蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白通路在七氟醚后处理保护心肌缺血再灌注中的作用

张静，余鹏，袁林辉，陈勇，朱晓红，张列亮，周斌，周志东

蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白通路在七氟醚后处理保护心肌缺血再灌注中的作用

张静，余鹏，袁林辉，陈勇，朱晓红，张列亮，周斌，周志东

目的：探讨七氟醚后处理对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及蛋白激酶B（AKT）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路在其中的作用。

方法：取Langendorff离体灌注模型成功的大鼠心脏84个，随机分为7组（n=12）：假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、七氟醚后处理组（SPC组）、NVP-BEZ235溶剂二甲基亚砜组（DMSO组）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235组（BEZ组）、NVP-BEZ235+七氟醚后处理组（BEZ+SPC组）和单纯七氟醚给药组（SEVO组）。除Sham组和SEVO组，其余各组缺血30 min，再灌注 120 min。SPC组、DMSO组和BEZ组分别于缺血末至再灌注初15 min给予经2.4%七氟醚、DMSO（＜ 0.2%）和NVP-BEZ235（20 μmol/L）饱和的K-H液灌注，随后更换为正常K-H液再灌注105 min。BEZ+SPC组于缺血末至再灌注初15 min给予经2.4%七氟醚和NVP-BEZ235（20 µmol/L）饱和的K-H液灌注。再灌注末观察各组心肌梗死范围，心肌组织病理学变化，检测蛋白［磷酸化AKT（phospho-AKT）/总的AKT（total-AKT）、磷酸化mTOR（phospho-mTOR）/总的mTOR（total-mTOR）、自噬相关基因6（Beclin1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）/Bcl-2和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）］ 表达水平。

结果：与I/R组比较，SPC组心肌梗死范围减少［（26.28±4.00）% vs（ 49.22±3.66）%］，心肌病理损伤减轻，phospho-AKT/total-AKT和phospho-mTOR/total-mTOR表达分别上调79.85%和67.02%，Beclin1、Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3表达分别下调33.77%、69.26%和48.84%（P 均＜ 0.05）；与SPC组比较，BEZ+SPC组心肌梗死范围增加［（53.85±4.06）% vs（ 26.28±4.00）%］，心肌病理损伤加重，phospho-AKT/total-AKT和phospho-mTOR/total-mTOR表达分别下调46.06%和42.95%，Beclin1、Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3表达分别上调29.90%、206.85%和114.65%（ P 均＜ 0.05）。

结论：七氟醚后处理可通过激活AKT/mTOR通路，抑制心肌细胞自噬和凋亡，从而减轻离体大鼠心肌缺血再灌注损伤。

心肌缺血再灌注损伤；雷帕霉素靶蛋白；七氟醚

Abstract

Objective: To investigate the effect of sevoflurane （SEVO） post-conditioning on protein kinase B （AKT）/mammalian target of rapamycin （mTOR） pathway for protecting ischemia/reperfusion （I/R） injury in isolated rat’s heart.

Methods: A total of 84 isolated rat’s heart prepared by Langendorff method were randomly divided into 7 groups and n=12 in each group.①Sham group， ②I/R group， ③SEVO post- conditioning （SPC） group， ④NVP-BEZ235 solvent dimenthyl sulfoxide（DMSO） group，⑤Phosphatidyl inositol 3-kinase （PI3K）/mTOR dual inhibitor NVP-BEZ235 （BEZ） group， ⑥BEZ+SPC group and ⑦SEVO alone group. The hearts received 30 min ischemia followed by 120 min reperfusion with relevant treatment except for Sham group and SEVO group in which the hearts were without ischemia process. Myocardial infarct （MI） size and tissue pathological changes were observed， protein expressions of phosphor-AKT （P-AKT）/total-AKT， P-mTOR/total-mTOR， Beclin1， Bax/Bcl-2 andcleaved Caspase-3 were examined at the end of reperfusion respectively.

Results: Compared with I/R group， SPC group presented decreased MI size （26.28±4.00） % vs （49.22±3.66） % and reduced tissue pathological changes； up-regulated protein expressions of P-AKT/total-AKT and P-mTOR/total-mTOR by 79.85% and 67.02%， while down-regulated protein expressions of Beclin1， Bax/Bcl-2 and cleaved Caspase-3 by 33.77%， 69.26% and 48.84% respectively， all P＜0.05. Compared with SPC group， BEZ+SPC group sowed increased MI size （53.85±4.06） % vs （26.28±4.00） % and elevated tissue pathological changes； down-regulated proteins expressions of P-AKT/total-AKT and P-mTOR/total-mTOR by 46.06% and 42.95%， while up-regulated protein expressions of Beclin1， Bax/Bcl-2 and cleaved Caspase-3 by 29.90%， 206.85% and 114.65% respectively， all P＜0.05.

Conclusion: SPC may activate AKT/mTOR pathway and inhibit cardiomyocyte autophagy and apoptosis， thereby attenuate I/R injury in isolated rats’ heart.

（Chinese Circulation Journal， 2016，31: 896.）

心肌缺血后处理是一种内源性心脏保护机制，即在心肌缺血再灌注（I/R）开始后立即给予多次短暂的停灌和复灌处理，可以明显减少心肌梗死面积，改善心肌收缩功能，产生心肌保护作用［1］。同缺血后处理一样，七氟醚后处理同样对心肌I/R损伤具有保护作用［2］。七氟醚后处理可以通过减少心肌细胞自噬和凋亡，抑制心肌I/R损伤［3，4］。蛋白激酶B（AKT）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路与细胞自噬、凋亡的发生密切相关［5］。已有研究表明，AKT/mTOR信号通路参与缺血后处理的保护作用机制［6］，但是，AKT/mTOR信号通路是否通过抑制心肌细胞自噬和凋亡，参与七氟醚后处理的心肌保护作用机制仍有待进一步探讨。本研究于2015-01至2015-06拟在Langendorff离体心肌I/R模型下，给予磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235，探讨AKT/mTOR通路在七氟醚后处理保护离体大鼠心肌I/R中的作用，为心肌I/R损伤的临床治疗提供基础研究资料。

1　材料与方法

1.1动物选择及分组

雄性SD大鼠，体重220～270 g，清洁级，由南昌大学医学院实验动物中心提供。取Langendorff离体模型制备成功的心脏84个，分为7组（n=12）。假手术组（Sham组）：持续灌注3 h；I/R组：平衡30 min，缺血30 min，再灌注2 h；七氟醚后处理组（SPC组）：于缺血末到再灌注开始后15 min给予经2.4%七氟醚［37 ℃时为1.0最低肺泡有效浓度（MAC）］饱和的K-H液灌注［用95% O2-5% CO2混合气体通过装有七氟醚（批号：H20130614，Maruishi Pharmaceutical公司，日本）的专用挥发灌，将七氟醚以不间断鼓泡的形式通入已经配好的K-H液，期间检测K-H液的七氟醚浓度，以保证进入主动脉的K-H液的七氟醚浓度维持在1.0 MAC］［7］；NVP-BEZ235溶剂二甲基亚砜组（DMSO组）：于缺血末至再灌注初15 min给予经DMSO（＜ 0.2%，批号：sc-364200，Santa Cruz公司，美国）饱和的K-H液；PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235组（BEZ组）：于缺血末至再灌注初15 min给予经20 µmol/L NVP-BEZ235饱和的K-H液；NVP-BEZ235 +七氟醚后处理组（BEZ+SPC组）：于缺血末至再灌注初15 min给予经1.0 MAC七氟醚和20 µmol/L NVP-BEZ235饱和的K-H液；单纯七氟醚给药组（SEVO组）：持续灌注180 min，并于灌注60 min至75 min期间给予经1.0 MAC七氟醚饱和的K-H液灌注15 min。

1.2Langendorff离体心肌缺血再灌注模型

K-H液的配制［8］（mmol/L）：NaCl 118.0、KCl 4.8、KH2PO41.2、NaHCO325.0、MgSO41.2、CaCl22.5和葡萄糖11.0。调pH值至7.35～7.45，加热至37.0 ℃，并预先通入95% O2-5% CO2的混合气体30 min使气体充分与K-H液混合，循环温度为37 ℃。大鼠腹腔内注射戊巴比妥钠50 mg/kg麻醉及500 U/kg肝素化后，制备离体心肌I/R模型。开胸取心脏，迅速将心脏置于4 ℃ K-H液中冷却至停跳，主动脉插管以K-H液行恒速灌流。将心脏用5-0的丝线固定，灌注通路的开关控制冠脉缺血和再灌注，调节左心室舒张末压（LVEDP）基础值维持在6～10 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）。于左心耳处剪一小口，将带有套囊的压力换能器插至左心室，连接U/4C501H Med Lab生物信号采集处理系统，采用Med Lab 6.0软件连续监测缺血前即刻（T0）与缺血再灌注30 min T1）、60 min（T2）、90 min（T3）、120 min（T4）各时间点的血流动力学指标，包括：心率（HR）、左心室峰压（LVSP）和LVEDP。

1.3心肌梗死范围

再灌注末，随机选择Langendorff模型制备成功的心脏。用心脏切割器横断分割成5块2 mm厚的组织，置于1% 2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，批号：sc-206516，Santa Cruz公司，美国）染色，染色过程中不断震荡使之染色均匀。于避光恒温下孵育20 min，PBS缓冲液冲洗后10%福尔马林固定24 h。梗死区被染为灰白色，非梗死区染为砖红色。用Alpha View凝胶图像软件分析心肌梗死范围梗死心肌面积/总心肌面积×100%）。

1.4心肌组织病理

再灌注末，迅速取下心脏，剪除左右心耳及残余大血管，放入10%多聚甲醛固定，制作石蜡切片，切片厚度5～6 µm，常规苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察心肌组织病理学变化，放大倍数为200倍。

1.5蛋白的提取

再灌注末迅速取下Langendorff模型制备成功的心脏，将左心室心肌组织剪碎，加入冰冷的蔗糖缓冲液匀浆，800 g离心10 min后取上清液10 000 g离心15 min，得到心肌细胞胞浆。在心肌组织样品中加入裂解液提取胞浆蛋白。用BCA蛋白浓度测定试剂盒（批号：P0012S，碧云天试剂公司）测定蛋白含量，并用裂解液将其调至相同浓度值，整个操作过程均于4 ℃下进行。

1.6蛋白免疫印迹（Western blot）法测定蛋白表达

从每个细胞质蛋白样品取30 μg，预热。电泳蛋白提取物，在氨基丁三醇-甘氨酸10%聚丙烯酰胺分离胶（BIO-RAD公司，美国）分离蛋白，电泳结束后转至硝酸纤维素膜（Millipore公司，美国），5%脱脂牛奶封闭2 h，分别加入一抗phospho-AKT（1:1000，批号：sc-33437，Santa Cruz公司，美国）、一抗total-AKT（1:1000，批号：sc-8312，Santa Cruz公司，美国）、一抗phosphomTOR（1:1000，批号：sc-101738，Santa Cruz公司，美国）、一抗total-mTOR（1:1000，批号：sc-8319，Santa Cruz公司，美国）、一抗自噬相关基因6 （Beclin1，1:1000，批号：3495，Cell Signaling公司，美国）、一抗B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax， 1:1000，批号：sc-6236，Santa Cruz公司，美国）、一抗Bcl-2（1:1000，批号：sc-492，Santa Cruz公司，美国）、一抗活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cleaved Caspase-3，1:1000， 批 号：sc-22171-R，Santa Cruz公司，美国）和内参抗-甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH，1:2000，批号：sc-25778，Santa Cruz公司，美国），4℃一抗孵育过夜。洗涤缓冲液漂洗3遍，加入二抗后摇床孵育2 h。使用增强化学发光试剂盒（批号：34077，Thermo公司，美国） 显色，行增强化学发光反应，将聚偏氟乙烯膜置于发光液（免疫印迹化学发光试剂AB液，批号：0609025，Merck公司，德国）中，于暗室中曝光后自动洗片机显影，定影。采用Image J软件测定条带灰度值，以目的条带灰度值与GAPDH灰度值的比值反映 phospho-AKT/total-AKT、phospho-mTOR/totalmTOR、Beclin1、Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3表达。

1.7统计学方法

2　结果

2.1血流动力学指标（表1）

7组T0时各指标差异无统计学意义（P＞0.05）；与T0比较，除Sham组和SEVO组外，其它各组T1～T4时LVSP、HR降低，LVEDP升高（P均＜ 0.05）；在T1～T4四个时间点，与Sham组和SEVO组比较，其它各组LVSP、HR降低，LVEDP升高（P均＜ 0.05）；与I/R组 比 较，SPC组、SEVO组LVSP、HR升高，LVEDP降低（P＜0.05）；与SPC组比较，DMSO组、BEZ组、BEZ+SPC组、SEVO组LVSP、HR、LVEDP差异均有统计学意义（P＜ 0.05）。

2.2心肌梗死范围

与I/R组（49.22±3.66）%比较，SPC组（26.28±4.00）%心肌梗死范围减少（P＜0.05）；与SPC组比较，BEZ+SPC组（53.85±4.06）%心肌梗死范围增大（P＜0.05）；Sham组（10.87±3.51）%和SEVO组（9.51±3.61）%组间差异无统计学意义（P＞0.05）；I/R组、DMSO组（55.38±4.69）%、BEZ组（52.30±3.60）%、BEZ+SPC组，组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1　各组大鼠心肌缺血再灌注期间的血流动力学指标

表1　各组大鼠心肌缺血再灌注期间的血流动力学指标

注：Sham组：假手术组；I/R组：单纯缺血再灌注组；SPC组：七氟醚后处理组；DMSO组：二甲基亚砜组；BEZ组：NVP-BEZ235组；BEZ+SPC组：BEZ235+七氟醚后处理组；SEVO组：单纯七氟醚给药组；T0：缺血前即刻；T1：缺血再灌注30 min；T2：缺血再灌注60 min；T3：缺血再灌注90 min；T4：缺血再灌注120 min。与T0比较aP＜0.05；与Sham组比较bP＜0.05；与I/R组比较cP＜ 0.05；与SPC组比较dP＜0.05；与SEVO组比较eP＜0.05。1 mmHg=0.133 kPa

项目　T0　T1　T2　T3　T4心率（bpm）Sham组　297±20　271±44　316±23　282±24　308±35 I/R组　302±26　213±36abe　226±15abe　184±25abe　158±35abeSPC组　313±10　247±10abce　251±20abce　227±35abce　216±47abceDMSO组　327±30　223±21abde　211±24abde　162±11abde　137±30abdeBEZ组　302±14　218±13abde　208±21abde　184±38abde　130±29abdeBEZ+SPC组　263±51　212±23abde　206±18abde　166±25abde　151±20abdeSEVO组　308±40　301±21cd　308±52cd　303±18cd　305±19cd左心室峰压（mmHg）Sham组　116±8　111±6　110±5　108±6　108±7 I/R组　108±12　93±10abe　65±16abe　54±7abe　44±9abeSPC组　113±1　103±5abce　89±16abce　74±20abce　55±6abceDMSO组　116±8　88±3abde　58±7abde　53±6abde　43±7abcdeBEZ组　110±5　85±25abde　56±10abde　50±15abde　35±14abdeBEZ+SPC组　112±11　77±12abde　60±6abde　49±2abde　36±8abdeSEVO组　104±21　105±14cd　101±11cd　106±7cd　109±10cd左心室舒张末压（mmHg）Sham组　6.7±0.4　7.1±0.9　8.2±1.6　7.7±0.6　8.0±0.7 I/R组　8.0±1.2　24.3±5.0abe　39.7±10abe　49.8±6.0abe　68.7±6.6abeSPC组　7.2±0.6　15.3±7.0abce　28.1±5.4abce41.6±3.7abce　48.9 ±7.0abceDMSO组　7.3±0.5　26.6±8.4abde　44.7±6.9abde48.2±4.5abde　61.3±6.7abdeBEZ组　6.9±0.9　27.2±7.3abde　38.8±6.4abde58.3±8.9abde　60.5±9.0abdeBEZ+SPC组　6.8±0.8　31.6±7.2abde　49.7±7.2abde52.9±5.2abde　69.2±6.4abdeSEVO组　7.1±3.5　6.0±2.0cd　7.4±1.1cd　7.8±1.4cd　8.5±1.4cd

2.3心肌组织病理学改变（图1）

在光镜下观察各组心肌组织病理学变化，Sham组和SEVO组左心室心肌组织为正常的组织学形态，心肌细胞结构完整、排列整齐清晰。I/R组、DMSO组、BEZ组和BEZ+SPC组心肌细胞结构模糊，边界不清，排列紊乱，胞内明显水肿，胞质中存在一定空泡，胞核大并畸形，炎性细胞浸润较Sham组明显增多。SPC组心肌细胞轮廓完整，排列略松散，胞质轻度水肿，少量胞核聚集，炎性细胞浸润较I/R组明显减少（放大倍数为200倍）。

2.4phospho-AKT/total-AKT和phospho-mTOR/total-mTOR蛋白的表达

与Sham组比较，I/R组phospho-AKT/total-AKT和 phospho-mTOR/ total-mTOR蛋 白 表 达 轻 度 上 调（P＜ 0.05）；与I/R组比较，SPC组phospho-AKT/total-AKT和 phosphomTOR/total-mTOR蛋白表达进一步上调（P＜ 0.05）；与SPC组比较，BEZ +SPC组 phospho-AKT/total-AKT和 phospho-mTOR/total-mTOR蛋白表达下调（P＜ 0.05）。详见图2。

图1　 再灌注末各组大鼠心肌组织病理改变

图2　 蛋白免疫印迹分析各组大鼠心肌AKT和mTOR蛋白的磷酸水平

2.5 Beclin1、Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3蛋白的表达

与Sham组比较，I/R组Beclin1、Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3表达上调（P＜0.05）；与I/R组比较，SPC组Beclin1、Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3表达下调（P＜0.05）；与SPC组比较，BEZ+SPC组Beclin1、Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3表达上调（P＜0.05）。详见图3。

图3　 Western blot分析各组大鼠心肌Beclin1，Bax/Bcl2和cleaved Caspase-3蛋白表达水平

3　讨论

本实验参照文献［9］中的方法建立Langendorff离体灌注模型。结果提示离体I/R模型制备成功。并参照预实验结果，实施七氟醚后处理和给予NVP-BEZ235，于缺血末至再灌注初15 min分别给予1.0 MAC七氟醚或20 µmol/L NVP-BEZ235。

在本实验中，于再灌注末观察Langendorff模型制备成功的各组离体大鼠血流动力学指标和心肌梗死范围，发现SPC组较I/R组血流动力学指标明显改善，心肌梗死范围降低，但给予PI3K/mTOR通路的双重抑制剂NVP-BEZ235后，BEZ+SPC组较SPC组血流动力学指标明显恶化，并且心肌梗死范围也升高。已有研究表明，心肌收缩功能与心肌组织病理学变化密切相关［10］，本研究利用HE染色观察心肌组织病理学变化，同样证明七氟醚后处理能够减少离体大鼠I/R损伤的心肌组织病理学损伤，减轻心肌胞质水肿，降低炎性细胞浸润数量。但给予NVP-BEZ235后，心肌组织病理学损伤明显加重，炎性细胞浸润增加。说明七氟醚后处理能够改善离体大鼠I/R损伤的心肌收缩和舒张功能，减少心肌梗死，抑制心肌组织病理学损伤，发挥其心肌保护作用。但是这种保护作用能够被NVPBEZ235所取消。

NVP-BEZ235，是一种咪唑喹啉衍生物，可通过与ATP结合位点结合，抑制AKT和mTOR的催化活性，是广泛使用的PI3K/mTOR通路双重抑制剂。研究证明七氟醚后处理通过PI3K通路发挥其对大鼠心肌I/R损伤的保护作用［11］。PI3K根据其结构及磷酸化底物的特异性可分为I、II和III三种，其中，I型PI3K能催化磷脂酰肌醇二磷酸磷酸化而生成磷脂酰肌醇三磷酸（PIP3），PIP3与AKT的氨基端结合激活AKT，活化的AKT进一步激活其下游因子mTOR，参与调节心肌细胞自噬和凋亡。本实验结果证明七氟醚后处理能够明显上调phospho-AKT/total-AKT和phospho-mTOR/total-mTOR的 蛋白表达，NVP-BEZ235抑制PI3K/mTOR通路，下调 phospho-AKT/total-AKT和 phospho-mTOR/totalmTOR的蛋白表达，取消七氟醚后处理的心肌保护作用。这说明七氟醚后处理通过激活mTOR通路发挥其心肌保护作用。

研究表明，mTOR通路的激活能够抑制细胞自噬和凋亡发生，参与心肌I/R损伤的保护作用［12，13］。细胞自噬是一种高度进化的降解细胞内大分子物质和细胞器的生理现象，当细胞处于应激状态下，如缺血再灌注等情况下自噬的水平明显上调，细胞启动自噬机制来清除受损细胞器，减少心肌细胞损伤［14］。Beclin1是参与自噬体形成的重要限速基因，参与自噬的调控并促进自噬体形成，其表达强度与自噬活性密切相关［15］。细胞凋亡，是在正常生理或病理状态下发生的，由一系列酶参与、多种基因调控的活体内单个细胞主动程序性死亡过程，心肌I/R损伤中细胞死亡的主要方式［16，17］。Bcl-2基因是最早发现的抗凋亡基因，可增加细胞对多种凋亡刺激因素的抵抗力，显著延长细胞的寿命，抑制其凋亡发生。Bax可以拮抗Bcl-2基因的抗凋亡作用，本身还具有直接促进凋亡的能力。两基因通过构成二聚体的形式来调控细胞凋亡进程，Bax/Bcl-2蛋白比值高时，同源二聚体形成较多，可以明显的促进细胞凋亡；Bax/Bcl-2蛋白比值低时，异源二聚体形成较多，可以明显的抑制细胞凋亡。七氟醚后处理减轻心肌I/ R损伤时，降低Bax/Bcl-2比值能够减少细胞凋亡的发生。凋亡是一个由Caspase家族成员介导的蛋白酶级联反应过程，cleaved Caspase-3是细胞凋亡过程中的关键执行蛋白酶，导致细胞内重要蛋白质降解失活及DNA断裂。本实验采用Western Blot法测定再灌注末各组Beclin1、Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3的蛋白表达。研究结果证明七氟醚后处理能够抑制自噬和凋亡相关蛋白的表达，但给予PI3K/ mTOR通路双重抑制剂后心肌自噬和凋亡相关蛋白表达上调，这说明七氟醚后处理通过激活mTOR通路下调自噬和凋亡相关蛋白，抑制心肌细胞自噬和凋亡。

综上所述，七氟醚后处理可能通过激活mTOR通路，减少心肌梗死范围，改善心肌组织病理学损伤，抑制自噬和凋亡相关蛋白的上调，进而发挥其对离体大鼠心肌I/R损伤的保护作用。

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Effect of Sevoflurane Post-conditioning on AKT/mTOR Pathway for Protecting Cardiac Ischemia/reperfusion Injury in Isolated Rat’s Heart

ZHANG Jing， YU Peng， YUAN Lin-hui， CHEN Yong， ZHU Xiao-hong， ZHANG Lie-liang， ZHOU Bin， ZHOU Zhi-dong.
Department of Anesthesiology， Second Affiliated Hospital of Nanchang University， Nanchang （330000）， Jiangxi， China
Corresponding Author: ZHOU Zhi-dong， Email: dongdongzhi@163.com

Myocardial ischemia reperfusion injury； Target protein of rapamycin； Sevoflurane

2015-10-25）

（编辑：常文静）

330000 江西省南昌市，南昌大学第二附属医院 麻醉科（张静、袁林辉、陈勇、朱晓红、张列亮、周斌、周志东），心内科（余鹏）

张静 住院医师 硕士 研究方向：心肌缺血再灌注损伤 Email：zhangjing_jxndefy@163.com 通讯作者：周志东 Email：dongdongzhi@163.com

R54

A

1000-3614（2016）09-0896-06 doi：10.3969/j.issn.1000-3614.2016.09.017