两种不同方法检测降钙素原结果的比较

董慧芳，薛海华

内蒙古包钢医院，内蒙古包头014010



两种不同方法检测降钙素原结果的比较

董慧芳，薛海华

内蒙古包钢医院，内蒙古包头014010

目的比较ELISA法检测降钙素原和免疫荧光层析法检测降钙素原结果的一致性，为合理选择降钙素原检测方法提供实验依据。方法应用ELISA法检测降钙素原和免疫荧光层析法检测降钙素对87例临床标本进行检测，通过直接比较和计算结果判断检测结果的一致性。结果87例标本中两种方法结果的符合率89.3%。结论两种不同检测降钙素原的方法具有一定的可比性，可以根据临床需要选择不同的检测方法。

降钙素原；ELISA法；免疫荧光层析法；符合率

降钙素原（PCT）是一种诱导脓毒蛋白，随着细菌、寄生虫感染和脓毒症等因素的影响，导致其在血浆中的水平不断升高。但是机体自身进行免疫和病毒感染时并不会对PCT造成变化。磁瓦，机体局部小范围细菌感染及慢性炎症等也不会对其造成影响。PCT还可以反映出机体全身炎症的实际变化。相关研究发现，感染器官的程度、细菌类型、炎症程度等均会对PCT水平产生影响。另外，PCT可以在部分患者进行大型外科术后检测到。

PCT水平的升高会产生很多并发症状，给患者的日常生活造成了很大影响，严重时将发生休克及多器官功能紊乱综合征等，同时还会受到细菌感染。但是，从当前PCT水平发展变化情况来看，细菌性病灶在PCT发展中较低，使用肠道释放细胞因子与细菌移位都会引起诱导。

所以PCT的主要作用是对早期败血症进行检测，同时可以对其严重程度进行评定［1-3］。现阶段，检测PCT的实验室方法有很多，不仅可以定性，亦可以定量。该研究选用ELISA法检测降钙素原和免疫荧光层析法检测降钙素原，对比研究其检测结果的一致性。

1　材料与方法

1.1仪器、试剂

1.1.1ELISA法检测降钙素原酶标仪的型号MK3；试剂盒购自长沙三济有限公司（批号：F68100801188）；免疫荧光层析法检测降钙素原：广州万孚生物技术有限公司生产的免疫荧光定量分析仪.试剂盒购广州万孚（批号：2400615）。

1.1.2标本的来源收集该院2014年10—12月实验室接收的临床送检标本，有MICU病房、儿科、呼吸科、外科等相关临床科室的87例检测标本，其中男性48例，女性39例，年龄在5～79岁之间。87份标本用两种方法同时检测.

1.2方法

1.2.1ELISA法检测降钙素原采用双抗体夹心法测定标本中人降钙素原（PCT）水平。反应板用纯化的人降钙素原抗体包被，同时将待测标本加入等待完全孵育后，再将辣根过氧化物酶标记的PCT抗体加入到内部。标本中如果含有降钙素元，就会和包被在反应板上的降钙素原抗体结合在一起，进而与HRP标记的降钙素原抗体结合形成复合物，洗涤后加入一定的TMB底物，注意TMB加入后，会在HRP酶催化作用下变为蓝色；加入适量酸作后会转化成黄色。使用酶标仪在450 nm波长下对吸光度进行测定，实验发现，（OD值）和标本中降钙素原加入量呈线性关系。使用加样枪将取出的样品进行5倍稀释，然后在待测样本孔中加入40 μL的样品稀释液，最后加待测样本10 μL，标准品倍比稀释后准确加样50 μL，轻轻晃动混匀，封板置37℃恒温箱中孵育30 min。洗涤：充分洗涤每孔，在每个孔中加入立即可用的酶标抗体50 μL，37℃恒温箱中再孵育30 min。洗板.每孔加A、B显色剂各50 μL，轻轻震荡混匀，同时在37℃下避光显色15 min。每孔加入50 μL终止液，在450 nm下读OD值。测定必须在加入终止液之后的15 min内完成。结果：通过绘制标准曲线可以计算出标本中PCT的含量。

1.2.2免疫荧光层析法检测降钙素原免疫荧光层析法主要利用利用高度特异性发生的抗原抗体反应，对标本中的PCT和预先包被在聚酯膜进行标记，让降钙素原单克隆抗体结合，在毛细效应下结合物会向上层析，随后会被在膜上固定的降钙素原单克隆抗体捕获，降钙素原的浓度就是利用标本中的降钙素原含量与内置标准曲线完成信号转换实现的。该次研究发现，所选试剂使用免疫荧光双抗体夹心法与被捕获的结合物含量呈正相关，利用免疫定量分析仪扫描检测区后可获得光学信号，然后再对人体中的血液、血浆及血清中的降钙素浓度进行检测。完成操作后，将待测样本缓慢加入到溶液中搅拌混匀，当样本中的降钙素原抗原与缓冲液中的荧光标记降钙素原单克隆抗体结合后就会产生反应复合物。使用滴加法将混合样本加入到测试卡的加样孔中，在利用层析作用下，反应复合物会顺着沿着硝酸纤维膜不断向前扩散，被固定在硝酸纤维膜检测线上包被的降钙素最终被原单克隆抗体所捕获。经过分析发现，样本中含有的降钙素原越多，则检测线上的复合物就越多。荧光抗体信号的强度可以反应被捕获的PCT量。经广州万孚生物技术股份有限公司生产的免疫荧光检测仪，可检测出样本中降钙素原的浓度。

方法：取50 μL血清或血浆加入反应液中混匀1 min，取75 μL加入反应板中，置室温15 min后，免疫荧光定量分析仪检测。

2　结果

该文共收集了87例标本进行了两种方法的检测，结果符合率为89.3%，见表1。

表187　例标本两种方法结果的比较

3　讨论

现阶段，怎样正确合理的使用抗生素已经成为医学界研究的主要课题。如果使用抗生素时有一个指标可以清楚地反映出抗生素的治疗疗效，就可以给医生提供参考，帮助医生及时找到适合患者的抗生素药物，控制好抗生素使用剂量和疗程，进而控制患者的病情，同时还缩短了住院天数，节省病人资金花费，提高了治疗效果。PCT是降钙素前体，进行表达时，主要由神经内分泌细胞、肺组织完成C细胞表达，但是在生理情况下很难在血液中检测到该种物质。它是一种诱导蛋白的脓毒，是验证诊断的新指标，现在，已经广泛应用到病情检测，感染疾病诊断中，也是目前检测抗生素使用的一个指标。其浓度变化会随着患者细菌感染的病情的发展不断变化，并且不受其他治疗药物（如糖皮质激素）的影响，此外，PCT水平还能用于评估病人的预后，不同的PCT浓度提示感染的严重程度，伴发器官功能不全的可能，死亡率。经过十多年的临床验证，PCT已经成为许多医院的重症患者的常规检查项目之一，国内也有越来越多的医生认识到PCT的重要性。临床上检测PCT的主要方法是半定量法和定量法，两种检测方法都是加注抗原抗体的特异性免疫反应完成的。

PCT定量检测是一种非常有效的方法，尤其对于需要定期观测治疗效果的患者，具有非常大的意义。在该次研究中，主要对两种不同检测方法的检测效果进行了比较。研究方法的选择也会对试验检测结果产生影响，该次研究使用的两种分析方法都可以检测结果产生影响，从数值方面分析，该次所选用的两种方法检测结果一致。

免疫层析法的主要原理是使用高度特异性的抗原抗体反应，将标本中的降钙素元和在聚酯模上包被的金标记降钙素元进行结合，结合物首先记住毛细效应向上层析，之后会被固定在模上的降钙素元单克隆抗体捕获，试验实现标本中降钙素元与铺货的集合物含量呈现正相关，降钙素原的浓度就是利用标本中的降钙素原含量与内置标准曲线完成信号转换实现的。免疫定量分析仪融合了胶体金免疫层析技术定量检测方法，具有操作方便、重复性好、线性范围广的特点，可以将其应用到各种实验室中，但会出现假阴性及假阳性结果，需要引起重视。

电化学发光法检测PCT主要利用PCT双抗原夹心二步法进行。主要原理是利用待测样本和生物素化的单克隆PCT抗体以及标记的复合物PCT同时进行孵育，然后形成抗原抗体夹心复合物。此种方法的主要特点是干扰因素较少、比较快速而且与国外很多先进一起具有很多相关性优点。

该文共收集了87例标本进行了两种方法的检测，结果符合率为89.3%。该研究主要对ELISA法检测和免疫荧光层析法检测两种检测方法的效果进行了比较，经过检测发现，这两种检测结果不存在相关性，所以该文做了符合率的统计，判断二者检测结果是否一致。

ELISA法检测PCT需要做出标准曲线和质控品，同时还要从实验室效益角度进行分析，可以应用到临床标本较多的实验室检测。免疫荧光层析法具有操作简便、精确度高、检测范围宽及重复性好等优势已经广泛用于实验室检测中，但由于检测方法的局限性，会产生假阴性和假阳性两种结果，比较适合急诊科、ICU等重症监护患者的病情检测。通过比较，两种不同检测降钙素原的方法具有一定的可比性，可以根据临床需要选择不同的检测方法。ELISA法检测降钙素原适用于批量检测，免疫荧光层析法检测降钙素可用于急诊随时检测。

在该次研究中，两种检测的检测结果相同，实验证实这两种检测方法均是临床上实用性较大的检测方法，由于每个实验室情况不同，在实际检测中，可以根据实验室的实际情况针对性选择测方法，为临床提供可靠的实验数据。

综上所述，两种检测降钙素元的方法各有优势，但是由于实际检测实验室不同，在实际检测中应该针对性进行选择，提高检测结果的准确度。通常情况下，急诊检测中通常应用免疫荧光层析法，对临川疾病诊断及抗生素的合理应用具有很大作用；如果进行PCT高浓度检测时，可以使用电化学发光法或经电化学发光法，对免疫荧光层析法进行校正。

［1］Sudhir U，Venkatachalniah RK，Kumar TA，et al.Significance of senm Procalcitionin in sepsis［J］.Indian J Cnl Care Med，2011，15（1）：1-5.

［2］陈自武.降钙素原、超敏C反应蛋白与外周血碱性磷酸酶几份在细菌感染中应用探讨［J］.临床和实验医学杂志，2010，9（8）：572-573.

［3］杜冀晖，苏卓娃，等.血清降钙素原测定在儿科感染性疾病诊断中的应用［J］.临床和实验室医学杂志，2006，5（9）：1320-1321.

［4］高红军，郑敏，等.两种降钙素原检测方法的比较研究［J］.医学检验杂志，2011（8）：32.

Comparison of Results of Two Different Methods in Testing Procalcitonin

DONG Hui-fang，XUE Hai-hua
Inner Mongolia Steel Hospital，Baotou，Inner Mongolia，014010 China

Objective To compare the result consistency of ELISA method andimmunofluorescence chromatography in testing procalcitonin and provide the experimental basis for rational choice of procalcitonin test methods.Methods The procalcitonin of 87 cases of clinical specimens were detected by the ELISA method andimmunofluorescence chromatography，and the consistency of test results was determined by the direct comparison and result calculation.Results The coincidence rate of two methods of 87 cases of specimens was 89.3%.Conclusion The two different methods of testing procalcitonin have a certain comparability，and we can select the different test methods according to the clinical needs.

Procalcitonin；ELISA method；Immunofluorescence chromatography；Coincidence rate

R446.6

A

1672-5654（2016）09（a）-0111-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.25.111

2016-06-06）

董慧芳（1964.1-），女，山东肥城人，本科，主管检验师，主要从事免疫检验工作及分子生物学实验的检测工作。