)；透析治疗后，观察组Treg、TGF-β1、IL-10含量在治疗1个月、3个月、6个月时间点较治疗前逐级上升，差异有统计学意义(P＜0.05)；但是治疗6个月后Treg、TGF-β1、IL-10含量分别为(3.48±0.35)%、(3.19±0.28)%、(2.89±0.26)%，仍然低于对照组含量，差异均有统计学意义(P＜0.05)；观察组Scr、BUN在治疗1个月、3个月、6个月时间点较治疗前逐级下降，差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论尿毒症患者存在免疫功能紊乱，血液透析有助于改善机体的免疫功能。

血液透析；尿毒症；免疫功能；调节性T细胞

尿毒症是各种慢性肾脏疾病的最终肾功能衰竭阶段，患者普遍存在免疫功能紊乱和低下[1]，是尿毒症患者容易合并严重感染等并发症的重要影响因素之一。目前血液透析是尿毒症治疗最常用的肾脏替代治疗方法，可有效缓解尿毒症患者的临床症状、延长患者的生存时间。调节性T细胞(Treg)是具有免疫调节功能的一群T淋巴细胞，在机体免疫应答作用中占据了重要的地位[2]。本研究通过对尿毒症行血液透析患者的外周血中Treg及其细胞因子转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)进行检测，探讨尿毒症患者血液透析前后外周血Treg及TGF-β1、1IL-10的变化及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2014年8月至2016年2月期间于珠海市第二人民医院肾内科收治的50例行血液透析治疗的尿毒症患者，其中男性33例，女性17例；年龄20～75岁，平均(48.6±11.7)岁；慢性肾小球肾炎22例，糖尿病肾病12例，高血压肾病8例，梗阻性肾病5例，多囊肾3例。排除标准：年龄＜18岁或＞80岁者；活动期的免疫系统疾病或肿瘤患者；近8周内服用激素及免疫调节剂的患者；近期急性感染性疾病患者；病情危重或存在严重心、肝、脑等多脏器功能衰竭患者。选取同期健康体检者50例作为对照组，其中男性22例，女性18例；年龄21～70岁，平均(45.8±10.4)岁。两组受检者在年龄、性别等一般资料方面比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治疗方法观察组患者均接受常规碳酸氢盐透析治疗，每次4 h，每周3次，使用一次性聚砜膜透析器(Polyflux 17R膜，膜面积1.7m2)，血管通路为动静脉内瘘或带隧道带涤纶套导管，普通肝素抗凝，剂量个体化。血流量250～300m L/m in，透析液流量500m L/min。

1.3 观察指标对照组于入组次日，观察组分别于首次透析治疗前、透析1个月、透析3个月、透析6个月时间点采集当日透析前静脉血5m L。采用流式细胞流式细胞仪(型号Cell Lab QuantaSC)检测CD25+CD4+T细胞所占T细胞总数的百分比，代表CD4+CD25+调节性T细胞百分含量，检测Treg的(IL-10)及TGF-β1的百分含量。其中CD4-FITC、CD25-PE、TGF-β1及IL-10抗体购自BECTON DICKINSON。同时使用全自动生化分析仪检测患者血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平。

1.4 统计学方法应用SPSS17.0统计学软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

观察组患者治疗前的Treg及其细胞因子TGF-β1、IL-10含量均低于对照组，Scr、BUN水平均高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)；透析治疗后，观察组患者的Treg、TGF-β1、IL-10含量在治疗1个月、3个月、6个月时间点较治疗前逐级上升，差异均有统计学意义(P＜0.05)；但是治疗6个月后，观察组患者Treg、TGF-β1、IL-10含量仍然低于对照组水平，差异均有统计学意义(P＜0.05)；观察组Scr、BUN水平在治疗1个月、3个月、6个月时间点较治疗前逐级下降，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 对照组与观察组外周血Treg及其细胞因子含量、肾功能水平的比较(±s)

表1 对照组与观察组外周血Treg及其细胞因子含量、肾功能水平的比较(±s)

注：与对照组比较，a P＜0.05；与治疗前比较，b P＜0.05；与治疗1个月比较，c P＜0.05；与治疗3个月比较，d P＜0.05。

组别对照组观察组治疗前治疗1个月治疗3个月治疗6个月Treg及其细胞因子含量(%)肾功能Treg 7.27±1.02 TGF-β1 5.28±0.88 IL-10 4.79±0.75 Scr(µmol/L) 78.56±30.18 BUN(mmol/L) 5.53±3.21 2.08±0.23a 2.74±0.31b 3.09±0.33c 3.48±0.35da 1.78±0.21a 2.19±0.23b 2.78±0.25c 3.19±0.28da 1.56±0.19a 2.04±0.22b 2.41±0.24c 2.89±0.26da 998.47±100.38 a 889.68±77.54b 856.31±60.22c 789.65±59.39d 32.19±5.22a 27.37±3.21b 24.87±2.98c 21.39±2.79d

3 讨论

尿毒症患者因肾功能衰竭、肾小球滤过功率下降，引起患者体内各种尿毒症毒素潴留、蓄积，加之营养不良、微炎症状态、代谢性酸中毒、继发性甲状旁腺功能亢进等并发症的影响，患者常常出现免疫功能紊乱，主要是表现为细胞免疫功能低下[3-4]。血液透析是目前治疗尿毒症的最常用的肾脏替代治疗手段，可通过半透膜利用弥散、对流、吸附等原理清除体内过多的液体和电解质、代谢废物，纠正代谢性酸中毒。但是对于血液透析对免疫功能的影响目前尚存在不同意见[5]。

T淋巴细胞亚群是由一群具有不同功能的、异质性淋巴细胞所组成，根据细胞表面标志物分子可将其分为不同的功能亚群。CD4+CD25+Treg是一类新近被认识、特殊的调节性T淋巴细胞亚群，它以一种主动性的方式调控机体的免疫应答，具有免疫增强或下调的双重作用，因此被称为调节性T细胞[6]。一旦该细胞出现数量缺乏或功能缺陷则会引起自身免疫功能紊乱，因而Treg的变化可在一定程度上反映机体的细胞免疫功能状态[7]。Treg除表达CD4分子和CD25分子以外，其主要特点是以分泌细胞因子IL-10及TGF-β1为主，IL-10及TGF-β1是Treg执行免疫调节功能的重要物质基础[8]。其中TGF-β1是调节细胞增殖生长、分化以及合成和沉淀细胞外基质功能的细胞因子。IL-10可起到抑制前炎性细胞因子和趋化因子产生的作用[9]。Treg与慢性肾功能衰竭密切相关，冯晓晨等[10]探索了Treg及TGF-β1在尿毒症患者免疫机制中的作用，结果发现患者Treg细胞百分比及TGF-β1水平均显著低于健康人群。本研究发现，尿毒症患者治疗前外周血Treg及其细胞因子TGF-β1、IL-10均低于对照组，进一步说明尿毒症患者存在免疫功能紊乱。随着血液透析时间的进展，观察组患者的Treg、TGF-β1及IL-10表达水平均显著上升，肾功能指标Scr、BUN显著下降。说明尿毒症患者通过血液透析治疗后，尿毒症毒素在一定程度上被清除，机体的免疫功能较透析前有所恢复。患者透析治疗6个月后外周血Treg、TGF-β1及IL-10依然低于对照组，也说明尿毒症患者因为肾功能衰竭，血液透析作为肾脏替代治疗手段无法完全纠正患者的免疫功能紊乱。

综上所述，通过流式细胞仪动态监测尿毒症患者外周血中的Treg及TGF-β1、IL-10含量的变化可反映患者的免疫功能状态，血液透析有助于改善部分免疫功能。

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Changes and clinical significance of regulatory T cells in peripheral blood in urem ic patients before and after hemodialysis.

ZHANG Jun-tao1,ZHOUWen-ying2,HEDong-li1,PENGWei-fang1.1.Departmentof InternalMedicine, the Second People's Hospital of Zhuhai,Zhuhai 519020,Guangdong,CHINA;2.Department of Laboratory,the Fifth HospitalAffiliated to Sun Yat-sen University,Zhuhai519000,Guangdong,CHINA

Objective To investigate the changes and clinical significance of regulatory T cells(Tregs)and IL-10,TGF-β1in peripheral blood in uremic patients before and after hemodialysis.Methods A total of 50 cases of urem ic patients,who treated by hemodialysis in our hospital from Aug.2014 to Feb.2016,were chosen as theobservation group,and 50 casesofhealthy peoplewere included into the controlgroup.The peripheralblood Treg,IL-10,TGF-β1levels and renal function of the control group at the next day,and of the observation group before dialysis,1 month,3 months and 6months after treatment,were detected.Results Before treatment,the Treg and cytokine TGF-β1,IL-10 in the observation group[(2.08±0.23)%,(1.78±0.21)%,(1.56±0.19)%,respectively]were significantly lower than those of the controlgroup[(7.27±1.02)%,(5.28±0.88)%,(4.79±0.75)%,respectively].The Scrand BUN in the observation group[(998.47±100.38)µmol/L,(32.19±5.22)mmol/L]were significantly higher than those of the control group [(78.56±30.18)µmol/L,(5.53±3.21)mmol/L](P＜0.05).Compared w ith before treatment,the Treg,TGF-β1and IL-10 in the observation group at 1month,3months,6months after dialysis treatmentwere gradually increased,and the difference was statistically significant(P＜0.05).But at 6 months,the Treg,TGF-β1,IL-10[(3.48±0.35)%,(3.19±0.28)%, (2.89±0.26)%,respectively]were still significantly lower than those in the control group(P＜0.05).Compared w ith before treatment,the Scr and BUN in observation group 1month,3months,6months after treatmentwere progressively decreased(P＜0.05).Conclusion The urem ic patients has immune function disorder,and hemodialysis is helpful to improve the immune function.

Hemodialysis;Urem ia;Immune function;Regulatory T cell

R692.5

A

1003—6350（2016）16—2684—03

2016-02-21)

doi∶10.3969/j.issn.1003-6350.2016.16.036

广东省2014年度科技计划项目(编号：A2014684)

张俊涛。E-mail：zhangjt@126.com