高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定健儿宝颗粒中黄芪甲苷含量

谢紫薇，谭天林，王瑷萍，陈玉琼，傅昌吉，廖　芳

(四川省成都市新都区中医医院，四川成都610500)

高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定健儿宝颗粒中黄芪甲苷含量

谢紫薇，谭天林，王瑷萍，陈玉琼，傅昌吉，廖芳

(四川省成都市新都区中医医院，四川成都610500)

目的建立测定健儿宝颗粒中黄芪甲苷含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）法。方法色谱柱为Inertsil ODS-2柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-水（32∶68），柱温35℃，流速1.0 mL/min;ELSD参数，载气流速2.5 L/min，漂移管温度95℃。结果黄芪甲苷进样量在1.004 8～12.057 6 μg范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.999 8），平均回收率为101.67%，RSD为1.49%(n=6)。结论该方法操作简便、快速、准确，可作为健儿宝颗粒的含量测定方法。

高效液相色谱-蒸发光散射检测器法;健儿宝颗粒;黄芪甲苷;含量测定

健儿宝颗粒由黄芪、桂枝、白芍、白术、大枣、山药、山楂(焦)等15味中药组方，是成都市新都区中医医院在传统经验方基础上研制开发的中药制剂，具有益气合营、健脾开胃等功效，临床使用多年，疗效较好。该制剂质量标准中仅对黄芪甲苷进行定性鉴别，无含量测定项。黄芪功能甘温益气、扶正固表，用量是处方中其他药味的2～4倍，为方中君药，故控制黄芪的含量非常重要。黄芪甲苷是黄芪的主要活性成分［1-2］，具有良好的免疫调节［3］、抗炎［4-5］、抗病毒［6］、脏器保护［7-8］、神经细胞保护作用［9-10］，并具有一定的氧自由基清除作用［11］。目前，蒸发光散射检测器(ELSD)较多应用于皂苷类成分分析［12］，多采用高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法检测制剂中黄芪甲苷的含量［13-16］。为更好地控制该制剂的质量提供参考，笔者对此进行了研究，现报道如下。

1　仪器和试药

1.1仪器

Agilent-1200型高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司);Alltech ELSD 2000ES型蒸发光检测器(美国奥泰科技有限公司);TGL-16G型离心机(上海安亭科学仪器厂);SY7200-D型超声波清洗仪(上海声源超声仪器设备有限公司);BT125D型电子天平(赛多利斯科学仪器＜北京＞有限公司);AE 260-S型电子天平(瑞士梅特勒科学仪器有限公司)。

1.2试药

健儿宝颗粒(批号为140901，150501，151101)，阴性样品均为我院医院制剂;黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为200613);乙腈(色谱纯，Fisher公司，批号为111760)，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱:Inertsil ODS-2柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);柱温:35℃;流动相:乙腈-水(32∶68);流速: 1.0 mL/min;漂移管温度:95℃;载气流速:2.5 L/min。理论板数按黄芪甲苷峰计算不得低于4 000。

2.2溶液制备

称取黄芪甲苷对照品25.12 mg，精密称定，加甲醇溶解并定容至25 mL，即得对照品溶液(质量浓度为1.004 8 g/L)。取供试品(批号151101)约2 g，磨成细粉，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，回流提取40 min，放冷，用甲醇补足质量，摇匀过滤，精密量取续滤液25 mL，水浴蒸干;残渣加水10 mL微热使溶解，用饱和的正丁醇振摇提取3次，每次30 mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30 mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，用甲醇溶解并转移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按处方取除黄芪外的其他药材，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

专属性试验:分别吸取2.2项下3种溶液，按拟订色谱条件进行测定。结果表明，主峰分离度符合要求，且阴性对照品溶液色谱在黄芪甲苷出峰处无干扰。色谱图见图1。

图1　高效液相色谱图

线性关系考察:分别精密量取对照品溶液适量，加甲醇稀释成系列标准溶液(质量浓度分别为0.050 24，0.100 48，0.200 96，0.301 44，0.401 92，0.502 40，0.602 88 g/L)，按拟订色谱条件，分别进样20 μL。以黄芪甲苷进样量对数值为横坐标(X)、其峰面积对数值为纵坐标(Y)进行线性回归，得回归方程Y=1.618 9X+ 2.769 6，r=0.999 8(n=7)。结果表明，黄芪甲苷进样量在1.004 8～12.057 6 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液20 μL，连续进样6次，测定峰面积，结果见表1。结果的RSD为1.00%(n=6)，表明该仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批样品，精密称取6份，按2.2项下方法制备供试品溶液6份，按拟订色谱条件依次测定。结果见表1，平均含量为1.221 4 mg/g，RSD为1.66%(n=6)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，10，12 h时分别进样20 μL，测定峰面积。结果见表2，黄芪甲苷含量的RSD为1.02%(n=7)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

表1　精密度及重复性试验结果

表2　稳定性试验结果

加样回收试验:精密称取已知含量的供试品(批号为150501，含量为1.091 4 mg/g)细粉6份，每份2 g，分别精密加入质量浓度为1.008 g/L的黄芪甲苷对照品溶液2 mL，再分别精密加入甲醇50 mL，按2.2项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率。结果见表3。

表3　黄芪甲苷加样回收试验结果（n=6）

2.4样品含量测定

取供试品(批号为140901，150501，151101)3批，按2.2项下方法制备成供试品溶液，测定并计算黄芪甲苷的含量。结果见表4。

表4　样品含量测定结果

3　讨论

3.1指标成分选择

处方中黄芪属君药，用量大，测定黄芪甲苷的含量对于控制制剂质量有较大意义，故选用黄芪甲苷作指标成分进行含量测定。

3.2检测方法确定

黄芪甲苷为皂苷类成分，在紫外末端有吸收，干扰大，基线不稳定。ELSD为质量通用型检测器，重复性和稳定性均较好，且方法简便，易测定。

提取方式选择:对供试品的提取方式(超声和回流)和提取时间(30，40，60 min)进行考察，采用回流提取比超声提取的黄芪甲苷含量更高，从时间和成本的角度考虑，选择回流提取40 min。

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Content Determination of Astragaloside Ⅳin Jianerbao Granules by HPLC-ELSD

Xie Ziwei，Tan Tianlin，Wang Aiping，Chen Yuqiong，Fu Changji，Liao Fang
（Xindu Hospital of Traditional Chinese Medicine，Chengdu，Sichuan，China610500）

ObjectiveTo establish the content determination method of astragalosideⅣin Jianerbao Granules by HPLC-ELSD. MethodsThe Inertsil ODS-2 column（150 mm×4.6 mm，5 μm）was adopted，the mobile phase was acetonitrile-water（32∶68），the column temperature was 35℃，the flow rate was 1.0 mL/min，the gas flow rate was 2.5 L/min，the drift tube temperature was 95℃. ResultsThe injection volume of astragalosideⅣshowed good linear relationship with the peak area in the range of 1.004 8-12.057 6 μg（r=0.999 8），the average recovery rate was 101.67%，RSD=1.49%（n=6）.ConclusionThis method is simple to operate，it is rapid and accurate，and can be used as the quality control method of Jianerbao Granules.

HPLC-ELSD；Jianerbao Granules；astragalosideⅣ；content determination

R284.1;R286.0

A

1006-4931（2016）13-0077-03

谢紫薇(1981-)，女，汉族，硕士研究生，高级工程师，主要从事中药制剂质量评价工作，(电子信箱)657064681@qq.com。

2016-02-06;

2016-03-20）