接触性生物检材DNA提取方法的比较

胡丽梅，张　瑞，邹军根（巴中市公安局物证鉴定所，四川 巴中 636099）



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接触性生物检材DNA提取方法的比较

胡丽梅，张瑞，邹军根
（巴中市公安局物证鉴定所，四川 巴中 636099）

关键词：法医遗传学；提取法；接触性生物检材；Chelex-100法；DNA IQTMSystem

在现代犯罪行为中，现场物证呈现多样化、微量化的趋势，接触性生物检材所占比例越来越大。接触性生物检材DNA模板量低，检验分型效果不稳定，随着法医DNA检验技术的不断提高、各种纯化试剂盒和检验设备的研发和应用，其检出率逐渐提高［1-2］。本研究采用Chelex-100法与DNA IQTMSystem（DC6700，美国Promega公司）分别对本实验室近年来实际检案中的接触性检材进行DNA提取，分析比较两种方法的提取效果，报道如下。

1　材料及方法

1.1材料

57份接触性生物检材中，瓶口、吸管类检材29份，手柄类工具检材17份，口罩、手套、衣物类检材11份，均来自本实验室日常检案。

1.2方法

29份瓶口、吸管类检材和17份手柄类工具检材，采用普通医用棉签干湿两步法进行擦拭提取；11份口罩、手套、衣物类检材，采用脱落细胞粘取器（公安部物证鉴定中心）粘取。以上检材均取适量后分为两份，分别采用Chelex-100法和DNA IQ纯化法提取DNA。

Chelex-100法：检材放入1.5mL的微量离心管，加入100 μL Chelex-100混悬液及3 μL蛋白酶K，56℃水浴30min，100℃煮沸8min，以离心半径5cm，13000r/min，离心4min，取上清液适量扩增。

DNA IQ纯化法：检材置于1.5mL的微量离心管中，加入DNA IQTMSystem裂解液300 μL及1 mol/L DTT 3μL，95℃煮沸30min，套管离心，去载体后加入3μL磁珠，混匀后室温放置10min，旋涡振荡后将微量离心管放在磁架上，小心吸去液体，然后用100μL洗液洗涤3次，室温下空气干燥10min，加入30μL的纯水，65℃ 5min进行洗脱，取洗脱液适量进行扩增。

使用Identifiler®Plus试剂盒（美国AB公司），10μL反应体系，在9700型PCR扩增仪（美国AB公司）上进行28次循环扩增，扩增产物在3130xl型遗传分析仪（美国AB公司）上进行电泳检测，采用GeneMapper ID v3.2软件进行数据分析。

2　结果与讨论

通过对上述检验图谱进行分析统计，DNA IQTMSystem检出率明显高于Chelex-100法，结果见表1。

表1　两种DNA提取方法效果比较　［份（%）］

瓶口、吸管类检材两种方法检出率均较高，尤其采用DNA IQ纯化法时更高，且峰型均衡、无杂峰，峰高基本在1 000 RFU以上，大多数为单一来源；采用DNA IQ纯化法检验结果＜9个基因座的案例中，有2例瓶口无瓶盖，2例吸管包装不当，可能致DNA降解严重。

手柄工具及口罩、手套、衣物类检材，Chelex-100法的检出率均不高；使用DNA IQ纯化法提取，检出率均有明显提高，峰高基本在1000～2000RFU，但多

Chelex-100法提取DNA，因其操作简便快捷、价格便宜、仪器设备要求低、在同一管中操作、检材损失低、相对不易污染而广泛用于常规检材的DNA提取［2-3］，但对微量、腐败、降解检材的DNA提取有一定的局限性，如本研究使用该方法处理手柄工具及口罩、手套、衣物类检材检出率较低，分别为35.29%、18.18%，明显低于DNA IQ纯化法的70.58%、72.72%。

DNA IQ纯化法提取DNA，在高浓度硫氰酸胍和盐酸胍等存在的条件下，核酸吸附到二氧化硅上，而在低盐条件下核酸被洗脱下来，运用该系统提取DNA或对Chelex-100法提取的DNA进行纯化，成功率得到普遍提高。当然该方法操作较繁琐，不适合大批量检材的提取，如采用自动化工作站进行提取［4］，更省时、简便。

参考文献：

［1］王彦涛，宋道江.M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的初步比较［J］.刑事技术，2013，（2）：53-54.

［2］杨电，张丽萍，刘超，等.Chelex-100和两种磁珠法提取接触DNA效果的比较［J］.刑事技术，2012，（1）：11-13.

［3］范生贵，王兴俊，王得椿.不同方法提取生物检材DNA的比较研究［J］.生物技术世界，2014，（4）：121.

［4］杨电，刘超，徐曲毅，等.DNA IQ磁珠法结合MaxwellTM16自动仪提取接触DNA［J］.刑事技术，2011，（3）：3-5.

（本文编辑：李成涛）

中图分类号：DF795.2

文献标志码：B

doi：10.3969/j.issn.1004-5619.2016.03.013

文章编号：1004-5619（2016）03-0215-02

作者简介：胡丽梅（1984—），女，主要从事法医物证学研究；E-mail：261031103@qq.com数检出混合图谱。

收稿日期：（2015-08-24）