小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测技术要点及注意事项



小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测技术要点及注意事项

小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测试验采用的是中国动物卫生与流行病学中心研制的小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测试剂盒，该试验取得正确可靠的结果与试剂、血清的合理配备和正规的操作息息相关。下面笔者就自己的实践经验将几项要点总结如下：

1　血样采集与处理要点

常规采血大多数采取颈静脉采血的方式，在常温下采完的血样要保持倾斜静置，待采完最后一份血样凝固后方可带走。为了确保血清质量应避免下列情况：

1.1若用注射器采血，有时血流较快呈柱状进入注射器，这样会产生泡沫漂浮在上层，由于表面张力的作用使得这样的血样一般不会析出血清。若要避免产生汽泡就要在采血时放慢抽血速度，让血液缓慢流入注射器。如果已经产生泡沫了，可将针头向上，推动活塞将泡沫排出，然后拉回活塞吸进部分空气后再进行放置。

1.2炎热的天气，外界温度超过32℃以上时，要将血样避开强光直射，否则血液凝固而不出血清。

1.3外界气温在0℃以下时要防止冻结，更不能将刚采的血样放入冰箱内保存，避免造成溶血或不出血清。若条件有限没有温暖的环境，可以用手捂热采血器至血液完全凝固。

1.4采回的血样若有血清析出要及时进行分离保存，否则时间一长也会有溶血现象发生。若血清析出不明显可以室温静置一夜。

1.5当得到血清后不要盲目的进行试验，以避免不合格的血清影响检测结果的准确性和对试验试剂的浪费。合格的血清要具备未腐败、无溶血、清亮透明、未凝固或未完全凝固、体积足够检测与样品备份这些条件。

2　试剂的准备

试验要在室温下进行，试剂盒要选择在有效期内的，开封时间不长，无浑浊无杂质的。试剂取出后要恢复到室温后再进行使用。底物溶液要始终避光，各种试剂要先定量再配制，现用现配，现用现取，不造成浪费并保证质量。

3　操作技巧与注意事项

在操作过程中保持安静，精神集中，动作要稳，尽量避免外界干扰。一旦不注意很有可能造成试验结果不准确而影响真实性。

3.1血清样本的摆放。整齐有规律的摆放血清可以提高操作的准确性和试验效率。如果有摆放麦道管的板子，可以将装有待检血清的麦道管按照酶标板设计的布局摆放在板子上。如果没有板子可以按照一定的规律把血样摆在操作台上，比如每10份为1组，或者前2份为1组，剩下的每组放8份。

3.2酶标板下面放置数字垫板。可以在白纸上按照酶标板各孔的位置画出96个孔的排列顺序和编号，然后将酶标板放在白纸上，使各孔与纸上的数字一一对应，这样每个孔的编号清晰可见，加样的时候哪个血样加到哪个孔一目了然。与第一条配合应用工作效率会明显提升。

3.3洗板后的残留气泡巧处理。酶标板用洗液清洗过后在滤纸上拍干，然而有时候总有顽固的气泡经过多次拍打后依然在孔底不破。如果气泡不破就继续加试剂的话肯定会影响试剂的作用，所以要想办法把它弄掉。可以用一个1000μl的单道移液器带上接头后往孔里吹气，将气泡吹破，然后再进行彻底拍干。注意吹的时候不要碰到孔底和孔壁。

4　试验结果判定方法

阴、阳性对照成立后对待检血清进行判定。样品阻断率＞50的为阳性，样品阻断率≤50的为阴性。计算的时候把阻断率为50记为待检血清的OD值临界点，算出这个临界点数值，然后去和待检血清OD值去对比，如果待检血清OD值≥临界点，则该血清为阴性，如果待检血清OD值＜临界点，则该血清为阳性。这样只要用这个临界点数值去和每份血清OD值进行对比就能快速得出结论，不必再逐个计算了。

试验本身就是科学严谨的，试验的结果要求及时、准确、有效。所以操作人员就要尽量减少试剂和人为因素对试验的影响，以提高检测效率。

067400河北省承德县农牧局任利强