枯草芽孢杆菌高耐菌株泡腾制剂对肉鸡生长性能、盲肠肠道菌群的影响

张晓云，周同茂，段宝轩，李玉佳，冯欣璞，冯英珍，许　灿，王　钊，李荣彦

（1.河北征宇制药有限公司，石家庄　051431；2.石家庄市动物专用免疫增强剂工程技术研究中心，石家庄　051431；3.麦氏饲料科技有限公司，石家庄　051431；4.河北工业大学化工学院，天津　300130；5.河北省石家庄市栾城区畜牧兽医局，石家庄　051430）

枯草芽孢杆菌高耐菌株泡腾制剂对肉鸡生长性能、盲肠肠道菌群的影响

张晓云1，2，周同茂3，段宝轩4，李玉佳3，冯欣璞1，冯英珍1，许灿1，王钊1，李荣彦5

（1.河北征宇制药有限公司，石家庄051431；2.石家庄市动物专用免疫增强剂工程技术研究中心，石家庄051431；3.麦氏饲料科技有限公司，石家庄051431；4.河北工业大学化工学院，天津300130；5.河北省石家庄市栾城区畜牧兽医局，石家庄051430）

为研究枯草芽孢杆菌高耐菌株泡腾制剂对肉鸡生长性能、盲肠肠道菌群的影响，将3日龄AA肉鸡1 200只随机分为6组，每组200只，试验1～4组饮水中分别添加枯草芽孢杆菌高耐菌株泡腾粉、枯草芽孢杆菌高耐菌株泡腾颗粒、枯草芽孢杆菌高耐菌株泡腾片、枯草芽孢杆菌普通菌株粉剂各1 kg·t-1，试验5组在全价基础日粮中额外添加15％杆菌肽锌预混剂266 g·t-1。结果表明，枯草芽孢杆菌高耐菌株泡腾制剂可以提高AA肉鸡平均日增重、提高平均日采食量、降低料肉比、降低死淘率、降低腹泻率，优于枯草芽孢杆菌普通菌株粉剂，优于或与杆菌肽锌预混剂相当。极显著增加21日龄、42日龄AA肉鸡盲肠中芽孢杆菌数量（P＜0.01）、双歧杆菌数量（P＜0.05或P＜0.01）、乳酸菌数量（P＜0.05），显著降低大肠杆菌数量（P＜0.05）、沙门氏菌数量（P＜0.05），优于枯草芽孢杆菌普通菌株粉剂，优于或与杆菌肽锌预混剂相当。

枯草芽孢杆菌；高耐菌株；泡腾制剂；肉鸡；生长性能；肠道菌群

1　材料与方法

1.1试验材料

1.1.1试验动物及分组

1日龄AA肉鸡1 280只，饲养至3日龄，选择1 200只随机分为对照组、试验1组、试验2组、试验3组、试验4组、试验5组，每组200只。

1.1.2试验样品

枯草芽孢杆菌高耐菌株泡腾粉，批号20141003，活菌数1.31×1010cfu·g-1；枯草芽孢杆菌高耐菌株泡腾颗粒，批号20141001，活菌数1.32×1010cfu· g-1；枯草芽孢杆菌高耐菌株泡腾片，批号20141002，活菌数1.28×1010cfu·g-1；枯草芽孢杆菌普通菌株粉剂，批号20141001，活菌数1.32× 1010cfu·g-1；均由麦氏（石家庄）饲料科技有限公司提供，均按每kg兑1 t水使用。杆菌肽锌预混剂，100 g∶15 g（60万单位），外购，检验合格，饲料含266 g·t-1。

1.1.3培养基

分离鉴别计数用培养基为PCA培养基（芽孢杆菌）、EMB培养基（大肠杆菌）、MRS培养基（乳酸菌）、BBL培养基（双歧杆菌）、BS培养基（沙门氏菌）。

1.2试验方法

1.2.1饲养管理

试验鸡采用网上平养，自由采食，饮水，24 h光照；第1周温度保持在33℃，以后每周平均降低2℃；饲养密度0.1 m2·只-1；免疫程序为7日龄新城疫疫苗、14日龄传染性法氏囊病毒疫苗、21日龄新城疫疫苗。

1.2.2试验动物处理

对照组自由饮用清洁饮水，饲喂全价基础日粮；试验1～4组每组饮水中分别添加枯草芽孢杆菌高耐菌株泡腾粉、枯草芽孢杆菌高耐菌株泡腾颗粒、枯草芽孢杆菌高耐菌株泡腾片、枯草芽孢杆菌普通菌株粉剂各1 kg·t-1，全天自由饮用，饲喂全价基础日粮；试验5组全价基础日粮添加杆菌肽锌预混剂266 g·t-1，全天自由采食、自由饮水。

1.3检测指标及方法

1.3.1生长性能

每天记录各组投料量、剩料量、腹泻数和死淘数，分别于3、21和42日龄各组随机抽取100只称重。计算每组的平均日增重、平均日采食量、料肉比、死淘率、腹泻率，计算公式分别见式1～5。

平均日增重=（期末总重-期初总重）（/抽取只数×试验天数）；（1）

平均日采食量=（投料总量-剩料总量）（/试验只数×试验天数）；（2）

料肉比=（投料总量-剩料总量）（/总末重-总初重）；（3）

死淘率=死淘只数/试验只数×100％；（4）

腹泻率=（腹泻只数×腹泻天数）（/试验只数×试验天数）×100％。（5）

1.3.2盲肠微生物菌群分离培养

于3、21、42日龄每组各随机抽取5只，屠宰后立即结扎盲肠段，在无菌操作下取盲肠内容物，均质后取1.0 g于盛有9 mL灭菌生理盐水及玻璃珠的锥形瓶内，进行10倍梯度稀释。选择5个稀释度分别涂布于EMB、MRS、BBL、BS培养基上，接种量为100 μL，每个稀释度作3个平行，37℃恒温培养24 h，选择平板菌落数在30～100个进行计数，分别检测盲肠内容物中大肠杆菌、乳酸菌、双歧杆菌和沙门氏菌的数量。无菌操作下另取盲肠内容物1.0 g制成悬浮液，80℃水浴10 min，再用10倍梯度稀释，无菌操作接种于PCA培养基上，37℃恒温培养24 h，选择平板菌落数在30～100个的进行计数，检测芽孢杆菌数量。用1g盲肠内容物中细菌数量的常用对数（Log cfu·g-1）表示。

1.4统计分析

试验数据采用SPSS 18.0软件采用One Way ANOVA进行统计，并进行Duncan's多重比较，结果以“平均值±标准误”表示。

2　试验结果

2.1对肉鸡生长性能的影响

表1　对肉鸡生长性能的影响

对肉鸡生长性能的影响见表1。

由表1可知，3～21日龄，与对照组相比，试验1～3组平均日增重分别提高14.908％、12.320％、13.072％；平均日采食量分别提高1.729％、4.002％、1.059％；料肉比分别降低11.479％、7.394％、10.634％；死淘率分别降低1.5％、2.0％、2.0％；腹泻率分别降低45.833％、45.833％、45.833％。泡腾制剂各组平均日增重均高于普通菌株粉剂组和杆菌肽锌预混剂组；平均日采食量泡腾颗粒组高于普通菌株粉剂组，泡腾粉、泡腾片组则低于普通菌株粉剂组，但均高于杆菌肽锌预混剂组；泡腾制剂各组料肉比均低于普通菌株粉剂组和杆菌肽锌预混剂组；泡腾制剂各组死淘率均低于普通菌株粉剂组和杆菌肽锌预混剂组；泡腾制剂各组腹泻率均低于普通菌株粉剂组，但均高于杆菌肽锌预混剂组。

22～42日龄，与对照组相比，试验1～3组平均日增重分别提高1.990％、4.154％、5.085％；平均日采食量分别提高1.258％、2.361％、0.917％；料肉比分别降低0.714％、1.702％、3.954％；死淘率分别降低1.0％、0.5％、1.0％；腹泻率分别降低58.824％、52.941％、58.824％。泡腾制剂各组平均日增重均高于普通菌株粉剂组和杆菌肽锌预混剂组；泡腾制剂各组平均日采食量均高于普通菌株粉剂组和杆菌肽锌预混剂组；泡腾制剂各组料肉比均低于普通菌株粉剂组和杆菌肽锌预混剂组；泡腾制剂各组死淘率均低于或与普通菌株粉剂组、杆菌肽锌预混剂组相当；泡腾制剂各组腹泻率均低于普通菌株粉剂组，低于或与杆菌肽锌预混剂组相当。

3～42日龄，与对照组相比，试验1～3组平均日增重分别提高5.664％、6.471％、7.357％；平均日采食量分别提高1.372％、2.752％、0.953％；料肉比分别降低4.042％、3.515％、5.975％；死淘率分别降低2.5％、2.5％、3.0％；腹泻率分别降低51.961％、49.020％、51.961％。

泡腾制剂各组平均日增重均高于普通菌株粉剂组和杆菌肽锌预混剂组；平均日采食量泡腾颗粒组高于普通菌株粉剂组，泡腾粉、泡腾片组则低于普通菌株粉剂组，但均高于杆菌肽锌预混剂组；泡腾制剂各组料肉比均低于普通菌株粉剂组和杆菌肽锌预混剂组；泡腾制剂各组死淘率均低于普通菌株粉剂组和杆菌肽锌预混剂组；泡腾制剂各组腹泻率均低于普通菌株粉剂组，高于或与杆菌肽锌预混剂组相当。

2.2对盲肠微生物菌群的影响

表2　盲肠内容物中微生物菌群数量

盲肠内容物中微生物菌群数量见表2。

由表2可知，3日龄，各组盲肠内容物中芽孢杆菌、双歧杆菌、乳酸菌、大肠杆菌、沙门氏菌无显著差异（P＞0.05）。

21日龄，与对照组相比，试验1～3组能增加盲肠内容物中芽孢杆菌数量（P＜0.01）、双歧杆菌数量（P＜0.01）、乳酸菌数量（P＜0.05），降低大肠杆菌数量（P＜0.05）、沙门氏菌数量（P＜0.05）；与对照组相比，试验4组能增加盲肠内容物中芽孢杆菌数量（P＜0.01）、双歧杆菌数量（P＜0.01），降低大肠杆菌数量（P＜0.01）、沙门氏菌数量（P＜0.05），乳酸菌数量差异不显著（P＞0.05）；与对照组相比，试验5组对盲肠内容物中芽孢杆菌、双歧杆菌、乳酸菌数量无显著增加（P＞0.05），但能极显著降低盲肠内容物中大肠杆菌数量（P＜0.01）、沙门氏菌数量（P＜0.01）。试验1～3组中枯草芽孢杆菌数量极显著高于对照组（P＜0.01）。

42日龄，与对照组相比，试验1～3组盲肠内容物中芽孢杆菌数量（P＜0.01）、双歧杆菌数量（P＜0.01）、乳酸菌数量（P＜0.01）增加，降低大肠杆菌数量（P＜0.01）、沙门氏菌数量（P＜0.01）；与对照组相比，试验4组盲肠内容物中芽孢杆菌数量（P＜0.01）、双歧杆菌数量（P＜0.01）增加，大肠杆菌数量（P＜0.01）、沙门氏菌数量（P＜0.01）降低，虽然乳酸菌数量增加但差异不显著（P＞0.05）增加；与对照组相比，试验5组对盲肠内容物中芽孢杆菌、双歧杆菌、乳酸菌数量无显著增加（P＞0.05），但能极显著降低盲肠内容物中大肠杆菌数量（P＜0.01）、沙门氏菌数量（P＜0.01）。试验1～4组中枯草芽孢杆菌数量极显著高于对照组（P＜0.01）。

与3日龄相比，对照组21日龄、42日龄盲肠内容物中芽孢杆菌、双歧杆菌、乳酸菌、大肠杆菌、沙门氏菌无显著差异（P＞0.05）。试验1组21日龄和42日龄盲肠内容物中芽孢杆菌数量、双歧杆菌数量、乳酸菌数量显著或极显著增加（P＜0.05或P＜0.01），大肠杆菌数量、沙门氏菌数量显著降低（P＜0.01）。试验2组21日龄和42日龄盲肠内容物中芽孢杆菌数量、双歧杆菌数量与42日龄乳酸菌数量显著增加（P＜0.05或P＜0.01），21日龄和42日龄大肠杆菌数量、沙门氏菌数量显著降低（P＜0.05）。试验3组21日龄和42日龄盲肠内容物中芽孢杆菌数量、双歧杆菌数量与42日龄乳酸菌数量显著或极显著增加（P＜0.05或P＜0.01），42日龄大肠杆菌数量、21日龄和42日龄沙门氏菌数量显著或极显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。试验4组21日龄和42日龄盲肠内容物中芽孢杆菌数量、双歧杆菌数量、乳酸菌数量显著或极显著增加（P＜0.05或P＜0.01），21日龄和42日龄大肠杆菌数量、42日龄沙门氏菌数量显著或极显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。试验5组盲肠内容物中芽孢杆菌、双歧杆菌、乳酸菌数量无显著变化（P＞0.05），但盲肠内容物中大肠杆菌数量、沙门氏菌数量极显著降低（P＜0.01）。

3　讨论

枯草芽孢杆菌可以提高AA肉鸡平均日增重、提高平均日采食量、降低料肉比、降低死淘率、降低腹泻率；林显华等在AA肉鸡日粮中添加不同剂量的枯草芽孢杆菌B7，结果以枯草芽孢杆菌添加量5×105cfu·g-1，除29～35日龄外，肉鸡的日增重均显著高于对照组（P＜0.05）、料重比均显著低于对照组（P＜0.05）［1］。易中华等在AA肉鸡日粮中添加枯草芽孢杆菌显著提高肉鸡生长全期（0～6周龄）的平均日增重（P＜0.05），抗生素金霉素虽然显著提高0～3周龄肉鸡的平均日增重（P＜0.05），但这种影响未能在3～6周龄和0～6周龄表现出来；枯草芽孢杆菌和金霉素均显著改善肉鸡生长全期（0～6周龄）的饲料转化率（P＜0.05），金霉素对饲料转化率的影响主要体现在0～3周龄阶段；腹泻率以金霉素组为最低，枯草芽孢杆菌组其次；死淘率虽有降低，但差异不显著（P＞0.05），部分结果与本研究相近［2］。余东游等连续42 d在罗斯308肉鸡日粮添加1×105cfu·g-1枯草芽孢杆菌，结果表明，对肉鸡前期（1～22日龄）的生产性能无显著影响（P＞0.05），而肉鸡后期（22～42日龄）的日增重和日采食量分别比对照组提高了15.88％和13.27％（P＜0.05），全期分别提高了12.20％（P＜0.05）和6.81％（P＞0.05），各阶段的饲料增重比也无显著差异（P＞0.05），可能与菌株以及添加量有关［3］。

枯草芽孢杆菌增加21日龄、42日龄盲肠中芽孢杆菌数量、双歧杆菌数量、乳酸菌数量，降低大肠杆菌数量、沙门氏菌数量。易中华等研究表明，枯草芽孢杆菌减少肉鸡盲肠中的大肠杆菌和沙门氏菌的数量（P＜0.05），增加乳酸杆菌的数量（P＜0.05），且随着肉鸡的生长作用更加明显［2］。李卫芬等连续42 d在罗斯308肉鸡日粮添加枯草芽孢杆菌1×105cfu·g-1，结果表明，空肠和盲肠内容物中乳酸菌数量显著增加（P＜0.05）、大肠杆菌数量显著降低（P＜0.05）、芽孢杆菌数量有升高趋势，结果与本研究相近［4-5］。枯草芽孢杆菌菌株经过筛选后具有耐抗菌药物、耐酸、耐胆盐、耐高温等特性并制备成泡腾制剂优于普通菌株。

［1］林显华，孙合美，谷巍.枯草芽孢杆菌B7对肉鸡生长性能及免疫性能的影响［J］.中国畜牧兽医，2013，40（2）:91-95.

［2］易中华，胥传来，计成，等.果寡糖和枯草芽孢杆菌对肉鸡肠道菌群数量及生产性能的影响［J］.中国畜牧杂志，2005，41（12）:11-14.

［3］余东游，毛翔飞，秦艳，等.枯草芽孢杆菌对肉鸡生长性能及其抗氧化和免疫功能的影响［J］.中国畜牧杂志，2010，46（3）:22-25.

［4］李卫芬，李雅丽，秦艳，等.枯草芽孢杆菌对肉鸡肠道消化酶活性、黏膜结构及肠道菌群组成的影响［J］.中国兽医学报，2012，32（5）:666-669.

［5］卞国顺，崔志文，姚庞，等.枯草芽孢杆菌替代抗生素对肉鸡生产性能和肠道黏膜酶活的影响［J］.饲料工业，2012（9）:34-36.

Effect of Highly Resistant Bacteria ofBacillus Subtilis Effervescent Preparation on Growth Performance and Caecum Microbiota in Broilers

ZHANG Xiaoyun1，2，ZHOU Tongmao3，DUAN Baoxuan4，LI Yujia3，FENG Xinpu1，FENG Yingzhen1，XU Can1，Wang Zhao1，LI Rongyan5

（1.Hebei Zhengyu Pharmaceutical Co.，Ltd.，Shijiazhuang 051431，China；2.Shijiazhuang Animal Immunopotentiator Engineering Technology Research Center，Shijiazhuang 051431，China；3.Maishi Feed Tech Co.，Ltd.，Shijiazhuang 051431，China；4.Hebei University of Technology，Chemical Engineering Institute，Tianjin 300130，China；5.Animal Husbandry and Veterinary Bureau of Luancheng District of Shijiazhuang in Hebei Province，Shijiazhuang 051430，China）

In order to study the influence of highly resistant bacteria of Bacillus subtilis effervescent preparation on growth performance and caecum microbiota and intestinal villus of broilers.One thousand and two hundred healthy AA broiler chickens at the age of 3 were randomly divided into six groups，with 200 broilers in each group. The first to forth group were supplied with highly resistant bacteria of Bacillus subtilis effervescent powder，highly re-sistant bacteria of Bacillus subtilis effervescent granule，highly resistant bacteria of Bacillus subtilis effervescent tablet and bacillus subtilis common powder 1 kg·t-1in drinking water，respectively.The fifth group were supplied with 266 g·t-115％bacitracin zinc premix in basal diet.The results showed that highly resistant bacteria of bacillus subtilis effervescent preparation improved average daily gain，average daily feed intake，and reduced feed conversion rate，death and culling rate and diarrhea rate，and was better than Bacillus subtilis common powder，and was better than or the same as bacitracin zinc premix group.The highly resistant bacteria of Bacillus subtilis effervescent preparation could remarkable increase bacillus numbers（P＜0.01），Bifidobacterium number（P＜0.05 or P＜0.01），and lactic acid bacteria number（P＜0.05）in cecum in 21 and 42 day，and remarkable reduce the number of E.coli（P＜0.05），the number of salmonella（P＜0.05），and was better than Bacillus subtilis common powder，and was better than or the same as bacitracin zinc premix group.

Bacillus subtilis；highly resistant bacteria；effervescent preparation；broiler chickens；growth performance；gut microbiota

S831；Q939.1

A

1001-0084（2016）08-0040-05

2016-07-01

张晓云（1981-），女，河北易县人，硕士，主要从事于兽药和饲料添加剂新产品的开发。