AKTl基因多态性与阿尔茨海默病的相关性研究

陈忠伟　赵和丹　王金龙　黄通　田华伟　王长义　刘盛元

[摘要]目的本研究旨在探讨胰岛素信号转导通路相关基因AKTl多态性与阿尔茨海默病的关系，以期深入了解AKTl基因多态对阿尔茨海默病易感性的影响。方法以阿尔茨海默病患者为病例组研究对象，同时选取年龄及性别匹配的健康体检者为对照组研究对象。提取基因组DNA，应用PCR方法对AKTl基因6个位点进行基因测序。结果在AKTl基因位点rs2498786上，阿尔茨海默病组与对照组之间存在统计学差异（P<0.05）。结论AKT基因位点rs2498786的突变型等位基因C可能增加阿尔茨海默病的发病风险。AKT基因可能是阿尔茨海默病的易感基因，AKT基因位点rs2498786突变可能增加阿尔茨海默病的发病率，其他所研究的AKT基因位点虽与阿尔茨海默病无明显相关性，但是不排除是其微效基因，值得我们进一步研究。

[关键词]阿尔茨海默病；AKTl；基因多态性

[中图分类号]R749.16

[文献标识码]A

[文章编号]2095-0616（2016）03-37-04

阿尔茨海默病（Alzheimers disease，AD）又称老年痴呆症，是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病…。研究发现，载脂蛋白E（ApoE）基因、血管转换酶基因（ace）、载脂蛋白c1基因（apocl）、雌激素受体基因等都与阿尔茨海默病发病有一定关系，但并不能完全解释阿尔茨海默病的发病原因。因此，寻找新的阿尔茨海默病风险因子至关重要。研究发现，2型糖尿病患者中，阿尔茨海默病的发病率高于正常人群，与2型糖尿病发病有关的胰岛素P13K-AKT信号转导通路在阿尔茨海默病的病变过程中的作用值得我们进一步的研究。本研究目的探讨胰岛素P13K-AKT信号转导通路相关基因AKT多态性与阿尔茨海默病的关系，以期深入了解AKT基因多态对阿尔茨海默病易感性的影响。

1.资料与方法

1.1一般资料

将2002年1月～2013年12月我院纳入管理的阿尔茨海默病患者为病例组研究对象，病例组入选标准：所有患者符合美国神经病学、语言障碍及卒中一阿尔茨海默病和相关疾病学会（NINCDS-ADRDA）的诊断标准，所有患者均由两位神经内科医师做出诊断。同时选取年龄及性别匹配的健康体检者为对照组研究对象，对对照组研究对象进行MMSE（简易精神状态量表）、ADL（日常活动量表）、CDR（临床痴呆评定量表）的评定，其结果必须均为正常，同时采用汉密尔顿抑郁量表排除抑郁症。两组研究对象均要排除高血压、糖尿病、精神病史、酒精或药物滥用、肿瘤及自身免疫性疾病。两组研究对象均为汉族人群，阿尔茨海默病患者本人或家属对本研究签署书面知情同意书，对照组本人签署书面知情同意书。

本研究中，阿尔茨海默病组患者共231例，男113例，女118例，平均年龄（79.6±9.9）岁，Apoε4（+）者67例，平均MMSE评分（18.6±3.9），健康对照组患者共231例，男113例，女118例，平均年龄（78.5±8.4）岁，Apoε4（+）者39例，平均MMSE评分（28.3±2.7），两组患者平均年龄、性别构成、文化程度差别均没有统计学意义（P>0.05），其结果具有可比性。阿尔茨海默病组Apoε4（+）者比例高于对照组，平均MMSE评分低于对照组。

1.2研究方法

1.2.1DNA提取抽取所有研究对象静脉血并提取基因组DNA，血液标本储存于-70℃待用，并进行DNA含量及纯度检测。

1.2.2基因分型通过NCBI-SNP和HapMap数据库检索，分析AKT基因上的tagSNPs数据，应用PCR测序的方法检测上述入选对象胰岛素信号转导通路相关基因AKT多态性基因型。

1.3统计学分析

采用SPSS 18.0统计学软件进行数据的处理，运用Hardy-Weinberg平衡法则进行遗传平衡吻合度检验；x²检验分析各组间基因型及等位基因的频数分布差异；计量资料（x±s）的形式表示，采用t检验进行计量资料的比较，以P<0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 rs2498786基因位点与阿尔兹海默病的相关性分析

rs2498786为G/C多态性，包括G/G、G/C、C/C三种基因型。本研究中，AD组与对照组三种基因型分布差异有统计学意义（P<0.05），等位基因G、c频数分布在两组之间分布差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2rs74090038基因位点与阿尔兹海默病的相关性分析

rs74090038为C/F多态性，包括C/C、C/T、T/T三种基因型。本研究中，AD组与对照组三种基因型分布差异没有统计学意义（P>0.05），等位基因C、T频数分布在两组之间分布差异没有统计学意义（P>0.05）。见表2。

2.3rs2494750基因位点与阿尔兹海默病的相关性分析

rs2494750为C/G多态性，包括C/C、C/G、G/G三种基因型。本研究中，AD组与对照组三种基因型分布差异没有统计学意义（P>0.05），等位基因c、G频数分布在两组之间分布差异没有统计学意义（P>0.05）。见表3。

2.4 rs2494751基因位点与阿尔兹海默病的相关性分析

rs2494751为A/G多态性，包括A/A、A/G、G/G三种基因型。本研究中，AD组与对照组三种基因型分布差异没有统计学意义（P>0.05），等位基因A、G频数分布在两组之间分布差异没有统计学意义（P>0.05）。见表4。

2.5 rs5811155基因位点与阿尔兹海默病的相关性分析

rs5811155为T/-多态性，包括T/T、T/-、-/-三种基因型。本研究中，AD组与对照组三种基因型分布差异没有统计学意义（P>0.05），等位基因T频数分布在两组之间分布差异没有统计学意义（P>0.05）。见表5。

2.6 rs2494752基因位点与阿尔兹海默病的相关性分析

rs2494752为G/A多态性，包括G/G、G/A、A/A三种基因型。本研究中，AD组与对照组三种基因型分布差异没有统计学意义（P>0.05），等位基因G、A频数分布在两组之间分布差异没有统计学意义（P>0.05），因此，rs2494752的基因多态性可能与阿尔兹海默病的发病无关联。见表6。

3.讨论

研究表明，2型糖尿病患者中阿尔茨海默病的发病率高于正常人群，并且有研究表明与2型糖尿病发病密切相关的胰岛素P13K-AKT信号转导通路调控功能在阿尔茨海默病的病理生理过程中发挥重要作用。研究称，阿尔茨海默病患者体内胰岛素P13K-AKT信号转导通路功能失调，导致底物糖原合成酶激酶一3（GSK-3）无法降解及mTORCl无法激活，而GSK3的增多及mTORCl失活则可引起β一淀粉样蛋白过多积聚及tau蛋白异常磷酸化，后二者与阿尔茨海默病最主要的两个病理表现老年斑及神经纤维缠结的发生密切相关。虽然有证据表明胰岛素P13K-AKT信号转导通路与AD发生有重要的关系，但是未见从分子流行病学角度探讨胰岛素P13K-AKT信号转导通路相关基因多态性与阿尔茨海默病关系的相关报道。

本研究选择阿尔茨海默病患者181例，同时选取健康对照组217例，筛选AKT基因上6个位点，分别为：rs2498786、rs74090038、rs2494750、rs2494751、rs5811155、rs2494752，研究结果显示，在AKT基因位点rs2498786上，阿尔茨海默病组与对照组存在统计学差异（P<0.05）。统计学分析之后，rs2498786的突变型等位基因c可能增加阿尔茨海默病的风险。而rs74090038、rs2494750、rs2494751、rs5811155、rs2494752这些AKT基因位点虽不是阿尔茨海默病的易感基因位点，但不能排除其是众多易感基因位点中一个微效基因位点，各种微效基因叠加后最终导致阿尔茨海默病的发生，而作为一个单独微效基因，其不足以单独通过自身的影响导致阿尔茨海默病发病，因而很难存在显著的统计学意义。