重组人促红细胞生成素治疗前后慢性病贫血患者血清肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体水平测定及意义

韩曦瑶　刘立根　李　纲　孙丽华　詹其林

(复旦大学附属上海市第五人民医院血液科，上海　200240)



重组人促红细胞生成素治疗前后慢性病贫血患者血清肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体水平测定及意义

韩曦瑶刘立根1李纲1孙丽华2詹其林3

(复旦大学附属上海市第五人民医院血液科，上海200240)

目的测定重组人促红细胞生成素(EPO)治疗前后慢性病贫血(ACD)患者血清肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(sTRAIL)水平，明确其与患者hepcidin水平是否相关，探讨血清sTRAIL与ACD发病机制的相关性。方法37例ACD患者按照病因分为慢性炎症组19例及肿瘤组18例，测定其血清sTRAIL水平、hepcidin水平，后予EPO治疗〔(3～6)万U/w〕，血红蛋白升至120 g/L停止治疗，治疗有效后再次测定患者血清sTRAIL水平、hepcidin水平，与治疗前相比较，并行血清sTRAIL与hepcidin的相关性分析。 结果慢性炎症组及肿瘤组治疗前后血清sTRAIL差异显著。ACD患者治疗前后hepcidin比较差异显著。两组治疗前及治疗后血清sTRAIL与hepcidin相关性分析为正相关；两组治疗前血清sTRAIL、hepcidin差异无显著性。 结论血清sTRAIL可能与ACD发病机制相关。

慢性病贫血；重组人促红细胞生成素；血清肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体水平(sTRAIL)；hepcidin

慢性病贫血(ACD)发病机制主要是在升高的前炎症因子白细胞介素(IL)-6的作用下,肝脏hepcidin升高,阻断巨噬细胞铁的释放及小肠上皮细胞对铁的吸收,使循环铁减少,限制了铁运输进入红细胞,导致贫血。红细胞生成素(EPO)通过抑制hepcidin和前炎症因子而改善贫血。肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是TNF 超家族成员之一。TRAIL与多种自身免疫性疾病、肿瘤的发病机制相关。文献报道〔1〕，骨髓增生异常综合征患者骨髓TRAIL表达增加或释放增多，影响红系祖细胞的形成，且与贫血的程度相关。血清sTRAIL与慢性病贫血是否相关，尚未见报道。本文通过测定EPO治疗前后ACD患者血清sTRAIL与hepcidin水平变化，比较二者有无关联，以明确血清sTRAIL与ACD发病机制是否相关。

1　资料与方法

1.1一般资料上海市第五人民医院、上海市肿瘤医院闵行分院、上海静安区中心医院、上海松江区中心医院、上海青浦区中心医院、上海金山区中心医院2013年1月至2014年12月住院及门诊病人37例，符合ACD诊断标准〔2〕：①为正细胞正血红蛋白性贫血，部分患者可表现为低血红蛋白或小细胞性贫血。网织红细胞计数常减少。②血清铁及总铁结合力均低于正常、转铁蛋白饱和度正常或稍低于正常、血清铁蛋白增高，转铁蛋白受体减少。同时患者血红蛋白低于100 g/L，排除其他血液系统疾病所致贫血，未输血治疗。按照病因分为慢性炎症组19例，男4例，女15例；平均年龄(67.66±13.68)岁及肿瘤组18例，男9例，女9例；平均年龄(63.89±12.19)岁；慢性炎症组包括类风湿关节炎6例、系统性红斑狼疮5例、慢性阻塞性肺病(COPD)6例、干燥综合征1例，炎症性肠病1例，肿瘤组包括肺癌5例、肠癌2例、宫颈癌、胃癌、前列腺癌各1例。乳腺癌4例、淋巴瘤5例，江川社区医院及上海市第五人民医院健康体检者40例为正常对照组，男18例，女22例，平均年龄(61.22±14.36)岁。

1.2标本采集采集EPO(商品名：益比奥，10 000 U/支，厂家：沈阳三生。)治疗前凌晨空腹静脉血，分离血清，进行EPO水平测定。采集治疗后2～4 w凌晨空腹静脉血；分离血清，-20℃保存，进行sTRAIL测定。

1.3血清sTRAIL及hepcidin采用ELISA法测定sTRAIL试剂盒购自AN Affymetrix company。EPO水平测定采用化学发光法，试剂购自西门子公司，测试仪器为DPC2000。

1.4治疗两组均使用益比奥治疗，剂量10 000～20 000 U，3次/w，皮下注射或40 000 U 1次/w皮下注射；血红蛋白升至120 g/L时停用。其他伴随和支持治疗：①EPO治疗期间若合并缺铁性贫血，加用静脉注射蔗糖铁。静脉铁剂，200 mg，1次/d；②其他对症支持治疗和不良反应的对症治疗等。

1.5统计学方法应用SPSS21.0统计软件进行t检验、χ2检验和相关回归分析。

2　结　果

2.1患者基线特征慢性炎症组治疗前血红蛋白水平(81.26±11.67)g/L；治疗前EPO水平(48.26±17.89)mIU/ml。肿瘤组治疗前血红蛋白水平(84.38±13.08)g/L；治疗前EPO水平(243.35±51.78)mIU/ml。两组治疗前血红蛋白水平、EPO水平差异无显著性。

2.2患者铁代谢指标两组血清铁、铁蛋白转铁蛋白、转铁蛋白受体、总铁结合力、未饱合铁结合力、铁饱和度无显著性差异。见表1。

2.3血清sTRAIL水平两组治疗前后血清sTRAIL差异显著(P<0.05)。见表2。

2.4血清hepcidin水平慢性炎症组治疗前后hepcidin差异无显著性，肿瘤组治疗前后hepcidin差异有显著性。见表2。

2.5血清sTRAIL与hepcidin的相关性分析慢性病贫血患者(不分组)治疗前sTRAIL和hepcidin相关(r=-0.473，P=0.041)；治疗后sTRAIL和hepcidin相关(r=0.487,P=0.034)。

表1　两组铁代谢指标比较±s)

表2　各组治疗前后sTRAIL、hepcidin水平比较

与治疗前比较：1)P<0.05

3　讨　论

ACD 患者肝脏hepcidin mRNA 表达受细菌内毒素、细胞因子、低铁血症及各种炎性因子影响，从而使得hepcidin分泌量增加，hepcidin 通过抑制肠道铁吸收及抑制单核巨噬细胞铁释放，导致 ACD 患者出现血清铁降低、转铁蛋白饱和度降低和正细胞正色素性贫血，随着病程延长，体内铁不断耗竭产生严重缺铁症状，并最终发展为典型的ACD〔3〕。EPO通过与红系造血祖细胞表面的特异性受体结合,促进红系祖细胞存活、增殖、分化和成熟,维持和增加循环中的红细胞数量；可下调肝脏hepcidin 水平,改善铁代谢。目前已有充分的证据表明，给予ACD 患者补充EPO 可使部分患者贫血症状得到改善〔4〕。

从人心肌cDNA文库中克隆出来并命名。TRAIL 具有Ⅱ型跨膜蛋白结构特点，其细胞外部分可降解后形成sTRAIL,无跨膜区和胞质区,具有生物学活性。TNF及其受体家族在机体的各种炎症或凋亡损伤中扮演重要角色。文献报道〔5～8〕，血清sTRAIL与老年COPD 患者、系统性红斑狼疮患者、银屑病关节炎、强直性脊柱炎患者发病相关，部分与疾病活动相关。考虑sTRAIL 水平增高可能在自身免疫性疾病发病及在炎症反应中发挥一定作用。肿瘤相关性炎症会加大释放炎性细胞因子〔如TNF、IL-1、干扰素(IFN)-γ〕，上述因子不仅能够抑制EPO的生成，而且能够抑制储存铁的释放和红系祖细胞的增殖和分化。血清sTRAIL可能与肿瘤相关炎症反应有一定的相关性。

本研究提示血清sTRAIL可能与造血负调控相关，而EPO治疗有效后这种负调控被纠正。检测体内hepcidin 水平可以用来鉴别ACD 和其他类型贫血，hepcidin与ACD的发生密切相关，提示血清sTRAIL可能与ACD发病机制相关。

1Campioni D,Secchiero P,Corallini F,etal.Evidence for a role of TNF-related apoptosis-inducing ligand(TRAIL)in the Anemia of Myelodysplastic Syndromes〔J〕.Am J Pathol,2005;166(2):557-63.

2Das Gupta A，Abbi A.High serum transferrin receptor level in anemia of chronic disorders indicates coexistent iron deficiency〔J〕.Am J Hematol，2003;72(3):158-61.

3Means RT Jr.Hepcidin and iron regulation in health and disease 〔J〕.Am J Med Sci，2013;345(1):57-60.

4陈金松，徐金格，张秋荣，等.血液病患者血清促红细胞生成素含量测定对贫血治疗临床意义〔J〕.临床研究，2011;8(30):42-4.

5Lub-de Hooqe MN,de Vries EG,de Jong S,etal.Soluble TRAIL concentrations are raised in patients with systemic lupus erythematosus〔J〕.Ann Rheum Dis,2005;64(6):854-8.

6Hofbauer L,Schoppet M,Christ M,etal.Tumor necrosis factor-related apotosis-inducing ligand and osteoprotegerin serum levels in psoriaticarthritis〔J〕.Rheumatology(Oxford),2006;45(10):1218-22.

7苏虹,常微微,徐胜前，等.强直性脊柱炎患者Toll样受体4表达和sTRAIL、TNF-α、IL-12 水平的研究〔J〕.临床输血与检验,2010;12(4)：302-5.

8杨中华，左永太.老年慢性阻塞性肺疾病血清肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的检测及意义〔J〕.中国实用内科杂志,2008;28(2)：45-6.

〔2015-01-19修回〕

(编辑苑云杰)

上海闵行区卫生和计划生育委员会科研课题(No.2013MW14)；上海市第五人民医院院级课题(No.2013WYYJ01)

刘立根(1965-)，男，教授，主要从事血液肿瘤发病机制与临床转化研究。

韩曦瑶(1977-)，女，硕士，主治医师，主要从事红细胞疾病与血液系统肿瘤研究。

R56

A

1005-9202(2016)15-3795-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.088

1复旦大学附属肿瘤医院闵行分院2上海市青浦中心医院

3上海市金区中心医院