赶黄草袋泡茶中黄酮类成分的定量分析

杨玲霞，朱旭江，刘婷婷

(1.甘肃省药品检验研究院，甘肃 兰州 730070；2.西安交通大学第一附属医院 药学部，陕西 西安 710065)

赶黄草袋泡茶中黄酮类成分的定量分析

杨玲霞1*，朱旭江1，刘婷婷2

(1.甘肃省药品检验研究院，甘肃 兰州 730070；2.西安交通大学第一附属医院 药学部，陕西 西安 710065)

目的：测定赶黄草袋泡茶中黄酮类成分的含量。方法：采用HPLC法，色谱柱为Kromasil C18柱(250 mm×4.0 mm，5.0 μm)；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50)；检测波长为360 nm；流速为1.0 mL·min-1；进样量：10 μL。结果：槲皮素、山柰酚分别在0.203 6～2.036 0、0.043 2～0.432 0 μg具有良好线性关系，平均回收率分别为98.43%(RSD=1.75%)和97.61%(RSD=2.17%)。结论：该方法准确、灵敏，可用于赶黄草袋泡茶中黄酮类成分槲皮素和山柰酚的含量测定。

赶黄草袋泡茶；槲皮素；山柰酚；高效液相色谱法

赶黄草始载于明代《救荒本草》，为虎耳草科(Saxifragaceae)扯根菜属Penthorum植物扯根菜PenthorumchinensePursh的干燥地上部分。具有清热解毒、活血散瘀、利水消肿、退黄、平肝的功能。由于赶黄草显著的保肝作用，利用其开发的保健品赶黄草袋泡茶也越来越受到人们的认可。近年来关于赶黄草的化学、药理、临床研究已取得一定进展，其中黄酮类化合物为其主要活性成分[1-10]。但有关赶黄草及其制剂的质量标准评价多局限于单一的槲皮素、没食子酸等成分的测定[11-13]。本文首次采用高效液相色谱法同时测定了赶黄草袋泡茶中槲皮素和山柰酚的含量，为赶黄草及其保健制剂的内在质量控制提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津公司)；AE-240型电子天平(瑞士Mettler Toledo公司)。

1.2 试药

槲皮素对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100081-200406，含量测定以93.3%计)；赶黄草袋泡茶(古蔺宏安药业有限公司，规格：1.6 g/袋，批号：130304；四川省锦云堂中药饮片有限公司，规格：2 g/袋，批号：130201；都江堰春盛中药饮片有限公司，规格：3 g/袋，批号：121202)；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18柱(250 mm×4.0 mm，5.0 μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50)；检测波长：360 nm；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL。

2.2 对照品溶液的制备

分别精密称取槲皮素10.18 mg、山柰酚2.16 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得对照品储备溶液(槲皮素质量浓度为203.6 μg·mL-1、山柰酚质量浓度为43.2 μg·mL-1)。精密吸取对照品储备溶液5 mL，加甲醇定容至10 mL，即得对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取赶黄草袋泡茶内容物适量，精密称取约0.5 g，精密加入甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)25 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.46 μm的微孔滤膜滤过，即得。

2.4 系统适用性试验

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，按2.1项下色谱条件进样测定，色谱图见图1。结果表明，在此色谱条件下，槲皮素和山柰酚均与样品中其他组分色谱峰基线分离，理论塔板数按槲皮素峰计算为8491，按山柰酚计算为5862。

注：A.槲皮素和山柰酚对照品色谱图；B.供试品色谱图；1.槲皮素；2.山柰酚。图1 赶黄草袋泡茶高效液相色谱图

2.5 线性关系的考察

将对照品储备溶液分别稀释成一系列浓度梯度的对照品溶液，用0.46 μm的微孔滤膜滤过，依次进样10 μL。以槲皮素、山柰酚峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，进行回归计算，槲皮素的回归方程为Y=4 210 317X+3931，r=1.000 0，槲皮素在0.203 6～2.036 0 μg线性关系良好；山柰酚的回归方程为Y=4 187 350X+28 868，r=0.999 8，山柰酚在0.043 2～0.432 0 μg线性关系良好。

2.6 精密度试验

精密吸取对照品溶液，按2.1色谱条件重复进样5次，每次10 μL，分别计算，得槲皮素峰面积的RSD为1.25%，山柰酚峰面积的RSD为1.64%。表明该方法精密度良好。

2.7 稳定性

精密吸取同一供试品溶液10 μL，分别于0、2、4、8、16、24 h注入液相色谱仪，测定槲皮素和山柰酚的峰面积，结果槲皮素峰面积的RSD为2.37%，山柰酚峰面积的RSD为2.16%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 重复性试验

精密称取同一样品(批号：121202)6份，按照2.3项下的方法制备供试品溶液，按照2.1项下的色谱条件依次进样测定，结果槲皮素平均含量的RSD为1.79%，山柰酚平均含量的RSD为2.41%，表明本法重复性良好。

2.9 加样回收率试验

取已知含量的赶黄草袋泡茶样品(古蔺宏安药业有限公司，批号：130304，槲皮素和山柰酚质量分数分别为5.32、1.12 mg·g-1)6份，精密称定，分别精密加入对照品溶液适量，按2.3项下的方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率。结果见表1～2。结果表明该方法准确性良好。

2.10 样品的含量测定

取赶黄草袋泡茶按2.3项下方法制备供试品溶液，照2.1项下的色谱条件测定，进样10 μL，记录色谱图峰面积，以峰面积计算样品中槲皮素和山柰酚的含量。结果见表3。

表1 槲皮素的加样回收率试验结果(n=6)

表2 山柰酚的加样回收率试验结果(n=6)

表3 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

现代生活中，人们由于压力比较大，常伴随一些不良的生活习惯，长期饮酒已被证实是损害肝脏的第一杀手。赶黄草具有显著的保肝作用，以其为主要原料生产的袋泡茶日益受到人们的青睐。但赶黄草袋泡茶生产厂家多，规格不一，缺乏有效的含量控制指标。所以制定赶黄草袋泡茶的含量控制方法具有很重要的意义。

含量测定结果表明，不同厂家生产的袋泡茶每g所含黄酮类成分含量接近，但考虑到包装规格的差异较大，饮用的剂量会有较大的差异，应对袋泡茶的规格、日服用量等进行规范。

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DeterminationofFlavonoidConstituentinGanhuangcaoTeaBagbyHPLC

YANG Lingxia1*，ZHUXujiang1，LIUTingting2

(1.InstituteforDrugControlofGansuProvince；LanzhouGansu730070，China；2.TheMedicineDivisionofFirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity，Xi’an710065，China)

Objective：To establish an HPLC method for the determination of quercetin and kaempferol in Ganhuangcao tea bag.Methods：The HPLC analysis was carried out on Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)with a mixture of methanol-0.1% phosphate(50∶50)as the mobile phase.The determination wavelength was set at 360nm with the flow rate of 1.0 mL·min-1.Results：The quercetin and kaempferol showed good linearity in the range of 0.2036 ～2.036 0 μg and 0.043 2～0.432 0 μg respectively.The average recovery rate of quercetin and kaempferol were 98.43%(RSD=1.75%)and 97.61%(RSD=2.17%)，respectively.Conclusion：The method is simple and accurate.It can be used for the content determination of quercetin and kaempferol in Ganhuangcao tea bag.

Ganhuangcao tea bag；quercetin；kaempferol；HPLC

2015-09-13)

*

杨玲霞，副主任药师，研究方向：中药化学、中药分析、药品质量标准研究；Tel:(0931)7822945,E-mail:yanglingxia@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.2.021