化瘀通脉方对动脉粥样硬化模型兔一氧化氮、内皮素-1表达的影响

杨晓妮　李长生　陈　超　程广清　邵　聪

(千佛山医院中医科，山东　济南　250014)



化瘀通脉方对动脉粥样硬化模型兔一氧化氮、内皮素-1表达的影响

杨晓妮李长生陈超程广清邵聪1

(千佛山医院中医科，山东济南250014)

目的观察化瘀通脉方对动脉粥样硬化(AS)模型兔一氧化氮(NO)、内皮素(EP)-1表达的影响。方法取雄性健康新西兰大耳白兔40只，随机分为空白组、模型组、对照组、治疗组，每组10只。采用免疫损伤加高脂饲料喂养方法建立新西兰大耳兔AS模型。测定血清NO、血浆ET-1水平。结果实验8 w末，AS兔血清ET-1显著升高，而NO显著降低(P<0.05，P<0.01)。实验16 w末，治疗组血清ET-1水平较模型组显著降低，NO较模型组显著升高(P<0.05，P<0.01)。结论化瘀通脉方具有较好的抗AS作用，这可能与其能有效地调节NO/ET-1平衡有关。

动脉粥样硬化；化瘀通脉方；一氧化氮；内皮素-1

研究表明〔1〕，内皮功能失调是动脉粥样硬化(AS)的首发步骤。一氧化氮(NO)为内皮衍生的舒血管因子，具有松弛血管平滑肌、抑制血小板聚集的作用。内皮素(ET)是迄今所知作用最强烈的缩血管物质。NO与ET之间平衡的破坏，是动脉内皮受损的显著特征，并参与AS进程。化瘀通脉方具有化瘀通脉，祛痰健脾功效，临床治疗AS疗效显著〔2〕。本研究探讨化瘀通脉方对AS兔NO、ET-1表达的影响。

1　材料与方法

1.1动物及分组健康纯种新西兰大耳白兔40只，普通级，雄性，4～6月龄，体重2.0～2.5 kg，山东省农科院实验动物中心提供，动物合格证号：20040013。实验前喂饲普通饲料，观察健康兔1 w。随机分成空白组、模型组、对照组、治疗组，每组10只，模型组实验中死亡1只。

1.2实验药物、试剂与仪器步长脑心通胶囊：陕西咸阳步长制药有限公司提供，产品批号：Z20025001；化瘀通脉方药物组成：丹参、党参、天麻、薏苡仁、川芎、生山楂、郁金等，以上药物均由江阴天江药业有限公司提供的中药配方免煎颗粒剂，批号：0611158。Beckman低温高速离心机(DL-S型)；752紫外光栅分光光度计；放射免疫γ计数仪(SN 2682B 型)；牛血清白蛋白(德国Sigma公司进口分装，批号：060511)；ET放免试剂盒(北京北方生物技术研究所，批号：20070110)；NO试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20070102)。

1.3造模方法采用高脂饲料法加免疫损伤法高脂饲料喂养方法：适应性喂养1 w后，造模家兔每日给予100 g配好的高脂饲料喂养，相当于每只每日给予蛋黄粉15 g，胆固醇0.5 g，猪油5 g。空白组继续给予普通饮食，自由饮水，连续喂养8 w。实验中每日观察动物进食和行为变化，定期称体重。免疫损伤法〔3〕：造模动物分别在给予高脂饲料的第1天和第20天，按0.2 g/kg体重注射牛血清白蛋白各一次。牛血清白蛋白以消毒生理盐水配成浓度为10%溶液，过滤后经耳缘静脉注射。

1.4给药方法高脂饲料喂养8 w，B超测定腹主动脉斑块形成后开始给药，连续给药8 w至第16周末。药物剂量根据人兔体表面积折算等效比率计量表〔4〕，按60 kg成人剂量的3.36倍换算。各组用药如下：空白组：不造模，饲喂正常颗粒饮食，10 ml生理盐水/次，2次/d。模型组：造模成功后停高脂饮食，饲喂正常颗粒饲料，10 ml生理盐水/次，2次/d。对照组：给予步长脑心通0.2 g·kg-1·d-1，溶于生理盐水中，配成20 ml混浊液，10 ml/次，2次/d。治疗组：给予化瘀克斑免煎剂，生药量8.2 g·kg-1·d-1，溶于生理盐水中，制成20 ml混悬液，10 ml/次，2次/d。动物连续给药8 w，服药期间停服高脂饮食，改为普通饲料，并每7天测一次体重，调节用药剂量。

1.5检测指标及方法

1.5.1血清NO分别于给药前、给药后8 w末，耳缘静脉取血2 ml，置于玻璃试管中，混匀，37℃温育30 min，3 000 r/min，离心15 min，吸取上层血清，放入-80℃冰箱保存，采用硝酸还原酶法测定NO。

1.5.2血浆ET-1分别于给药前、给药后8 w末，兔耳缘静脉取血2 ml，注入含10% EDTA-Na2溶液30 μl的带塞试管中，混匀。室温放置约1 h后离心，3 000 r/min，10 min，分离血浆，放入-80℃冰箱保存。按试剂盒说明书在γ计数测定仪上测定血浆中ET-1含量。

1.6统计学方法采用SPSS11.5进行单因素方差分析。

2　结　果

2.1血清NO水平变化实验8 w末，造模各组动物血清NO水平明显低于空白组(P<0.01)，而造模各组之间无明显差异(P>0.05)；实验16 w末，对照组与治疗组NO水平较8 w末明显提高，均明显高于模型组(P<0.05，P<0.01)，且治疗组NO水平高于对照组(P<0.05)。见表1。

2.2血浆ET-1水平变化见表2。实验8 w末，造模各组动物血浆ET-1水平明显高于空白组(P<0.01)，而造模各组之间无明显差异(P>0.05)；实验16 w末，对照组与治疗组ET-1水平较8 w末明显降低，均明显低于模型组(P<0.01)，且治疗组ET-1水平低于对照组(P<0.05)。

表1　血清NO水平变化

与空白组比较:1)P<0.01；与本组8 w末时比较：2)P<0.05；与模型组比较：3)P<0.05，4)P<0.01；与对照组比较：5)P<0.05，下表同

表2　实验中血浆ET-1测定结果

3　讨　论

内皮损伤学说、脂质浸润学说、血栓形成学说和损伤反应学说(又称炎症学说)等与AS形成密切相关〔5〕。在内皮细胞损伤或高脂、吸烟等因素的刺激下，内皮功能失调，其抑制AS作用减弱或消失，内皮衍生舒张因子(EDRF)-NO通路的活性减弱，缩血管物质释放量增多；黏附分子表达促进单核细胞聚集于血管内膜下；生长因子增多引起血管平滑肌的增生和迁移；血小板聚集、组织因子的表达、纤溶酶原激活物抑制因子-1减少而易形成血栓，这些均促进AS的形成。研究表明〔6〕，AS 发生时循环血中NO 的基础释放和活性减低，而ET浓度则明显增高，这种失衡可引起粥样硬化动脉非对抗性收缩，导致冠脉痉挛和心肌梗死的发生。因此维持NO/ET的平衡，能够保护动脉内皮、抗AS的形成。

中医典籍中并无AS的病名。根据该病的主要临床表现及病理变化本病归属于“瘀证”、“痰证”的范畴，脾虚失运、痰瘀互结是AS的关键病机，化瘀通脉，祛痰健脾为主要治疗原则。化瘀通脉方其药物组成丹参、党参、天麻、薏苡仁、川芎、生山楂、郁金等。方中丹参味苦，性微寒，功擅活血祛瘀，为治瘀血阻滞之要药。党参甘平，益气生津养血，能气阴双补，二者共为君药，共奏活血养心、化瘀通脉、益气健脾之功。天麻、薏苡仁共为臣药，化瘀血、通血脉、开窍、袪风消痰，健脾除湿。川芎、山楂行气活血、化瘀通脉，祛痰散结，共为佐药，助君药以增强化瘀通脉、祛痰健脾之功。郁金为使药，携诸药入血透络、通达气血。诸药合用，标本兼治，共奏化瘀通脉、祛痰健脾之功效。正切中了慢性脑供血不足之痰瘀互结脉中、脾气亏虚的病机。本研究结果显示，化瘀通脉方可能通过调节NO/ET-1平衡而达到抗AS作用。

1戴瑞鸿，李勇，范维虎，等.保护内皮细胞功能在防治心血管疾病中的重要作用〔J〕.国际心血管杂志，2000；2(4)：328.

2陈奇，施杞.中药药效研究思路与方法〔M〕.北京：人民卫生出版社，2005：185.

3陈小野.实用中医证候动物模型学〔M〕.北京：北京医科大学出版社，1993：321.

4陈奇，王建华.中药药理研究方法学〔M〕.北京：人民卫生出版社，1993：33.

5林兆耋，戴自英.实用内科学〔M〕.北京：人民卫生出版社，1991：1088-9.

6Lerman A，Burbett JC.Intact and altered endotheliumin regulation of va-somotion〔J〕.Circulation，1992；86(6)：12.

〔2015-02-24修回〕

(编辑苑云杰/曹梦园)

山东中医药科技发展计划项目(No.2011-192;2005-081)

李长生(1949-)，男，主任医师，博士生导师，主要从事中西医结合脑病研究。

杨晓妮(1979-)，女，主治医师，博士，主要从事中西医结合脑病研究。

R277.7

A

1005-9202(2016)16-3908-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.16.017

1山东中医药大学