GC-MS检测生物检材中的敌敌畏

解润芳，李玉雯，解继明，杨凯润，王欣，董继攀

1.昆明医科大学法医学院，云南昆明650500；2.云南省第三人民医院内分泌科，云南昆明650011；3.云南省第三人民医院心胸外科，云南昆明650011



GC-MS检测生物检材中的敌敌畏

解润芳1，李玉雯2，解继明3，杨凯润1，王欣1，董继攀1

1.昆明医科大学法医学院，云南昆明650500；2.云南省第三人民医院内分泌科，云南昆明650011；3.云南省第三人民医院心胸外科，云南昆明650011

目的建立一种简便、快速、准确、可靠的GC-MS检测生物检材中敌敌畏的方法。方法用无水Na2SO4把生物检材拌成干沙状以后，用氯仿-丙酮（6：1）进行提取分离，GC-MS对样品进行分离分析，用总离子流图（TIC图）中敌敌畏的保留时间及质谱图中对应的特征离子碎片定性。结果该方法简单易操作，背景干扰小，分离效果好，分析速度快，敌敌畏的保留时间为4.895 min、特征离子碎片（m/z）为79，109及185。结论该方法可用于法医毒物分析生物检材中敌敌畏的检测，结果令人满意。

法医毒物分析；GC-MS；生物检材；敌敌畏

敌敌畏（Dichlorovos）属于有机磷酸酯类杀虫剂，在水溶液中容易分解，随着敌敌畏的广泛使用［1-2］，涉及到敌敌畏中毒的案（事）件越来越多，建立一种简单、灵敏、快速、可靠，满足法医毒物分析对生物检材中敌敌畏检验的方法具有较好的现实意义。该文基于敌敌畏的理化性质及参考文献［3-7］的基础上，提出采用无水Na2SO4把生物检材拌成干沙状以后，用氯仿-丙酮（6：1）进行提取分离的样品前处理方法，经过探究取得满意的结果。

1　材料与方法

1.1主要仪器和试剂

GC/MS：Agilent7890A/5975C气相色谱-质谱联用仪；配有电子轰击离子源（EI）及Nest11.0化学图谱库敌敌畏标准溶液（1.0 mg/mL，购自司法部司法鉴定科学技术研究所）20 μg/mL敌敌畏标准工作对照溶液：准确移取适量的0.2 mL上述1.0 mg/mL的敌敌畏标准溶液，然后用色谱纯甲醇定容在10 mL的容量瓶，甲醇（色谱纯）、氯仿（分析纯）、丙酮（分析纯）。

1.2检材

待测样品：某男性心血、肝脏、胃及胃内容物。

1.3实验方法

1.3.1GC/MS仪器条件离子源：EI源，离子化能量：70 eV，离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；色谱柱：HP-5 ms 30 m×0.25 mm×0.25 μm。进样口温度：280℃；传输线温度：250℃；程序升温：初温80℃保持3 min，以30℃/min的速率升温到300℃，保持8 min；进样方式：分流进样，分流比：10：1；载气：氦气，纯度：＞99.99%，流速：1.0 mL/min。

1.3.2样品前处理分别取送检该男性心血5 mL，该男性肝脏10 g（剪碎），该男性胃及胃内容物10 g（剪碎），分别置于3个瓷坩埚中，均加入适量的无水Na2SO4把生物检材拌成干沙状以后，均用20 mL的氯仿-丙酮（6：1）进行提取分离，把提取液分别放置于3个瓷坩埚中，残渣仍然用20 mL的氯仿-丙酮（6：1）进行第2次提取分离，并把第2次的提取液合并于同一个瓷坩埚中，把瓷坩埚放在55℃水浴锅上挥干，取下瓷坩埚，冷却至室温。

用约1 mL色谱纯甲醇少量多次地洗涤上述瓷坩埚中的萃取物质，并把洗涤液置于进样瓶中，分别得到待测心血、待测肝脏、待测胃及胃内容物。

1.3.3分析检测将空白对照样品（色谱纯甲醇），20 μg/ mL敌敌畏标准工作对照溶液，该男性的待测心血，待测肝脏、待测胃及胃内容物，分别进样1 μL，用GC/MS在1.3.1条件进行分离分析。

2　结果与讨论

2.1对照样品的检验及讨论

经检测空白对照样品TIC图中4.895 min处未出峰，说明色谱纯甲醇可以作为空白试剂使用，不影响测定，可排除假阳性干扰的可能。图1所示，敌敌畏标准工作对照液的TIC图中，4.895 min出现敌敌畏的色谱峰，而且峰形很好基本成正态分布，说明所建立的分离分析方法适用于敌敌畏的检测。图2为敌敌畏标准工作液TIC图中色谱峰所对应的质谱图（MS图），MS图中显示了敌敌畏的特征离子碎片为：79，109及185，与Nest11.0化学图谱库中敌敌畏的匹配度很高＞95%，进一步确证为敌敌畏，而且GC/MS分离分析方法还给出了敌敌畏的分子结构，使定性更加准确、可靠。

图1　敌敌畏标准工作对照液的TIC图

图2　敌敌畏标准工作对照液的MS图

2.2待测样品检测及讨论

图3所示为该男生待测心血的TIC图，在TIC图中4.904 min出现敌敌畏的色谱峰，图4为该男生待测心血TIC图中色谱峰所对应的质谱图（MS图），MS图中显示了敌敌畏的特征离子碎片为：79，109及185，与Nest11.0化学图谱库中敌敌畏的匹配度很高＞95%，可以得出该男生心血中检出敌敌畏的结论。图5、图6、图7、图8、分别为该男生待测肝脏及待测胃及胃内容物的TIC图及所对应的MS图，待测肝脏在4.895 min处出现敌敌畏的色谱峰，待测胃及胃内容物在4.93 min处也出现敌敌畏的色谱峰；在MS图中待测肝脏及待测胃及胃内容物都显示敌敌畏的特征离子碎片为：79，109及185，与Nest11.0化学图谱库中苯巴比妥的匹配度很高＞95%，这都能成为该男性待测肝脏及待测胃及胃内容物中检出敌敌畏的直接依据。

图3　该男生待测心血的TIC图

图4　该男生待测心血的MS图

图5　待测肝脏的TIC图

图6　待测肝脏的MS图

图7　待测胃及胃内容物的TIC图

图8　待测胃及胃内容物的MS图

2.3检测结果的讨论

经案情调查，该男生（男，43岁）某企业工人，性格内向，不擅长与人交流，2016年3月因企业不景气，被告知下岗，在家里闲着整天闷闷不乐，2016年3月20日，因家庭琐事与其妻发生了口角，因此产生了轻生的念头，就到市场上买来农药敌敌畏服下，经抢救无效死亡。检测结果与案情相符，进一步说明检测结果真实、可靠，所建立的方法可用于法医毒物分析的检案鉴定。

3　结论

敌敌畏属于有机磷酸酯类杀虫剂，由于分子结构中磷酸酯不稳定，在水溶液中容易分解，因此不适于用液-液萃取法来对生物检材进行前处理。该文采用无水Na2SO4把生物检材拌成干沙状以后，用氯仿-丙酮（6：1）进行提取分离，克服了液-液萃取会造成敌敌畏水解的问题。另一方面，该文建立的生物样品前处理方法操作简单，耗时少，检测结果显示基质干扰小，分离效果好，特别适用于临床及司法鉴定中快速检测的要求，期望所建方法能为同行提供一定的参考。

［1］王吉祥，向文娟，王亚琴，等.GPC-GC/MS测定火腿中多种有机磷农药的残留［J］.食品研究与开发，2014，35（2）：77-80.

［2］廖林川，王玉瑾.法医毒物分析［M］.4版.北京：人民卫生出版社，2007：174-190.

［3］李晶玉，刘庆功.有机磷农药分析检测方法进展.［J］.安徽农学通报，2008，14（13）：184-185.

［4］冯翠玲，周永新，吴鹤松，等.血浆中有机磷农药的固相萃取-气相色谱法测定［J］.分析测试学报，2001，20（3）：78-80.

［5］赵维良，祝明，陈碧莲，等.PSA-LC-MS/MS法测定菊花药材中12种农药残留［J］.药物分析杂志，2014，34（3）：447-452.

［6］顿咪娜，刘莉，王永朝，等.固相萃取-气相色谱法测定饮用水中5种有机磷农药［J］.化学分析计量，2016，25（2）：12-15.

［7］王骏，胡梅，祝建华.毛细管气相色谱法测定十八种农药的有效成分［J］.山东轻工业学院学报，2006，20（3）：59-61.

Method of GC-MS in Detecting the Dichlorvos in the Biological Samples

XIE Run-fang1，LI Yu-wen2，XIE Ji-ming3，YANG Kai-run1，WANG Xin1，DONG Ji-pan1
1.School of Forensic Medicine，Kunming Medical University，Kunming，Yunnan Province，650500 China；2.Department of Endocrinology，Third People's Hospital of Yunnan Province，Kunming，Yunnan Province，650011 China；3.Department of Cardio-Thoracic Surgery，Third People's Hospital of Yunnan Province，Kunming，Yunnan Province，650011 China

Objective To establish a simple，rapid，accurate and reliable method of detecting the dichlorvos in the biological samples by GC-MS.Methods The biological samples were given extraction and isolation by chloroform-acetone（6：1）after they were mixed in the dry sand shape，the samples were given isolation and analysis by GC-MS，and were given qualitative analysis by the dichlorvos retention time in the total ion current chromatogram（TIC picture）and corresponding characteristic ion fragments in the mass spectrum picture.Results The method is easy to operate with small background interference，good isolation effect and rapid analysis speed，and the retention time of dichlorvos was 4.895min and the characteristic ion fragments（m/z）were 79，109 and 185.Conclusion The result of the method in detecting the dichlorvos in the biological samples in the forensic toxicological analysis is satisfactory.

Forensic toxicological analysis；GC-MS；Biological samples；Dichlorvos

R446.1

A

1672-5654（2016）09（a）-0105-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.25.105

2016-06-06）

云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项资金项目（2014FB013；2016FZ007）。

解润芳（1974-），女，云南玉溪人，硕士，讲师研究方向：毒药物分析。

解继明（1980-），男，云南玉溪人，硕士，主治医师，研究方向：心胸外科学，E-mail：1196531552@qq.com。