HPLC法测定穿王消炎片中西瑞香素的含量

广西桂林市食品药品检验所（541002）张治军 覃晓

穿王消炎片为中药复方制剂，由穿心莲和了哥王两位药组成，收载于国家食品药品监督管理局国家标准WS-10487（ZD-0487）2002-2012Z，具有消炎解毒的功能，用于痰热咳喘，腹痛，以及急慢性扁桃腺炎、咽喉炎、肺炎等功能[1]。现行穿王消炎片质量标准中含量测定中仅有脱水穿心莲内酯含量测定，对处方中的了哥王质量尚无控制方法。了哥王的化学成分主要有香豆素类、木脂素类、黄酮类、蒽醌类等，西瑞香素是了哥王主要药效成分之一，也是毒性成分之一，具有较好的抗炎、抗肿瘤作用[2][3][4][5]。本文采用高效液相色谱法建立测定了哥王中主要成分西瑞香素的定量方法，能更好地控制产品的质量，报道如下。

1 仪器与药品

高效液相色谱仪(岛津2010，PDA检测器，日本岛津公司)，西瑞香素对照品（批号：111758-201101）购自中国食品药品检验研究院。穿王消炎片(批号141003、140815、131203，市售）。甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择 Agilent ZORBAX SBC18(4.6mm×250mm，5μm)柱，以甲醇—0.1%磷酸水溶液(40∶60)为流动相，西瑞香素获得较好的分离，流速：1mL·min-1，检测波长345nm西瑞香素，柱温35℃，进样量：20μl，理论板数按西瑞香素峰计算应不低于3000。在此条件下对照品、供试品在色谱中西瑞香素分离较好，阴性样品在相应保留时间无干扰(见附图)。

2.2 对照品溶液制备 精密称取西瑞香素对照品9.865mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，作为对照品储备溶液。取2mL，置10mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，混匀，既得。

2.3 供试品溶液制备 取穿王消炎片20片，除去包衣，研细，精密称取3.0g，置锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，超声45分钟，放冷至室温，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，过0.45μm柱，既得。

2.4 阴性样品溶液的制备 根据穿王消炎片处方比例，取缺了哥王药材的原料，按照制备工艺制备阴性颗粒。按“2.3”项下方法制备阴性样品溶液。

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系 分别精密吸取对照品储备液0.5、l.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置于10mL量瓶中，用甲醇分别稀释至刻度，配制成不同浓度对照品溶液。各吸取20μL进样，测定峰面积，以对照品峰面积为纵坐标，对照品质量浓度为横坐标进行线性回归，结果回归方程为Y＝4613X+599.3（r=0.9994），表明西瑞香素进样浓度在4.9325～49.3250μg·mL-1,范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5.2 精密度考察 将“2.5.1”项下混合对照品溶液连续进样5次，得西瑞香素峰面积RSD为1.23%，结果表明仪器精密度良好。

2.5.3 样品稳定性考察 取供试品溶液，每隔一段时间进样测定其西瑞香素峰面积，RSD分别为1.47%，结果表明样品提取液中西瑞香素在24h内稳定。

2.5.4 重复性试验 取同一批穿王消炎片（批号：141003），研细。精密称取3.0g，共6份，按“2.3”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件测定。得峰面积后，计算含量，结果西瑞香素含量分别为0.4532、0.4478、0.4715、0.4664、0.4626、0.4511mg·g-1，RSD＝2.06%；表明本方法重复性好。

附图 HPLC色谱图。

附表1 回收试验结果(n＝9)

附表2 穿王消炎片中西瑞香素含量测定结果

2.5.5 加样回收试验 取已知含量的同一批（批号：141003，含量0.1589mg·g-1）穿王消炎片6份，每份约3.0g，精密称定，分别精密加上述对照品储备液4、5、6ml，照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率，并求出其平均值和RSD，结果见附表1。

2.6 样品测定 取3个批号的穿王消炎片各2份，每份约3.0。照“2.3”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件进样测定。得峰面积后，计算含量，结果见附表2。

3 讨论

3.1 在样品提取过程中，考察了提取时间，分别超声提取了20min、30min、45min、60min、75min，发现提取30min不能提取完全，而提取45min、60min、75min所得含量基本一致，为了保证实验的提取充分和效率，我们在固定超声频率与功率的同时，选择采用提取45min。

3.2 3批含量测定结果发现，不同批号的样品含量差异较大，可能和了哥王原料的品质以及工艺稳定性有较大的关系，由于西瑞香素是了哥王主要药效成分之一，也是毒性成分之一，所以有必要对该产品中的了哥王的质量进行控制[6][7]。