苍耳合剂质量标准研究

孙晓迪 谢予朋 李秀敏 王瑞 王苏会 李艳辉

[摘要] 目的 完善苍耳合剂现有质量标准，使之更加规范。 方法 采用薄层色谱法，以三氯甲烷-乙醚（5∶1）为展开剂，木兰脂素对照品为对照，鉴别苍耳合剂的主要成分辛夷花；采用高效液相色谱法测定木兰脂素的含量。色谱柱：CAPCELL PAK MG C18 MG S-5（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（45∶55）；流速1.0 mL/min；检测波长278 nm；柱温30℃。 结果 薄层色谱中供试品和对照品斑点清晰/分离度好，且阴性无干扰；含量测定中，木兰脂素在41.25～660.00 μg/mL浓度范围内呈现良好线性关系（r = 0.9999），平均回收率为100.80%，RSD为1.55%（n=6）。3批样品中木兰脂素平均含量分别为6.96、6.90、6.93 mg/瓶。 结论 新增加的定性、定量检测方法操作简单、专属性强、重现性好，可用于苍耳合剂的质量控制。

[关键词] 苍耳合剂；薄层色谱法；高效液相色谱法；木兰脂素

[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）03（c）-0023-03

[Abstract] Objective To complete the quality standard for Xanthium Mixture， and make it more standardized. Methods Magnolia flower in Xanthium Mixture was identified by TLC method， using chloroform-ether （5∶1） as eluent and magnolin as control. The content of magnolin was determined by HPLC method. CAPCELL PAK MG C18 MG S-5 （4.6 mm×150 mm， 5 μm） column was used with acetonitrile-water （45∶55） as the mobile phase at flow rate of 1.0 mL/min. Detection was performed with spectrophotometric detection （278 nm） at 30℃. Results TLC spots were clear and well-separated without negative interference. The linear range of Magnolin was from 41.25 to 660 μg/mL （r = 0.9999）. The average recovery was 100.8%， the RSD was 1.55% （n=6）. In the 3 grups， the average content of Magnolin was 6.96， 6.90， 6.93 mg/bottle. Conclusion The new methods are simple， accurate， sensitive and reproducible and may be potential criterion for the quality control of Xanthium Mixture.

[Key words] Xanthium Mixture； TLC method； HPLC method； Magnolin

苍耳合剂是应用多年的医院制劑，由苍耳子、辛夷花、金银花等中药组成，有效治疗鼻炎、鼻窦炎。方中苍耳子为君药，辛夷花为臣药，二者配伍，辛散风邪，发挥散风寒、通鼻窍的功能[1-3]，再佐以清热解毒、消脓止痛的金银花达到治疗目的[4]。本试验在苍耳合剂现有质量标准基础上，增加辛夷花的薄层鉴别及木兰脂素的含量测定，完善质量标准，确保其有效性与安全性。

1 仪器与材料

1.1 仪器

LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津），SPD-20A紫外检测器（日本岛津），SIL-20A自动进样器（日本岛津），LC-solution色谱工作站（日本岛津）；BS2202S 电子分析天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）。

1.2 试剂

乙腈为色谱纯；水为纯化水（自制）；其余试剂均为分析纯。

1.3 药品

木兰脂素对照品（批号110882-201206）购自中国药品生物制品检定所。苍耳合剂（批号20150108、20150114、20140921）由北京军区天津疗养院提供。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

取苍耳合剂50 mL，置分液漏斗中，用三氯甲烷萃取2次，每次50 mL，合并三氯甲烷层，蒸干，残渣加三氯甲烷2 mL溶解，作为供试品溶液。取木兰脂素对照品2 mg，加甲醇定容至2 mL，作为对照品溶液。称取不含辛夷花的苍耳子、金银花煎煮制得阴性对照品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醚（5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇液，置105℃烤箱中烘烤至斑点显色清晰。供试品色谱中，与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点，且阴性无干扰。见图1。

2.2 木兰脂素含量测定

2.2.1 色谱条件

CAPCELL PAK MG C18 MG S-5（4.6 mm×250 mm，5 μm）（资生堂公司）；流动相为乙腈-水（45∶55）；检测波长278 nm；柱温30℃；进样量10 μL，理论塔板数按木兰脂素峰计算应不低于9000。

2.2.2 溶液制备

2.2.2.1 对照品溶液的制备 精密称定木兰脂素对照品1.65 mg，加甲醇定容至5 mL，即得。

2.2.2.2 供试品溶液的制备 取苍耳合剂20 mL，置分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次，每次20 mL，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至10 mL量瓶中，摇匀，即得。

2.2.2.3 阴性对照品溶液的制备 称取不含辛夷花的苍耳子、金银花煎煮制得阴性对照品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.2.3专属性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各10 μL，进行测定，供试品溶液与对照品溶液中木兰脂素特征峰具有相同保留时间，且阴性无干扰。见图2。

2.2.4 标准曲线

精密称取木兰脂素对照品10.49 mg（纯度：98.3%），甲醇定容至5 mL，作为标准储备液。精密吸取0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mL置5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得浓度为41.25、82.5、165、330、660 μg/mL对照品溶液。精密吸取各浓度对照品溶液10 μL，进行测定。以浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线。其线性方程为Y=5721.4297X+12 935.75（r2 = 0.9999）。结果表明木兰脂素在41.25 ～660.00 μg/mL范围内呈良好线性关系。

2.2.5 精密度试验

连续6次精密吸取“2.2.4”項下浓度为330 μg/mL的对照品溶液10 μL进行测定。计算得出木兰脂素峰面积RSD为0.38%，结果表明仪器精密度良好。

2.2.6 重复性试验

取批号为20140921的苍耳合剂6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下方法进行测定。计算得出木兰脂素平均含量为139.23 μg/ml，RSD为1.03%。结果表明此色谱条件测定供试品中木兰脂素含量重复性良好。

2.2.7稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液10 μL，分别于0、1、2、4、8、12、24 h进行测定，计算得出木兰脂素峰面积RSD为0.38%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.2.8加样回收率

精密称取批号为20140921已知含量的样品6份，加入木兰脂素对照品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.2”项下方法进行测定，计算得出木兰脂素平均回收率为100.80%，RSD为1.55%。结果表明选用的色谱条件适合测定木兰脂素含量。见表1。

2.2.9 样品含量测定

按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法处理3批样品（批号：20150108、20150114、20140921），按“2.2.2”项下方法进行测定。3批样品的含量分别为6.96、6.90、6.93 mg/瓶。

3 讨论

随着人们对中药研究的深入，通过单一的化学指标成分对中药制剂进行质量控制的模式已经不适用于中药现代化的发展，多指标成分的质量控制将是发展的必然趋势[5]。医疗机构中药制剂有着自身优势，不仅可以满足医院临床需求、还可以弥补已上市中成药品种的不足[6]。因此，医疗机构中药制剂的发展不容忽视。苍耳合剂作为医院自制中药制剂，现有的质量标准检测指标单一。为使其更好地为患者服务，在医院更好地应用推广，本试验对现有质量标准进行修订。新增的定性、定量检测方法操作简单、专属性强，可对苍耳合剂进行有效的质量控制。

辛夷为木兰科植物望春花（Magnolia biondii Pamp.）、玉兰（Magnolia denudata Desr.）或武当玉兰（Magnolia sprengeri Pamp.）的干燥花蕾[7]。临床上常与苍耳子、细辛、白芷、防风等配伍，用于治疗各种鼻炎[8]。王荧荧等[9]报道，苍耳子和辛夷合煎液中有效成分的峰面积大于单煎液峰面积，说明二者有相互增溶的作用。辛夷主要含有挥发油、黄酮类、木脂素、脂肪酸、香豆素等多种药效成分[10]。研究表明，辛夷具有抗炎、镇痛、抗过敏活性[11]，有局部收敛、中枢抑制、降血压等作用，对子宫及肠道平滑肌的影响有多种药理学作用[12]，其中木脂素和新木脂素已经成功应用于调控过敏性疾病[13]。在生物活性方面，辛夷中的木兰脂素、松脂素二甲醚、里立脂素B二甲醚等木脂素成分可通过拮抗血小板活性因子（PAF）活性而发挥抗炎作用[14]；其水提物可抑制鼻咽癌细胞（CNE）的增殖，抑制率为24.40%[15]。在临床应用中，辛夷被开发成多种剂型治疗各种鼻炎。如口服的鼻渊丸、鼻炎糖浆等[16]；外用的鼻通宁滴剂、复方鼻炎宁滴鼻剂等。由此可见，辛夷在鼻炎、鼻窦炎治疗中发挥重要作用[17]。

在流动相选取时，分别考察药典方法和文献方法乙腈-四氢呋喃-水（39∶1∶60）[18]、乙腈-水（45∶55）、乙腈-水（49∶51）[19]、乙腈-水（40∶60）[20]为流动相时木兰脂素含量的测定情况。结果表明，含四氢呋喃的流动相使木兰脂素分离度<1.5；其余三种流动相测得结果差异不大。综合考虑，选择乙腈-水（45∶55）为流动相。同时考察柱温为30、35℃时，主峰与杂质峰分离情况。结果表明温度仅影响出峰时间，故选择30℃。

[参考文献]

[1] 李辉，朱天民.鼻渊舒对慢性鼻-鼻窦炎模型鼻窦黏膜上皮糖皮质激素受体功能的影响[J].中成药，2014，36（1）：34-35.

[2] 王婧.HPLC法同时测定祛喘胶囊中木兰脂素、欧前胡素、异欧前胡素的含量[J].中国药师，2015，18（10）：1832-1834.

[3] 李钰馨，韩燕全，洪燕，等.苍耳子的主要化学成分及药理活性研究进展[J].中国药房，2015，26（34）：4868-4869.

[4] 张丽艳.鼻渊汤加减联合西药治疗慢性鼻-鼻窦炎的疗效观察[J].陕西中医，2015，36（10）：1390-1391.

[5] 梁小银，陈少旭，吴垠.中药制剂质量控制研究的发展趋势[J].中国药房，2014，25（3）：280-283.

[6] 王阶，乔夕瑶，林飞.医疗机构中药制剂现状研究及发展对策[J].中国中药杂志，2015，40（21）：4117-4121.

[7] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2015：182.

[8] 曹纬国，陶燕铎，颜学伟，等.辛夷中辛夷脂素与木兰脂素高效液相色谱含量测定方法的建立与优化[J].时珍国医国药，2014，25（7）：1598-1599.

[9] 王熒荧，冯紫薇，高天.苍耳子辛夷合煎液指纹图谱变化分析[J].长春中医药大学学报，2009，25（6）：830-831.

[10] 袁玲.辛夷不同部位的挥发油含量测定与薄层色谱比较[J].湖北工程学院学报，2015，35（3）：54-56.

[11] 王永慧，叶方，张秀华.辛夷药理作用和临床应用研究进展[J].中国医药导报，2012，9（16）：12-14.

[12] 冯卫生，王建超，何玉环，等.辛夷化学成分的研究[J].中国药学杂志，2015，50（24）：2103-2106.

[13] Kim GC，Lee SG，Park BS，et al. Magnoliae flos induces apoptosis of RBL-2H3 cells via mitochondria and caspase [J]. Int Arch Allergy Immunol，2003，131（2）：101-110.

[14] 赵鑫，杨光，郑国帅，等.高效液相色谱-质谱-电雾式检测法同时测定辛夷提取物中4种木脂素成分[J].分析化学，2014，42（12）：1804-1810.

[15] 吴霞，李药兰，张冬梅，等.25种中草药体外抑制鼻咽癌细胞增殖活性研究[J].中成药，2010，32（12）：2161-2163.

[16] 曾江洪，刘灿辉.鼻炎糖浆质量标准研究[J].中国药业，2011，20（9）：16-17.

[17] 吕洁，孟祥军，邹春阳，等.HPLC 法测定鼻通宁滴剂中木兰脂素的含量[J].辽宁中医药大学学报，2007，9（4）：159-160.

[18] 卢金凤，蒲旭峰.复方鼻炎宁滴鼻剂的质量控制[J].中国药业，2013，22（18）：54-56.

[19] 吴德玲，王艳华，许甜甜，等.新安鼻渊颗粒的质量控制[J].中国医院药学杂志，2012，32（5）：336-339.

[20] 胡海聪，于珊珊，张晓静，等.HPLC法测定清肺止咳颗粒中木兰脂素、秦皮甲素、秦皮乙素的含量[J].药物分析杂志，2013，33（5）：866-869，873.

（收稿日期：2015-12-24 本文编辑：赵鲁枫）