高效液相色谱法同时测定痔清舒洗剂中大黄素和大黄酚含量

谭本仁，郑锦坤，徐晓梅，柯治平

（1.汕头大学医学院附属粤北人民医院，广东韶关512026；2.广东食品药品职业学院，广东广州518172）

高效液相色谱法同时测定痔清舒洗剂中大黄素和大黄酚含量

谭本仁1，郑锦坤1，徐晓梅1，柯治平2

（1.汕头大学医学院附属粤北人民医院，广东韶关512026；2.广东食品药品职业学院，广东广州518172）

目的建立痔清舒洗剂中同时测定大黄素和大黄酚含量的方法。方法色谱柱采用Kromasil 100-5 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15），检测波长254 nm，流速1.0 mL/min，柱温30℃；进样量10 L。结果大黄素和大黄酚质量浓度分别在2.70～32.34 g/mL和6.37～76.49 g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率分别为97.40%（RSD= 0.56%，n=6）和98.59%（RSD=0.26%，n=6）。结论该法快速简单，方法可靠，专属性强，可作为痔清舒洗剂的质量控制方法。

痔清舒洗剂；大黄素；大黄酚；高效液相色谱法

痔清舒洗剂为医院基于传统中医理论研制的中药复方洗剂，由大黄、蒲公英、黄柏、没药等多味中药组方，具有清热解毒、燥湿止痒、行气活血、消肿止痛的功效，主治炎性外痔、痔嵌顿，术后肛缘水肿等症。方中大黄的主要活性成分为大黄素和大黄酚，为有效控制产品质量，本试验中采用高效液相色谱法，建立了该复方洗剂中大黄素和大黄酚的含量测定方法，可用于痔清舒洗剂的质量控制。现报道如下。

1　仪器与试药

1.1仪器

AG-135型电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；UV-2450型紫外分光光度仪（日本岛津公司）；LC-2010C型高效液相色谱仪（日本岛津公司）。

1.2试药

大黄素对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110756-200110）；大黄酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110796-201319，99.6%）；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。痔清舒洗剂（医院制剂室，批号为141230，150212，150407，粤药制Z20071536）。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Kromasil 100-5 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）；检测波长：254 nm；流速：1 mL/min；柱温：30℃；进样量：10 μL。2.2溶液制备

供试品溶液：精密吸取样品30 mL，置烧瓶中，精密加入乙醇30 mL，称定质量，置水浴中加热回流1 h，放冷，用乙醇补足减失质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，置烧瓶中蒸干，用三氯甲烷强力振摇提取4次，每次15 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）的混合溶液溶解，转移至25 mL容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

对照品溶液：精密称取大黄素和大黄酚适量，加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）溶液制成每1 mL分别含大黄素10.78 μg和大黄酚25.50 μg的溶液，即得对照品溶液。

阴性对照品溶液：按痔清舒洗剂工艺制成缺大黄的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

干扰试验：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。色谱见图1。结果表明，痔清舒洗剂中其他成分对大黄素和大黄酚的测定无干扰。

图1　高效液相色谱图

线性关系考察：精密称取大黄素对照品10.78 mg和大黄酚对照品12.80 mg，分别置100 mL容量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为大黄素母液和大黄酚母液，备用。精密量取大黄素母液3.00，2.00，1.00，0.50，0.25 mL和大黄酚母液6.0，4.0，2.0，1.0，0.5 mL，分别置20 mL容量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）溶液，稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下试验，进样10 μL，记录色谱图，测定峰面积。分别以大黄素和大黄酚对照品溶液质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归。得大黄素线性方程：Y=39 748 X+5 398.4（r=0.999 9），线性范围为2.70～32.34 μg/mL；大黄酚线性方程：Y= 51 553 X+13 753（r=0.999 9），线性范围为6.37～76.49 μg/mL。

精密度试验：分别精密吸取对照品溶液10 μL，按拟订色谱条件连续进样5次，测定含量。结果大黄素的RSD为0.13%（n=5），大黄酚的RSD为0.31%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取痔清舒洗剂（批号为141230），按2.2项下方法制备供试品溶液，室温下分别于放置0，2，4，8，12，24 h时进样，记录的峰面积。结果大黄素及大黄酚的RSD分别为0.12%和0.34%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取6瓶痔清舒洗剂，按2.2项下方法制备供试品溶液及进样测定含量。结果大黄素及大黄酚的平均含量分别为7.90 μg/mL和20.79 μg/mL，RSD分别为0.38%和0.74%（n=5），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密量取供试品溶液15 mL，共6份，分别精密加入大黄素对照品母液（质量浓度为215.6 μg/mL）0.4，0.6，0.8 mL，大黄酚对照品母液（质量浓度为255.0 μg/mL）0.8，1.2，1.6 mL，按拟订色谱条件进行测定，按外标法以峰面积计算回收率，结果见表1。

2.4含量测定

取3批样品，按2.2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进行测定。结果见表2。

表1　加样回收试验结果（n=6）

表2　含量测定结果

3　讨论

肛肠疾病是临床常见、多发病。祖国医学认为，痔是由于体内生湿积热，湿热下注肛门，阻滞气机，气滞血淤，湿热、瘀血壅阻肛门而引发，故治疗以清热祛湿、消肿止痛为主。中药熏洗坐浴治疗是传统外治法之一［1］。

痔清舒洗剂在粤北人民医院痔疮患者中使用了十几年，取得了较好疗效。其主药大黄性寒、味苦，具泻下攻积、清热泻火、凉血解毒、逐瘀通经、利湿退黄的作用，蒲公英和黄柏能清热解毒，利尿散结、清热燥湿，没药则可散瘀定痛、消肿生肌，诸药合用，共奏清热祛湿解毒、消肿止痛之功效。临床使用显示，痔清舒洗剂能有效地改善炎性痔引起的肿痛症状及术后肛门痔水肿、疼痛等症状。

现代药理学试验证明，大黄的药理活性成分为蒽醌类衍生物［2］，主要包括芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚、大黄酚及大黄酸等。参考《中华人民共和国药典（一部）》［3］和痔清舒洗剂的方解及对本品药效物质的定位和含量测定方法可行性的分析，选择大黄中的大黄素和大黄酚作为本品含量测定的指标性成分。经反复试验，流动相选用甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）时［4-6］，两种成分的色谱峰峰形、分离度最好，且方法学考察结果显示该测定方法专属性强、重复性、准确度与精密度良好，阴性对照无干扰，系统适用性良好。采用本试验所建立的HPLC含量测定方法，对3批次痔清舒洗剂进行含量测定，结果显示简便可行，重复性良好，可用于痔清舒洗剂的质量控制及质量标准完善。

［1］李伟，卢兴华，过石胜.中药熏洗坐浴改善肛肠科术后疼痛水肿的疗效观察［J］.中成药，2014，36（2）：435-437.

［2］熊兴富.中药大黄主要有效成分药理学研究进展［J］.中医临床研究，2014，6（10）：143-146.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：20.

［4］闫冰，陆晓和，魏群利，等.HPLC法测定复肾康胶囊中大黄酸的含量［J］.中国药房，2007，18（30）：2 367-2 368.

［5］张勇钢.效液相法测定复方大黄痔疮栓中大黄素大黄酚的含量［J］.时珍国医国药，2008，19（2）：465-466.

［6］叶秀金，宋粉云.HPLC法测定清肺抑火丸中大黄的四种成分的含量［J］.中药新药与临床药理，2010，21（6）：646-648.

Simultaneous Content Determination of Emodin and Chrysophanol in Zhiqingshu Lotion by HPLC

Tan Benren1，Zheng Jinkun1，Xu Xiaomei1，Ke Zhiping2
（1.The Affiliated Yuebei People′s Hospital of Shantou University Medical College，Shaoguan，Guangdong，China512026；2.Guangdong Food and Drug Vocational College，Guangzhou，Guangdong，China518172）

ObjectiveTo establish a simultaneous content determination method of emodin and chrysophanol in Zhiqingshu Lotion. M ethodsSamples were analyzed on Kromasil 100-5 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）.Methanol-0.1%phosphoric acid solution（85∶15）served as the mobile phase.The wavelength of detection was at 254 nm.The flow rate was 1.0 mL/min，the column temperature was set at 30℃and the injection volume was 10 μL.ResultsEmodin and chrysophanol showed good linearity in the range of 2.70-32.34 μg/mL and 6.37-76.49 μg/mL，and the average recovery rate of were 97.40%（RSD=0.56%，n=6）and 98.59%（RSD=0.26%，n=6）respectively.ConclusionThe method is quick，simple，accurate and reliable with good reproducibility，which can be used for the quality control of Zhiqingshu Lotion.

Zhiqingshu Lotion；emodin；chrysophanol；HPLC

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）17-0074-04

谭本仁（1973-），男，大学本科，主要从事医院药学工作，（电子信箱）1114335322@qq.com。

（2015-09-10；

2016-03-26）