胸腺素β4在结肠息肉和结肠癌中表达及其意义

黄志盛，陈业倩，刘敏健

1.广州市番禺区沙湾人民医院消化科，广东广州 511483；2.广州市番禺区市桥医院内科，广东广州 511400；3.广州市番禺区何贤纪念医院手术室，广东广州 511400

*论著*

胸腺素β4在结肠息肉和结肠癌中表达及其意义

黄志盛1，陈业倩2，刘敏健3

1.广州市番禺区沙湾人民医院消化科，广东广州 511483；2.广州市番禺区市桥医院内科，广东广州 511400；3.广州市番禺区何贤纪念医院手术室，广东广州 511400

目的 探讨胸腺素β4在结肠息肉和结肠癌中表达及其意义。方法 选取2015年7月—2016年7月在该院治疗的结肠息肉和结肠癌患者67例，根据患病类型分为结肠息肉组28例，结肠癌组28例，结肠息肉+结肠癌组11例。分别取标本（手术切除或息肉摘除）和距切除标本15 cm以上正常肠粘膜组织，提取其mRNA行RT-PCR，通过凝胶扫描仪进行各电泳条带和光量子强度分析，测定各标本中胸腺素β4的相对含量；抽取患者血清，用胸腺素β4酶联免疫吸附试剂盒检测患者血清中胸腺素β4在息肉和肠癌切除术前、术后1月及术后 6个月的表达情况。 结果 胸腺素β4的mRNA表达 肠息肉、肠癌患者中，均有胸腺素β4mRNA的表达；且相对其正常肠组织中含量[结肠息肉组（0.41±0.17）、结肠癌组（0.50±0.14）]，其病理标本中mRNA均有高表达[结肠息肉组（0.59±0.22）、结肠癌组（0.75±0.23）]，P＜0.05，差异有统计学意义；结肠息肉组切除术前、术后1个月及术后6个月，胸腺素β4的表达，P＞0.05，差异无统计学意义；结肠癌组和结肠息肉+结肠癌组切除术前、术后1个月血清胸腺素β4的表达有显著变化，P＜0.05，差异有统计学意义，而术前、术后6月则无显著变化，P＞0.05，差异无统计学意义。 结论 胸腺素 β4在息肉及肠组织中均有高表达，可作为观察肠癌疗效的参考指标。

胸腺素β4；结肠息肉；结肠癌

胸腺素β4分子量约5KD，含有43个氨基酸，大部分没有折叠结构，能与多种分子结合，因此，其功能具有多样性[1]。国外学者Kaur等[2]研究发现，胸腺素β4与炎症反应、创伤愈合、肿瘤转移、血管再生、细胞调亡等密切相关; Sonia等学者[3]更证实胸腺素β4在结肠息肉和结肠癌中均有表达。目前国内对胸腺素β4在结肠息肉和结肠癌中表达的研究极少，该文选取2015年7月—2016年7月在该院治疗的结肠息肉和结肠癌患者67例，用Trizol法，分别提取肠息肉、肠癌患者病变组织及距该组织15 cm以上正常肠组织，通过RT-PCR技术及分光光度计测定各标本的mRNA相对含量；采用胸腺素β4酶联免疫吸附试剂盒（K9520,Immunodiagnostik AG，Bensheim，German)，检测结肠息肉和结肠癌患者切除术前、术后1个月及术后6个月血清中的胸腺素β4的表达，探讨其表达意义。

1 资料与方法

1.1 入选标准

选取2015年7月—2016年7月在该院治疗的结肠息肉和结肠癌患者。年龄＞18岁，病理诊断为炎性息肉、增生性息肉、腺瘤及其伴轻、中度非典型增生归为结肠息肉，病理诊断为腺癌、黏液癌、未分化癌和腺瘤伴重度非典型归为结肠癌。

1.2 排除标准

①年龄＜18岁的患者；②除结肠息肉和结肠癌外，尚患有其它肿瘤、创伤、炎症等疾病的患者；③随访失联的患者。

1.3 分组

①结肠息肉组28例，其中男15例，女13例，年龄22～84岁；②结肠癌组28例，其中男17例，女11例，年龄42～74岁；③结肠息肉+结肠癌组11例，其中男6例，女5例，年龄41～82岁。3组患者一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.4 标本采集

手术切除或息肉摘除标本和正常肠组织标本置于-80℃冰箱保存。

1.5 血样采集

入选患者均于清晨采取空腹静脉血3 mL，于2 h内以3 000 r/mim离心15 min，分离血清，置于-80℃冰箱保存待测。

1.6 检测方法

1.6.1 mRNA的提取 切除或摘除的各标本放入研钵研磨，按照Trizol试剂盒的方法，取标本加入1 mL的Trizol，室温下孵育5 min以使细胞蛋白充分裂解，后将裂解液移至1.5 mL EP管中；再每个EP管中加入0.2 mL氯仿，盖紧管盖，用力振荡10～15 s，使氯仿与Trizol充分融合，再在室温下反应5 min，随后以12 000 g速度下离心15 min，将上层水相移入新的EP管中，加入0.5 mL的异丙醇，在充分振荡后室温下孵育10 min，再次在4℃环境下以12 000 g速度离心15 min，取出EP管，弃去上清，留下管的白色沉淀，再加入75%乙醇至EP管中，每管加量700 l，用移液器小心将沉淀吹起，而后在4℃环境下以7 500 g速度离心5 min，离心后弃去上清，将EP管放置在室温下干燥约15 min，最后加入适量的DEPC水[4-5]。

1.6.2 引物 胸腺素 β4：5’-ACAAACCCGATATGGCTGAG-3’；内对照GAPDH：5’-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’[6]。

1.6.3 逆转录合成cDNA、PCR扩增及相对定量分析 提取总RNA后，经凝胶电泳鉴定其质量，分光光度计测定RNA含量；用TAKAPa RT逆转录试剂盒将RNA逆转录成cDNA，用7 500 Fast PCR仪进行扩增反应，取PCR产物在普通琼脂糖凝胶电泳后，溴化乙啶染色，通过凝胶扫描仪进行DNA电泳条带和光量子强度分析，将胸腺素β4与GAPDH比值作为胸腺素β4表达水平的参数，对胸腺素β4的PCR产物进行相对定量。

1.6.4 血清中胸腺素β4浓度测定 采用胸腺素β4酶联免疫吸附试剂盒（K9520,Immunodiagnostik AG，Bensheim，German)进行检测。

1.7 统计方法

用SPSS 17.0统计学软件进行处理，胸腺素β4相对表达量用（±s）表示，两组之间的差异采用t检验，计量资料以中位数和四分位数间距表示，组内资料比较用Wilcoxon检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

肠息肉、肠癌患者中，均有胸腺素β4mRNA的表达；且相对其正常肠组织中含量[肠息肉组（0.41±0.17）、肠癌组（0.50±0.14），其病理标本中mRNA均有高表达[肠息肉组（0.59±0.22）]、肠癌组（0.75±0.23）]，P＜0.05，差异有统计学意义，如表1。

表1 肠息肉组及肠癌组中患者胸腺素β4的mRNA含量比较（±s）

表1 肠息肉组及肠癌组中患者胸腺素β4的mRNA含量比较（±s）

组别 病理标本 距病理标本15 cm以上正常肠组织 t P肠息肉组肠癌组0.59±0.22 0.75±0.23 0.41±0.17 0.50±0.14 4.38 6.79＜0.05＜0.05

息肉组切除术前、术后1个月及术后6个月，胸腺素β4的表达无显著变化，差异无统计学意义（P＞0.05）；肠癌和息肉肠癌组切除术前、术后1个月胸腺素β4的表达有显著变化（P＜0.05），而术前、术后6个月则无显著变化，差异无统计学意义（P＞0.05），如表2。

表2 息肉组、肠癌组和息肉肠癌组切除术前、术后1个月及术后6个月患者血清胸腺素β4的比较

3 讨论

随着人们生活习惯的改变，肠癌的发生率及死亡率每年呈现递增的趋势，据估计，2014年美国预计将新增136830例，因肠癌死亡50370例，位居恶性肿瘤死亡人数的第3位，成为第3大最常见的恶性肿瘤[6]，因此预防肠癌的发生、发展刻不容缓。大肠癌的病因尚未完全清楚，一般认为，大部分的大肠癌起源于肠息肉和腺瘤[7-8],因此预防大肠癌的发生发展，应从肠息肉和腺瘤开始。

在该实验中，胸腺素β4的mRNA表达 肠息肉、肠癌患者中，均有胸腺素β4mRNA的表达；且相对其正常肠组织中含量，其病理标本中mRNA均有高表达，差异有统计学意义，P＜0.05，提示胸腺素β4的mRNA高表达与肠息肉和肠癌的发作相关；结肠息肉组切除术前、术后1个月及术后6个月，胸腺素β4的表达无显著变化，P＞0.05差异无统计学意义，考虑息肉较小，其切除对胸腺素β4的表达未发作显著变化；结肠癌组和结肠息肉+结肠癌组切除术前、术后1个月血清胸腺素β4的表达有显著变化，P＜0.05，差异有统计学意义，而术前、术后6个月则差异无统计学意义（P＞0.05），考虑肠癌病灶切除1个月后，其胸腺素β4的mRNA表达减少，以致血清中胸腺素β4的表达也相应减少，切除6个月后，部分患者癌症复发，以致其血清中胸腺素β4的表达也相应增大，由于病例较少，展望以后通过更多病例说明这一点。周瑞等[9]、冯君兰等[10]研究为该研究提供了理论依据。

综上所述，胸腺素β4在息肉及肠组织中均有高表达，可作为观察肠癌疗效的参考指标。

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[1]胡晨姣.胸腺素β4对重症胰腺炎大鼠急性肝脏损伤的保护作用[J].现代实用医学，2015，27（5）：585-586.

[2]Kaur H,Mutus B,Platelet function and thymosin beta4[J].Biol Chem，2012，393（7）:595-598.

[3]Sonia,Nemolato,Tiziana Cabras,Angelo Restivo,et al.Thymosin ss4 expression in colorectal polyps and adenomas. Clinics，2013，68(9):1220-1224.

[4]田媛，王玉冰，谭莉莉，等.Tβ4对非酒精性脂肪肝患者肝脏功能的评估价值[J].胃肠病学和肝病学杂志，2014，23（4）：432-434.

[5]Rebecca Siegel,Carol DeSantis.Ahmedin Jemal Colorectal Cancer Statistics[J].CA Caner J Clin，2014（64）:104-117.

[6]Nagengast FM.Carcinogenesis of colorectal cancer[J].Vet Q，1998，20(3):95-96.

[7]李鹏.长链非编码RNA在人结肠癌中的异常表达[D].北京：中国人民解放军总医院，2015.

[8]陈琼，刘志才，程兰平，等．2003-2007年中国结直肠癌发病与死亡分析[J].中国肿瘤，2012，21(3):179-182.

[9]周瑞，袁宏银，熊斌.大肠癌组织中胸腺素β4基因表达及其临床意义[J].肿瘤防治研究，2005，32（9）:545-548.

[10]冯君兰，汪昱.血液 miRNA检测在结直肠癌诊断、预后及化疗疗效评估中的应用进展[J].山东医药，2015（11）: 98-100.

Expression and Significance of Thymosin β4 in Colon Polyps and Colon Cancer

HUANG Zhi-sheng1，CHEN Ye-qian2，LIU Min-jian3
1.Digestive Department of Guangzhou City，People's Hospital of Panyu District Bay，Guangzhou，Guangdong Province，511483 China；2.Department of Medicine，Guangzhou Panyu City Bridge Hospital，Guangzhou，Guangdong Province，511400 China；3.Operation Room,Panyu District Memorial Hospital,Guangzhou，Guangzhou，Guangdong Province,511400 China

Objective To investigate the expression and significance of thymosin β4 in colon polyps and colon cancer.Methods 67 cases of colon polyps and colon cancer patients treated in our hospital from July 2015 to July 2016 were selected.According to the type of disease,28 cases were divided into cases of colonic polyps,28 cases of colon cancer group,11 cases of colon polyps and colon cancer group.The specimens were (resection or polyp)and from resected specimens of 15 cm above the normal intestinal mucosa,extracted the mRNA useing RT-PCR analysis the electrophoretic bands and photon intensity through the gel scanner,the relative content of each sample in the determination of Serum thymosin β4.The expression of thymosin β4 in patients with polyps and colorectal cancer before、after 1 month and after 6 months of operation was detected by using the serum of patients with thymus peptide and 4 enzyme linked immunosorbent assay.Results mRNA expression of thymosin β4 of intestinal polyps,colorectal cancer patients,all have the expression of the mRNA of thymosin β4,The expression of mRNA in the pathological specimen was higher[colonic polyps（0.59±0.22）、colon cancer group（0.75±0.23)]than those of normal intestinal tissue content[(colonic polyps（0.41±0.17）、colon cancer group（0.50±0.14 ）],P＜0.05,the difference was statistically significant;the difference between the expression of thymosin β4 in before、after 1months and after 6 months in the colonic polyps was no statistically significant;the expression of thymosin β4 before the operation in the colon cancer group and colon polyps and colon cancer group was higher than those of after the operation 1 month,P＞0.05,the difference was statistically significant;difference between the expression of thymosin β4 before the operation and after the operation 6 months was no statistically significant,P＞0.05.Conclusion Thymosin β4 was highly expressed in the polyp and intestinal tissue,and serum thymic peptide 4 could be used as a reference index for the observation of the curative effect of colorectal cancer.

Thymosin β4;Colonic polyp;Colon cancer

R735.34

A doi 10.11966/j.issn.2095-994X.2016.02.04.01

2016-10-15；

2016-11-12

广州市番禺区科技工业商务和信息化局，2015年科技计划医药卫生预立项项目（2015-Z03-45）。

黄志盛（1979.10-），男，广东番禺人，硕士，主治医师，研究方向：胸腺素β4在肠息肉和肠癌的表达意义。