半佛纳米微丸中厚朴成分的分析*

李　瑾，王倩倩，周　凯，杨宜华，杨　曼，潘梓衡

(1 徐州医科大学药学院，江苏　徐州　221004；2 江苏省新药研究与临床药学重点实验室，江苏　徐州　221004)



半佛纳米微丸中厚朴成分的分析*

李瑾1,2，王倩倩1,2，周凯1,2，杨宜华1,2，杨曼1,2，潘梓衡1,2

(1 徐州医科大学药学院，江苏徐州221004；2 江苏省新药研究与临床药学重点实验室，江苏徐州221004)

通过薄层色谱法(TLC)定性分析半佛纳米微丸中厚朴成分，高效液相色谱法(HPLC)测定佛手和半佛纳米微丸中厚朴酚与和厚朴酚成分的含量，并制定含量控制标准。在薄层色谱法供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照液无干扰。高效液相色谱法厚朴酚：y=68830x-170805(r=0.9996)，线性范围为12～240 μg/mL。和厚朴酚：y=85428x-81286(r=0.9997)，线性范围为5.6～112 μg/mL。微丸中厚朴酚与和厚朴酚含量分别为0.1384±0.01076，0.0666±0.005218。结果表明，采用的薄层色谱法与高效液相色谱法简便、灵敏可靠，可以有效用于半佛纳米微丸的质量控制。

半佛纳米纳米微丸;厚朴;薄层色谱;高效液相;含量

半佛纳米微丸原汤剂以《金匮要略》半夏厚朴汤古方加味治疗“梅核气”，半佛纳米微丸是徐州医学院药剂实验室自行研制的中药复方微丸制剂。厚朴[1]是方中君药之一，中药厚朴为木兰科木兰属乔木的根皮及树皮，具有抗病毒、抗菌及抗溃疡等作用，而厚朴酚与和厚朴酚(结构式如下)为其两种主要活性成分，这与该复方在临床上的用途是一致的。所以，我们采用薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)对微丸和厚朴中厚朴酚与和厚朴酚进行定性定量分析，制定含量控制标准。

图1　厚朴酚与和厚朴酚的化学结构式Fig.1　The chemical structural formula of magnolol and honokiol

1　仪器、药品与试剂

1.1仪器

UV-9200紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；LCQ Deca XP MAX液质联用仪(美国FINNIGAN公司，Agilent TC-C18柱，Surveyor PDA Plus检测器)；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)；KQ-100DV超声药品处理仪(山东济宁金百特电子有限责任公司)；FA2004万分之一电子天平(德国Sartorius BS 系列电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司)。

1.2药品与试剂

半佛纳米微丸，药剂实验室自制；厚朴酚对照品，购自中国药品生物制品检定所(批号：110729-200310)；和厚朴酚对照品，购自中国药品生物制品检定所(批号：110730-200609)；甲醇(色谱纯)，国药集团化学试剂有限公司；甲醇(分析纯)，国药集团化学试剂有限公司；苯(分析纯)，国药集团化学试剂有限公司；硅胶G254高效薄层板。

2　方法与结果

2.1薄层色谱鉴别[2]

2.1.1厚朴酚对照品溶液的制备

精密称取厚朴酚对照品2.50 mg，精密加入甲醇2.00 mL，配成浓度为1.25 mg/mL的厚朴酚对照品溶液。

2.1.2和厚朴酚对照品溶液的制备

精密称取和厚朴酚对照品2.20 mg，精密加入甲醇2.00 mL，配成浓度为1.10 mg/mL的和厚朴酚对照品溶液。

2.1.3厚朴供试品溶液的制备

精密称取经超微粉碎后的厚朴粉末0.5045 g，置于50 mL锥形瓶中，精密加入20 mL甲醇，充分振荡后，放置24 h，过滤，于水浴锅中加热浓缩至5 mL，作为厚朴供试液溶液。

2.1.4微丸供试品溶液的制备

取微丸研成细粉，精密称取3.0514 g，放入50 mL锥形瓶中，精密加入20 mL甲醇，充分振荡后，放置24 h，过滤，于水浴锅中加热浓缩至5 mL，作为微丸供试品溶液。

2.1.5阴性对照品溶液的制备

按组方比例，不加厚朴，按半佛纳米微丸的制备工艺制得阴性样品，照微丸供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.1.6薄层色谱鉴别

照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各5 μL，分别用毛细点样管点于同一硅胶G254高效薄层板上，以苯-甲醇(9:1)为展开剂[2]，展开，当展开剂展开距薄层板顶端约1 cm时取出，晾干，于254 nm紫外灯下检识。

2.1.7鉴别结果

如图2所示，从左至右显色斑点依次为厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品、厚朴对照药材、阴性微丸、半佛纳米微丸。供试品色谱中在与对照品及对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照液无干扰。厚朴酚Rf值为0.6034，和厚朴酚Rf值为0.4483，厚朴药材中厚朴酚与和厚朴酚的Rf值分别为0.5967、0.4310；微丸中厚朴酚与和厚朴酚的Rf值分别为0.5945、0.4483。

图2　厚朴酚与和厚朴酚薄层色谱鉴别结果Fig.2　The result of the TLC of magnolol and honokiol

2.2半佛纳米微丸及厚朴中厚朴酚与和厚朴酚的含量测定

2.2.1检测波长的选择

取90 μg/mL的厚朴酚对照品溶液和60 μg/mL的和厚朴酚对照品溶液分别进行紫外全波长扫描，结果厚朴酚在λ=290 nm 和λ=240 nm处各有一个吸收峰，和厚朴酚λ=292 nm、λ=256 nm和λ=228 nm处各有一个吸收峰。综合选择292 nm作为厚朴酚与和厚朴酚含量测定的检测波长。

2.2.2色谱条件[2-10]

色谱柱：Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；检测器：Surveyor PDA Plus Dector ；流动相：甲醇-水(75:5)；流速：1.0 mL/min；检测波长：292 nm。

柱温：室温；进样量：10 μL。

2.2.3对照品溶液的制备

精密称取厚朴酚对照品4.50 mg，和厚朴酚对照品3.00 mg，分别置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解，并稀释到刻度，摇匀，分别得浓度为0.09 mg/mL的厚朴酚对照品溶液与浓度为0.06 mg/mL的和厚朴酚对照品溶液。将这两种标准溶液等体积混合，得厚朴酚浓度为0.045 mg/mL与和厚朴酚浓度为0.030 mg/mL混合对照品溶液。

2.2.4微丸供试品溶液的制备

取微丸研成细粉，精密称取1.20 g，置于50 mL具塞锥形瓶中，精确加入甲醇50 mL，充分振摇后，浸泡3 h，然后于40 ℃，100 Hz条件下超声处理40 min，静置，过滤3次，再用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液补充甲醇至刻度，作为供试品溶液。

2.2.5厚朴药材供试品溶液的制备

取厚朴药材粉碎后，精密称取0.20 g，置于50 mL具塞锥形瓶中，精确加入甲醇50 mL，充分振摇后，浸泡3 h，然后于40 ℃，100 Hz条件下超声处理40 min，静置，过滤3次，再用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液补充甲醇至刻度，作为厚朴供试溶液。

2.2.6阴性供试品溶液的制备

按半佛纳米微丸组方比例，不加厚朴，按半佛纳米微丸的制备工艺制得阴性样品，照微丸供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.2.7方法专属性试验

图3　方法专属性HPLC图谱Fig.3　The HPLC spectrogram of specificity tests

分取上述制备的微丸供试品溶液、对照品溶液、厚朴对照药材溶液和阴性样品溶液，按色谱条件项下，各进样10 μL，结果如图3显示， A为厚朴酚与和厚朴酚混合对照液，B为厚朴对照药材，C为半佛纳米微丸，D为阴性对照品不含厚朴。供试品溶液与对照药材色谱峰中与相应的对照品溶液色谱相一致，阴性样品溶液色谱图在厚朴酚与和厚朴酚出峰位置上无干扰。

2.2.8精密度试验

精密吸取厚朴酚浓度为0.045 mg/mL与和厚朴酚浓度为0.030 mg/mL混合对照品溶液，按上述色谱条件重复进样5次，每次进样10 μL，记录厚朴酚、和厚朴酚峰面积，计算RSD分别为0.88%和0.78%，方法精密度良好。

2.2.9稳定性试验

精密吸取厚朴酚浓度为0.045 mg/mL与和厚朴酚浓度为0.030 mg/mL混合对照品溶液，分别在0、2、4、8、24 h不同时间间隔各进样10 μL，测定厚朴酚、和厚朴酚峰面积，计算RSD分别为0.96%和1.26%，结果表明对照品厚朴酚、和厚朴酚峰面积在24 h内稳定。

2.2.10加样回收率试验

精密吸取已知含量的同一批5份微丸样品溶液，分别精密加入1 mL的混合对照品溶液(厚朴酚浓度：0.045 mg/mL，和厚朴酚浓度：0.030 mg/mL)，混匀，进样10 μL，测定峰面积，计算回收率，结果见表1。

表1　微丸样品回收率测定结果(厚朴酚)Table 1　The recovery results of the pellets (magnolol)

表2　微丸样品回收率测定结果(和厚朴酚)Table 2　The recovery results of the pellets (honokiol)

2.2.11标准曲线的绘制

精密称取厚朴酚对照品6.00 mg与和厚朴酚2.8 mg，置于同一25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，得厚朴酚浓度为0.24 mg/mL与和厚朴酚浓度为0.112 mg/mL混合对照品溶液。分别精密吸取0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、5.0 mL混合对照品溶液置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到6组不同浓度的对照品溶液。按上述色谱条件，分别吸取每组对照品溶液10 μL进样，测定峰面积，以厚朴酚与和厚朴酚的峰面积(y)对其浓度(x)进行回归，得回归方程：厚朴酚：y =68830x-170805(r=0.9996)，线性范围为12～240 μg/mL。和厚朴酚：y =85428x-81286(r=0.9997)，线性范围为5.6～112 μg/mL。

2.2.12微丸中厚朴酚、和厚朴酚含量测定

取5批微丸样品，研细，分别精密称取粉末0.2 g，按2.2.4项目下微丸供试品溶液的制备方法制备供试液，10 μL进样，测定峰面积，结果见表3。

表3　微丸中厚朴酚、和厚朴酚含量测定Table 3　The content of magnolol and honokiol in pellets

3　讨　论

(1)在薄层色谱鉴别试验中，展开剂的选择上试用了苯-甲醇(27:1、10:1、9:1、8:1)四种比例的展开体系，分别进行试验，结果苯-甲醇(9:1)展开效果最好，确定为本实验的展开剂。

(2)厚朴酚与和厚朴酚为厚朴的主要成分，我国1995年、2000年、2005年、2010年和2015年版药典均已将厚朴酚与和厚朴酚的含量测定作为厚朴的质量控制指标，且药典中收载的多个含厚朴的中药制剂都把厚朴酚及和厚朴酚作为的含量测定的指标。因此半佛纳米微丸也采用厚朴酚与和厚朴酚作为本制剂控制指标进行含量测定。研究结果表明该方法精密度高、重现性好，可以有效地对半佛纳米微丸进行质量控制。

4　结　论

薄层色谱与高效液相色谱法简便、灵敏可靠，可以有效用于半佛纳米微丸的质量控制；半佛纳米微丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量不得低于0.1384±0.01076%、与0.0666±0.005218%，二者总含量不得低于0.2049±0.01594%。

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Analysis of Mangnolia Officinalis Component in the Banfu-nano Pellets*

LIJin1,2,WANGQian-qian1,2,ZHOUKai1,2,YANGYi-hua1,2,YANGMan1,2,PANZi-heng1,2

(1 Department of Pharmacy, Xuzhou Medical College, Jiangsu Xuzhou 221004; 2 Jiangsu Key Laboratory of New Drug Research and Clinical Pharmacy, Xuzhou Medical College, Jiangsu Xuzhou 221004, China)

The major components named magnolol and honokiol in Mangnolia officinalis were determined and indentified by TLC and HPLC. The TLC indicated that the

ubstance, the Mangnolia officinalis and the Banfu-nano pellets could show the same color pot as the control herbs or contrast in the same position, with a negative control without interference, the magnolol in the linear range of 12～240 μg/mL had good linearity relations(r=0.9996), the honokiol in the linear range of 5.6～112 μg/mL had good linearity relations(r=0.9997). The content of magnolol and honokiol in the Banfu-nano pellets were 0.1384±0.01076 and 0.0666±0.005218, respectively. TLC and HPLC are simple, sensitive and reliable, which can be used to control the quality of the Banfo-nano pellets.

Banfu-nano pellets; Mangnolia officinalis; thin-layer chromatography(TLC); HPLC; content

江苏省高校自然科学基金(13KJB360013)。

李瑾(1984-)，女，药剂学博士，讲师，从事药剂学方向研究。

TQ914.1

A

1001-9677(2016)018-0140-04