胆舒滴丸质量标准研究

周维，胡昌江，冯健

(四川新绿色药业科技发展股份有限公司，四川 彭州 611930)

胆舒滴丸质量标准研究

周维，胡昌江*，冯健

(四川新绿色药业科技发展股份有限公司，四川 彭州 611930)

目的：建立胆舒滴丸的质量标准。方法：采用薄层色谱法对胆舒滴丸中的薄荷脑进行定性研究；采用气相色谱法对胆舒滴丸进行特征图谱研究及含量测定。结果：薄层色谱鉴别特征明显，专属性强；胆舒滴丸不同批次的气相色谱图均有8个特征峰，均具有较好的分离度；薄荷脑在0.104～0.780 μg呈现良好的线性关系，回归方程为Y=1 827.0X-2×10-13，相关系数为r=1.000 0。结论：所建立的质量标准能有效地对胆舒滴丸进行鉴别，并准确地进行含量测定。

胆舒滴丸；薄荷脑；特征图谱；质量标准；含量测定

胆舒滴丸是以薄荷素油为原料制成的中药制剂，用于慢性结石性胆囊炎、慢性胆囊炎及胆结石肝胆郁结、湿热胃滞证[1]。薄荷素油主要成分为L-薄荷脑、(-)-薄荷酮、胡薄荷酮、桉油精、异薄荷酮等[2]。为了有效地控制胆舒滴丸的质量，本文建立薄层色谱法对其进行定性鉴别，气相色谱法考察其特征图谱及含量。通过方法学考察得出，所建方法专属性强、灵敏度高、方法稳定，可用于胆舒滴丸的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

薄层自动成像仪(TLC Visualizer，CAMAG)；半自动点样仪(linamat5，CAMAG)；万分之一天平(BS110S，赛多利斯)；超声清洗器(KQ-250B型，昆山超声电子有限公司)；气相色谱仪(78090B，安捷伦)；色谱柱(安捷伦)；

1.2 试药

桉油精、薄荷脑、胡薄荷酮、(-)-薄荷酮(中国食品药品检定研究院，批号分别为110788-201105，110728-200506，111706-201205，111705-201105)；胆舒滴丸(四川新绿色药业科技发展股份有限公司，批号分别为1312001，312002，1312003，140501，140502，140503，150401，150402，150403)；其他试剂、试药均为分析纯

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

取本品10丸，研细，加乙酸乙酯10 mL，超声处理5 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取薄荷脑对照品，加乙酸乙酯制成质量浓度为4 mg·mL-1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚60～90 ℃-乙酸乙酯(7∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%香草醛乙醇溶液-硫酸(100∶5)的混合溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点[3-4]。结果见图1。

注：1.薄荷脑；2.1312001；3.1312002；4.1312003；5.140501；6.140502；7.140503；8.150401；9.150402；10.150403。图1 胆舒滴丸薄层鉴别图

2.2 特征图谱

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 以聚乙二醇20 M为固定相的毛细管柱(柱长为30 m，内径为0.53 mm，膜厚度为1 μm)；柱温为程序升温：初始温度为115 ℃，保持5 min，以4 ℃·min-1的速率升温至200 ℃，保持3 min；进样口温度为230 ℃；检测器温度为230 ℃；分流进样，分流比为10∶1。理论板数按薄荷脑峰计算应不低于50 000。见图2。

注：1.桉油精；2.(-)-薄荷酮；7.薄荷脑；8.胡薄荷酮。下同。图2 胆舒滴丸对照图谱

2.2.2 参照物溶液的制备 取桉油精对照品、(-)-薄荷酮对照品、薄荷脑、胡薄荷酮对照品[5]，精密称定，分别加无水乙醇制成质量浓度为2 mg·mL-1的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品5丸，精密称定，置50 mL量瓶中，加水4 mL，超声处理使溶散，加入无水乙醇30 mL，超声处理(功率200 W，频率40 kHz)5 min，放冷，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 特征图谱方法学考察 稳定性：取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h测定，对其中的特征峰进行分析，各色谱峰相对保留时间的RSD均小于0.3%，结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。

精密度：取同一供试品溶液，连续进样6次，每次1 μL，各色谱峰相对保留时间的RSD均小于2.0%，符合特征图谱研究的技术要求，表明该方法进样精密度良好。

重复性：取同一批胆舒滴丸样品6份，分别按照2.2.3项下方法制备供试品溶液，分别进样，结果各色谱峰的相对保留时间的RSD均小于2.0%，表明该方法重复性好。

2.2.5 胆舒滴丸对照特征图谱的建立和分析 按照2.2.3项下分别制备9批胆舒滴丸供试品溶液进行检测，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)进行分析，根据相对保留时间稳定、各批次样品均能检出，且峰相对较高的原则，以7号峰为参照确定8个重复性较好的峰作为特征峰，并进行多点校正，自动匹配后生成对照特征图谱。9批胆舒滴丸特征图谱见图3，所得对照特征图谱见图4，各共有峰的相对保留时间见表1。各特征峰与S峰的相对保留时间分别为：0.37(峰1)、0.73(峰2)、0.78(峰3)、0.87(峰4)、0.90(峰5)、0.92(峰6)、1.00(峰S)、1.05(峰8)。

图3 9批胆舒滴丸特征图谱

图4 胆舒滴丸对照特征图谱

表1 9批胆舒滴丸特征图谱共有峰的相对保留时间

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件与系统适用性试验 同2.2.1色谱条件。

2.3.2 对照品溶液的制备 取薄荷脑对照品，精密称定，加无水乙醇制成每质量浓度为0.2 mg·mL-1的溶液，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备 同2.2.3供试品溶液的制备方法。

2.3.4 空白供试品溶液的制备 原方法去除薄荷素油，依法制成阴性制剂。取5丸，按照2.2.3项下方法制备空白供试品溶液，依法测定。结果在色谱图薄荷脑色谱峰位置无吸收峰，空白制剂色谱图对待测峰的测定无干扰。

2.3.5 标准曲线的制备 分别精密吸取薄荷脑对照品溶液(0.52 mg·mL-1)0.2、0.5、0.8、1、1.5 μL，注入气相色谱仪，测定峰面积，以进样量(X，μg)为横坐标，以峰面积值(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：Y=1 827.0X-2×10-13，相关系数r=1.000 0，表明薄荷脑在0.1～0.75 μg进样量与峰面积值呈良好的线性关系。

2.3.6 精密度试验 精密吸取薄荷脑对照品溶液(0.52 mg·mL-1)1 μL，连续进样6次，薄荷脑峰面积的RSD为1.0%，表明本方法进样精密度良好。

2.3.7 重复性试验 取同一批次胆舒滴丸5丸，共6份，置具塞锥形瓶中，按照2.3.3项下方法处理成6份供试品溶液，进行测定，薄荷脑峰面积的RSD为1.5%，表明本方法重复性良好。

2.3.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h测定，对其中的特征峰进行分析，薄荷脑峰面积的RSD为0.6%，结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.9 加样回收试验 取已知含量的样品(批号：1312001，薄荷脑的含量为1.95 mg/丸，)3丸，共6份，精密称定，分别精密加入薄荷脑对照品溶液(0.52 mg·mL-1)10 mL，依法测定。计算回收率为100.6%，RSD为2.2%，表明此方法准确性良好。

2.3.10 样品的含量测定 依法对9批胆舒滴丸进行薄荷脑的含量测定，结果见表2。

表2 各批次胆舒滴丸中薄荷脑的含量(n=2)

3 讨论

胆舒滴丸是以薄荷素油为主要原料制成的滴丸剂。薄荷素油主要成分为L-薄荷脑、(-)-薄荷酮、胡薄荷酮、桉油精、异薄荷酮等，其中以薄荷脑含量最高，故以薄荷脑为薄层色谱鉴别和含量测定的指标成分，以桉油精、(-)-薄荷酮、薄荷脑、胡薄荷酮为参照物，采用薄层色谱法和气相色谱法对胆舒滴丸进行鉴别、含量测定及特征图谱研究。

特征图谱可从整体上实现质量控制，有利于中药质量稳定和有效。2015年版《中华人民共和国药典》一部收载的薄荷素油指纹图谱项下，对薄荷素油进行了指纹图谱检测。为了提高胆舒滴丸的质量标准，特进行胆舒滴丸的特征图谱研究，确定了8个特征峰，其中4个峰得到指认。

根据9批胆舒滴丸含量测定数据，以9批薄荷脑含量的80%为限量标准，暂定本品每丸含薄荷素油以薄荷脑(C10H20O)计，不得少于1.6 mg。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2] 刘红杰，金若敏.薄荷油研究进展[J].山东中医药大学学报，2006，30(6)：502.

[3] 朱亮，包贝华，周灵君.胆舒滴丸的质量标准研究[J].江苏中医药，2007，39(8)：68-69.

[4] 刘军，袁杰，吕雄文.枇杷止咳颗粒中枇杷叶、薄荷脑和罂粟壳薄层鉴别的研究[J].安徽医药，2011，15(12)1498-1500.

[5] 桂新，周荣汉.国产野生薄荷挥发油化学组分变异及其化学型[J].植物资源与环境，1998，7(3)：13-18.

StudyonQualityStandardsofDanshuDrippingPills

ZHOU Wei，HUChangjiang*，FENGJian

(SichuanNeo-greenPharmaceuticalTechnologyDevelopmentCo.Ltd，Sichuan，Pengzhou611930，China)

Objective：To establish the quality standard for establishing the quality of Danshu dripping pills.Methods：Characteristic identification of Danshu dripping pill was performed by TLC，and content determination and the characteristics chromatograms was performed by gas chromatography.Results：The identification of TLC was obvious and specific.There were 8 characteristic chromatographic peaks with good separation in different batches of Danshu dripping.Menthol showed a good linear relationship in 0.104～0.78 μg.The regression equation wasY=1827.0X-2*10-13.The correlation coefficient was r=1.0.Conclusion：The established quality standard can be effective for the identification and accurate determination of the content of Danshu dripping pills.

Danshu dripping pills；menthol；fingerprint chromatogram；quality standards；determination of content

2015-07-02)

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胡昌江，教授，博士研究生导师，研究方向：中药炮制原理及饮片质量标准研究；E-mail：wind_61@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.5.022