蒲公英水提物对小鼠高脂性脂肪肝的治疗作用

刘馨宇，王　莹，王沙沙，郭　泽，张　冲，王　平，张雪梅

(延边大学农学院动物医学系，吉林延吉 133002)



蒲公英水提物对小鼠高脂性脂肪肝的治疗作用

刘馨宇，王莹，王沙沙，郭泽，张冲，王平，张雪梅*

(延边大学农学院动物医学系，吉林延吉 133002)

通过给小鼠灌胃高脂饮食，观察蒲公英水提物对小鼠高脂性脂肪肝的治疗作用。设立空白组，模型组，阳性组及蒲公英水提物高、中、低剂量组(10、5、2.5 g/kg)，给小鼠腹腔注射地塞米松的同时，灌胃高脂饮食建立小鼠急性脂肪肝模型，观察小鼠肝脏指数，肝脏病理组织学变化，测定血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)，肝组织中甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量。结果与模型组相比，蒲公英水提物高、中剂量组可以显著或极显著降低脂肪肝小鼠的肝脏指数(P<0.05或P<0.01)，降低血清中ALT和AST活性(P<0.05或P<0.01)，降低肝组织中TG和TC含量(P<0.05或P<0.01)；病理组织学观察蒲公英水提物高、中剂量组肝组织脂肪变性明显减轻。结果表明，蒲公英水提物对高脂饮食引起的小鼠高脂性脂肪肝有一定的治疗作用。

蒲公英水提物；小鼠；高脂性脂肪肝；治疗作用

脂肪性肝病是常见的弥漫性肝病之一，主要是肝细胞摄取的脂肪增加而氧化减少所致的肝细胞内蓄积脂肪过多的病理状态，通常可分为酒精性脂肪性肝病(Alcoholic fatty liver disease,AFLD)和非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)。非酒精性脂肪肝是一种无过量饮酒史，而以肝实质细胞脂肪贮积和脂肪变性为特征的临床病理综合征[1]。目前尚缺乏较为理想的方法和药物，因此，寻找高效廉价的防治药物越来越受到关注。

蒲公英(Dandelion)为菊科药食兼用植物。临床常用于治疗上呼吸道感染、眼结膜炎、流行性腮腺炎、胃炎、痢疾、肝炎、胆囊炎、急性阑尾炎、泌尿系统感染、盆腔炎、痈疖疔疮、淋巴结炎等[2]。研究表明，蒲公英具有抗风湿、消肿散结、保肝利胆的功效。本试验旨在研究蒲公英水提物对高脂性脂肪肝的治疗作用。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物昆明小鼠，雄性，体重20 g±5 g，延边大学实验动物中心提供。

1.1.2药物及主要试剂蒲公英全草,安国市神禾饮片有限公司；辛伐他汀,山西鑫煜制药有限公司，(批号20150409)；地塞米松磷酸钠注射液,贵州天地药业有限责任公司，(批号15032401A，规格1 mL∶5 mg)；自制猪油，花生油；胆固醇,上海源聚生物科技有限公司，(批号070603)；牛胆盐,北京奥博星生物技术有限公司生产，(批号20090415)；ALT试剂盒、AST试剂盒、TG试剂盒、TC试剂盒,南京建成生物工程研究所。

1.1.3蒲公英水提物的制备取干燥蒲公英100 g，加入 5 L 蒸馏水浸泡过夜，加热回流，过滤，重复2次，合并滤液，浓缩至1 g/mL，4 ℃ 冰箱保存[3]。

1.1.4高脂饮食的制备20%猪油，7%胆固醇，1%牛胆盐以及豆油的制成糊状乳液[4]。

1.2方法

1.2.1小鼠脂肪肝模型建立、分组及给药参照文献[5-6]，将小鼠36只，适应性饲养1周，随机分为6组，每组6只，设空白组、模型组、阳性组，蒲公英水提物高、中、低剂量组。除正常组外，模型组、阳性组、蒲公英水提物高、中、低剂量组小鼠连续 7 d灌胃高脂乳剂20 mL/kg，同时前4 d按20 mL/kg腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液。7 d后，蒲公英水提物高、中、低剂量组分别灌胃10、5、2.5 g/kg蒲公英水提物，阳性组灌胃辛伐他汀10 mg/kg，空白组、模型组给予等体积的生理盐水，连续7 d。

1.2.2各指标的测定

1.2.2.1血清中ALT和AST测定末次给药结束，禁食12 h，称重，眼球取血分离血清，按照试剂盒提供的方法测定血清中ALT和AST的含量。

1.2.2.2肝脏指数测定剥离肝脏，称肝脏湿重，肝脏指数=肝脏湿重/小鼠体重×100%

1.2.2.3肝组织中TC和TG测定取部分肝组织，制备100 g/L 肝匀浆，离心取上清液，按照试剂盒提供的方法，测定肝匀浆上清液中TG和TC的含量。

1.2.2.4病理组织学观察另取部分肝组织，浸于100 g/L 中性甲醛溶液固定，做常规石蜡切片，HE染色，于光镜下观察肝脏组织结构。

2　结果

2.1蒲公英水提物对脂肪肝小鼠血清中AST和ALT的影响

如表1所示,与空白组相比，模型组小鼠血清AST和ALT含量极显著升高(P<0.01)。与模型组相比，蒲公英水提物各剂量组均能明显降低其含量，高剂量组具有极显著差异(P<0.01)，中剂量组具有显著差异(P<0.05)，低剂量组无显著性差异。与阳性组相比，低剂量组具有极显著差异(P<0.01)，中剂量组具有极显著差异(P<0.01)，高剂量组无显著性差异。结果表明,蒲公英水提物能降低脂肪肝小鼠血清中AST和ALT的含量，且呈一定量效关系。

表1　蒲公英水提取对脂肪肝小鼠血清中AST和ALT的影响

注：同列中标有相同大写字母的均数间差异极显著(P<0.01)；同列中标有相同小写字母的均数间差异显著(P<0.05)。

Note：Values with same capital letters in a column mean extremely significant difference (P<0.01),and with same small letters mean significant different (P<0.05).

2.2蒲公英水提物对脂肪肝小鼠肝脏指数的影响

由表2可知,与空白组相比，模型组小鼠肝脏指数具有极显著差异(P<0.01)。与模型组相比，蒲公英水提物各剂量组均能明显降低肝脏指数，高剂量组具有极显著差异(P<0.01)，中剂量组具有显著差异(P<0.05)，低剂量组无显著性差异。与阳性组相比，低剂量组具有极显著差异(P<0.01)，中剂量组具有显著差异(P<0.05)，高剂量组无显著性差异。结果表明,蒲公英水提物能降低脂肪肝小鼠肝脏指数，且呈一定量效关系。

表2　蒲公英水提物对脂肪肝小鼠肝脏指数的影响

注：同列中标有相同大写字母的均数间差异极显著(P<0.01)；同列中标有相同小写字母的均数间差异显著(P<0.05)。

Note：Values with same capital letters in a column mean extremely significant difference (P<0.01), and with same small letters mean significant different (P<0.05).

2.3蒲公英水提物对脂肪肝小鼠肝组织中TC和TG的影响

如表3所示,与空白组相比，模型组小鼠肝组织中TC和TG含量极显著升高(P<0.01)。与模型组相比，蒲公英水提物各剂量组均能明显降低其含量，高剂量组具有极显著差异(P<0.01)，中剂量组具有极显著差异(P<0.01)，低剂量组具有显著差异(P<0.05)。与阳性组相比，小鼠肝组织中TC含量，低剂量组具有极显著差异(P<0.01)，中剂量组具有极显著差异(P<0.01)，高剂量组具有显著差异(P<0.05)；小鼠肝组织中TG含量，低剂量组具有极显著差异(P<0.01)，中剂量组具有极显著差异(P<0.01)，高剂量组具有极显著差异(P<0.01)。结果表明,蒲公英水提物能降低脂肪肝小鼠肝脏中TC和TG的含量，且呈一定量效关系。

2.4病理组织学观察

光镜下观察，空白组小鼠肝组织结构无明显异常，肝小叶清楚，肝细胞以中央静脉为中心成放射状，未见脂肪空泡(图1A)。模型组小鼠肝组织可见中央静脉结构不规则，其周围有多量弥漫性脂肪空泡，出现脂肪变性(图1B)。阳性组小鼠(图1C)中央静脉结构无明显异常。蒲公英水提物高(图1D)、中(图1E)、低(图1F)剂量组与模型组相比，脂肪变性的程度有不同的改善，其中以高、中剂量组较明显。通过病理组织学观察可知，脂肪肝小鼠肝组织中脂肪空泡明显减少，蒲公英水提物能减轻脂肪肝小鼠肝组织脂肪变性程度。

3　讨论

肝脏是中性脂肪(甘油三酯)合成、转运、利用的主要器官，而不是储存脂肪的场所。高脂血症是导致脂肪肝的重要因素之一，长期大量进食高脂类食物，小肠生成和吸收的游离脂肪酸和甘油增加，进入血液的脂肪乳糜微粒增多，肝脏摄取大量脂肪酸并合成脂肪，当脂肪合成的量超过肝脏的转化能力时，会导致脂肪在肝脏蓄积，形成脂肪肝，继而可发生肝组织纤维化，甚至肝硬化。

近年来，国内外对蒲公英的药理作用进行了大量研究[7-8]。研究表明，蒲公英有利尿、降脂、缓泻之力，苦寒之品又能减少机体对脂类的吸收消化，蒲公英组成的复方可降低高脂血症患者血中TC和TG的量[9]。

表3　蒲公英水提物对脂肪肝小鼠肝组织中TC和TG的影响

注：同列中标有相同大写字母的均数间差异极显著(P<0.01)；同列中标有相同小写字母的均数间差异显著(P<0.05)。

Note：Values with same capital letters in a column mean extremely significant difference(P<0.01),and with same small letters mean significant different(P<0.05).

A.空白组；B.模型组；C.阳性组；D.高剂量组；E.中剂量组；F.低剂量组

A.Control group;B.Model group;C.Positive group;D.High-dose group;E.Mid-dose group;F.Low-dose group

图1小鼠肝组织病理学变化(100×)

Fig.1Pathological lesion of liver tissue in mice (100×)

脂肪肝早期无特异性自觉症状，生化检测时ALT水平升高是无症状性脂肪肝的主要表现之一，AST活性增高提示肝细胞膜通透性改变或坏死，可以推测脂肪肝患者存在不同程度肝细胞损伤，而TC和TG在生化检测中也存在一定的意义[10]。

本试验结果表明，蒲公英水提物能降低脂肪肝小鼠肝脏指数，能降低小鼠血清中AST和ALT、肝组织中TC和TG的含量，提示蒲公英水提物对脂肪肝小鼠肝脏有一定的治疗作用。此外，通过病理组织学观察可知，脂肪肝小鼠肝组织中脂肪空泡明显减少，表明蒲公英水提物能改善高脂性脂肪肝小鼠肝脏的脂肪变性程度，并在一定程度上改善脂肪肝的组织学变化。

综上所述，蒲公英通过调节血脂、肝脂质，对小鼠脂肪肝起到保护作用，为高脂性脂肪肝的治疗提供了理论依据。

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[2]林云,江林,蒋健,等.蒲公英的药理作用研究进展[J].中国现代中药,2011,13(8):42-47.

[3]刘婧陶,韩普,刘利本,等.蒲公英甾醇粗提物抗炎作用研究[J].动物医学进展,2012,33(12):104-106.

[4]马方.小鼠高脂性脂肪肝模型的建立及盐酸千金藤碱对其治疗作用的研究[D].河南郑州：郑州大学,2011.

[5]Sreekumar R,Rosado B,Rasmussen D,et al.Hepaticgene expression in histologically progressive nonalcoholic steatohepat it is[J].Hepatology,2003,38(1): 244-251.

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[7]屠国昌.蒲公英化学成分、药理作用和临床应用[J].海峡药学,2012,24(5):33-35.

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Therapeutic Effect of Dandelion Extract on Hyperlipidemic Fatty Liver in Mice

(Department of Animal Medicine,Agricultural College of Yanbian University,Yanji,Jilin,133002,China)

LIU Xin-yu,WANG Ying,WANG Sha-sha,GUO Ze,ZHANG Chong,WANG Ping,ZHANG Xue-mei

The therapeutic effect of dandelion extract on hyperlipidemic fatty liver in mice was observed by giving high-fat diet.The mice were divided into control group,model group,positive group and dandelion extract high,middle and low dose groups (10, 5 and 2.5 g/kg). Acute fatty liver mouse model was produced by intraperitoneally injecting dexamethasone and feeding high fat diet.The liver index, the liver histological change,ALT and AST in serum,TG and TC in liver tissue were measured.Compared with model group,dandelion extract high and middle dose groups could significantly decrease liver index of mice (P<0.05 orP<0.01), decrease ALT and AST levels of serum (P<0.05 orP<0.01) and TG and TC content of the liver tissue(P<0.05 orP<0.01).The hepatic steatosis in dandelion extract high and middle dose groups was significantly reduced by pathological examination.The results showed that dandelion extract has certain therapeutic effect on fatty liver caused by high-fat diet in mice.

Dandelion extract;mice;hyperlipidemic fatty liver;therapeutic effect

2016-03-22

国家自然科学基金项目(31260622，31660727)；吉林省科技厅重点科技攻关项目(20160204016NY)

刘馨宇(1992-)，女，吉林白山人，硕士研究生，主要从事兽医药理学与毒理学研究。*通讯作者

S853.74

A

1007-5038(2016)09-0067-04