林靖凌 李胤均 徐志
摘要:采用超高效液相色谱-电喷雾串联四级杆质谱仪,多反应监测(MRM)模式下建立了吡虫啉和噻嗪酮在芒果(Mangifera indica L.)中的定性及定量分析方法。样品经纯水-乙腈漩涡振荡提取,经分散固相萃取净化,超高效液相色谱-电喷雾串联质谱仪测定。结果表明,在0.001~0.1 μg/mL质量浓度范围内,农药峰面积与进样质量浓度间均呈良好的线性关系(r>0.999),最小检出量(LOD)为5 ng,最低检测浓度(LOQ)为0.005 mg/kg,回收率在84%~101%之间,相对标准偏差(RSD,n=5)为1.9%~6.9%之间。该方法准确、简单、灵敏度高,适用于芒果中吡虫啉、噻嗪酮残留的检测。
关键词:芒果(Mangifera indica L.);吡虫啉;噻嗪酮;超高效液相色谱-电喷雾串联质谱
中图分类号:O657.6 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2016)06-1545-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.06.046
吡蟲啉(Imidacloprid)是硝基亚甲基类内吸杀虫剂,为烟酸乙酰胆碱酯酶受体的作用体,作用机制是干扰害虫运动神经系统使化学信号传递失灵,可用于防治刺吸式口器害虫,如蚜虫、蓟马、飞虱等[1-4]。噻嗪酮(Buprofezin),杂环噻二嗪类昆虫生长调节剂,作用机制是抑制昆虫几丁质合成和干扰新陈代谢,导致若虫蜕皮畸形或翅畸形而缓慢死亡,触杀作用强,对飞虱、叶蝉、粉虱及介壳虫类害虫有良好防治效果[5-7]。这2种农药在生产上已被广泛使用,目前在芒果(Mangifera indica L.)上应用的混剂登记的产品仅有1个,为38%吡虫·噻嗪酮悬浮剂。目前,中国未明确规定芒果上吡虫啉、噻嗪酮最大残留限量,CAC与欧盟规定芒果上吡虫啉最大残留限量为0.2 mg/kg,噻嗪酮为0.1 mg/kg。
吡虫啉的检测方法主要有液相[4]、液质联用[8,9],噻嗪酮的检测方法有液相[10]、气相[11]、气质[12]、液质[13],涉及的基质有蔬菜、水果、粮食、水和土等,提取方法有匀浆、超声、加速溶剂萃取等,净化处理主要有固相萃取、分散固相萃取等[9-13]。本研究将农业行业标准761法和QuEChERS法结合,并加以改进与液质联用,旨在建立1个准确、简单、高灵敏度能同时测定芒果中吡虫啉和噻嗪酮的检测方法,为满足日后检测要求,保障消费安全,降低出口损失,客观评价上述农药的残留水平提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
吡虫啉、噻嗪酮标准品,纯度99.0%,30 mg/瓶,德国Dr Ehrenstorfer GmbH公司;乙腈,色谱纯,美国Fisher公司;无水硫酸镁、氯化钠,均为分析纯,广州化学试剂厂;分散固相萃取,Dispersive SPE 15 mL,PSA 150 mg-magnesium sulfate 900 mg,美国Agilent公司;PSA,40~63 μm,60 A,德国CNW公司;有机相针式滤器,13 mm/0.22 μm,上海安谱科学仪器有限公司。
1.2 主要仪器
超高效液相色谱系统,Acquity Ultra Performance;质谱系统,API4000;涡流混合器,XW-80A;匀浆机,IKA?誖T25;超纯水机,Milli-Q;电子天平,METTLER TOLEDO PL303。
1.3 方法
1.3.1 样品前处理 称取(5.0±0.1) g的样品于50 mL离心管中,样品中加入5.0 mL超纯水,加入乙腈10.0 mL,经涡流混合器提取2.0 min后,4 000 r/min离心5 min,上清液转入装有3.0 g氯化钠的50 mL离心管中,剧烈振荡120次,4 000 r/min离心5 min,转移上清液10.0 mL于Dispersive SPE中,经涡流混合器萃取2.0 min后,8 000 r/min离心10 min,经0.22 μm滤膜过滤,待测。
1.3.2 标准溶液配置 称取标准品,用甲醇定容成母液,吸取不同体积至容量瓶中,氮气吹干,用经“1.3.1”处理后的样品空白溶液定容,定容后浓度为0.001、0.005、0.01、0.25、0.1 μg/mL。
1.3.3 仪器条件
1)色谱条件。色谱柱:Acquity UPLC?誖BEH C18色谱柱(1.7 μm,2.1 mm×100 mm);柱温:35 ℃;流动相:A-水,B-乙腈;流速:0.25 mL/min;梯度洗脱条件:0~0.2 min, 90%A;0.2~4.5 min,10%A;4.5~5.0 min, 10%A;5.0~5.5 min, 90%A;5.5~6.0 min, 90%A;进样量:5.0 μL。
2)质谱条件。离子源:电喷雾离子源ESI;扫描方式:正离子源;碰撞气:6 psi;气帘气:20 psi;雾化器Gas1:50 psi;雾化器Gas2:50 psi;离子喷雾电压:5 500 V;离子源温度600 ℃;检测方式:多反应监测(MRM)如下表1所示。
2 结果与分析
2.1 样品前处理
2.1.1 提取溶剂的选择 在5.0 g空白样品中加入标准溶液,浓度0.05 mg/kg,重复2次,比较了乙腈(10.0 mL)提取、水-乙腈(5.0 mL∶10.0 mL)提取2种方法。加水后的芒果在乙腈更易分散,提高提取率,具体结果见表2。
2.1.2 匀浆方法的选择 加入提取溶剂后,对比了匀浆机(18 000 r/min匀浆2 min)和涡流混合器(涡流混合2 min)2种提取方式。使用纯乙腈提取时,由于芒果含糖量高(不同品种和成熟度有差异),样品在溶剂中分散程度较差,使用涡流混合器提取效果较差,匀浆机刀头破碎效果好,因此提取效果较好;提取溶剂为水-乙腈时,由于预先加入水进行润湿,样品在乙腈中分散度好,二者提取效果相近,均能满足要求。但匀浆机的使用过程需要清洁刀头,增加了劳动量,另外噪音大,因此选择涡流混合器进行提取。具体提取结果见表2。
2.1.3 净化方法的选择 在具塞试管中加入标准溶液,吹干后加入10.0 mL空白样品提取液,定容后浓度为0.025 μg/mL,转移至分散固相萃取剂中,重复5次,共两组,比较了A、B两种分散固相萃取剂的净化效果:A(Dispersive SPE,15 mL,PSA 150 mg-magnesium sulfate 900 mg,Agilent),和现配现用的分散固相萃取剂B(150 mg,PSA 40~63 μm,60A)+无水硫酸镁(900 mg),二者净化杂质效果相近。综合比较,A价格略贵,但可节省大量劳动力,重现性较好,8 000 r/min离心后,分散固相不易重新散开,因此选择A作为净化方法。具体结果见表3。
2.2 方法的线性相关性
采用外标法峰面积定量,用乙腈配制吡虫啉、噻嗪酮标准贮备液。为消除基质效应,移取不同体积的母液,氮气吹干溶剂后,用经“1.3.1”条件处理后的样品空白定容,定容后浓度为0.001、0.005、0.01、0.025、0.1 μg/mL,注射标准工作系列溶液,绘制标准曲线,吡虫啉保留时间为2.13 min,噻嗪酮保留时间为5.19 min。结果表明,在该条件范围内,仪器响应值与进样量呈良好的线性关系,具体结果见表4,标准谱图见图1。
2.3 方法的回收率、精密度
在芒果果肉中,添加吡虫啉、噻嗪酮标准溶液0.005、0.050、0.200 mg/kg,每个浓度设5个平行。吡虫啉在芒果果肉中的回收率为86%~102%,相对标准偏差1.9%~4.3%,噻嗪酮在芒果果肉中的回收率84%~101%,相对标准偏差3.3%~6.9%,该方法的准确度和精密度符合农药残留试验准则要求(表5)。
3 小结
本研究建立了芒果中吡虫啉和噻嗪酮的超高效液相色谱法-电喷雾串联质谱检测方法,前处理方法将农业行业标准761法和QuEChERS法结合并加以改进,在一定程度上简化了操作过程,减轻了工作量,结合液质联用,能够对芒果中吡虫啉和噻嗪酮同时进行准确的定性定量分析,以基质校正曲线进行定量,消除基质影响,线性范围为0.001~0.1 μg/mL,该方法的定量限为0.005 mg/kg,该方法的回收率和精密度符合试验要求,可满足日常快速检测,为客观评价吡虫啉和噻嗪酮在芒果上的残留水平提供参考。
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