S100A12和RAGE在子痫前期孕妇外周血及胎盘组织中的表达

秦丽云，李　洁，陈海英

(1.山东省昌乐县人民医院，山东 昌乐 262400；2.中国医科大学第四医院，辽宁 沈阳 110032)



S100A12和RAGE在子痫前期孕妇外周血及胎盘组织中的表达

秦丽云1，李洁1，陈海英2

(1.山东省昌乐县人民医院，山东 昌乐 262400；2.中国医科大学第四医院，辽宁 沈阳 110032)

目的探讨S100钙结合蛋白A12(S100A12)及晚期糖基化终末产物受体(RAGE)基因在子痫前期孕妇外周血及胎盘组织中的表达及意义。方法选取2014年2月至2015年3月在中国医科大学第四医院和昌乐县人民医院产科分娩的87例子痫前期孕妇分为非重度组(n=46)和重度组(n=41)，同期选取正常孕妇40例作为对照组。利用实时荧光定量PCR技术检测外周血及胎盘组织中S100A12 mRNA及RAGE mRNA的表达。结果子痫前期孕妇外周血中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量均高于对照组(t值分别为12.341和10.517，均P<0.05)，重度组子痫前期孕妇外周血中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量均高于非重度组和对照组，且非重度组均高于对照组，差异均有统计学意义(t=1.980～8.191，均P<0.05)。子痫前期孕妇胎盘组织中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量均高于对照组孕妇(t值分别为9.747和8.625，均P<0.05)，重度组孕妇胎盘组织中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量均高于非重度组和对照组，且非重度组高于对照组，差异均有统计学意义(t=2.235～7.286，均P<0.05)。经Pearson相关分析显示，子痫前期孕妇外周血和胎盘组织中S100A12 mRNA相对表达量均与RAGE mRNA相对表达量呈正相关(r值分别为0.603和0.552，均P<0.05)。结论S100A12及RAGE基因在子痫前期孕妇外周血及胎盘组织中呈高表达，可能共同参与了子痫前期孕妇机体炎性反应的发生。

子痫前期；外周血；胎盘组织；S100钙结合蛋白A12；晚期糖基化终末产物受体

[Abstract]Objective To explore the expressions and significance of S100 calcium binding protein A12 (S100A12)and receptor for advanced glycation end products (RAGE) gene in peripheral blood and placenta tissue of pregnant women with preeclampsia. Methods Eighty-seven cases of pregnant women with preeclampsia delivering in Fourth Affiliated Hospital of China Medical University and People’s Hospital of Changle County were divided into non-severe group (n=46) and severe group (n=41). At the same time, 40 cases of healthy pregnant women were chosen as control group. Expressions of S100A12 mRNA and RAGE mRNA in peripheral blood and placenta tissues were detected by using real-time fluorescence quantitative PCR technology. Results The relative expression levels of S100A12 mRNA and RAGE mRNA in peripheral blood of pregnant women with preeclampsia were higher than those in the control group (tvalue was 12.341 and 10.517, respectively, bothP<0.05). The relative expression levels of S100A12 mRNA and RAGE mRNA in peripheral blood of the severe group were higher than the non-severe group and the control group, and those of non-severe group were higher than the control group. The differences were statistically significant (tvalue ranged 1.980-8.191, bothP<0.05). The relative expression levels of S100A12 mRNA and RAGE mRNA in placenta tissues of pregnant women with preeclampsia were higher than the control group (tvalue was 9.747 and 8.625, respectively, bothP<0.05). The relative expression levels of S100A12 mRNA and RAGE mRNA in placenta tissue of severe group were higher than non-severe group and the control group, and the relative expression levels of non-severe group were higher than the control group. The differences were statistically significant (tvalue ranged 2.235-7.286, bothP<0.05). Pearson correlation analysis showed that the relative expression levels of S100A12 mRNA in peripheral blood and placenta tissues of pregnant women with preeclampsia were positively correlated with the relative expression levels of RAGE mRNA (rvalue was 0.603 and 0.552, respectively, bothP<0.05).Conclusion High levels of expression of S100A12 and RAGE gene are detected in peripheral blood and placenta tissues of pregnant women with preeclampsia. S100A12 and RAGE may have jointly participated in the inflammatory response of pregnant women with preeclampsia.

子痫前期作为一种妊娠期高血压疾病是造成孕产妇及围产儿死亡的主要因素，发病率高达7%～13%[1]，其发病机制目前尚不明确。近年来研究发现，子痫前期可能是母体发生的过度炎性反应，与患者免疫排除、胎盘组织局部缺血和缺氧等病理过程关系密切[2-3]。S100钙结合蛋白A12(S100A12)作为钙结合蛋白家族重要成员发挥促炎因子的作用，在调控炎性反应中发挥着关键性作用[4]。晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products，RAGE)作为S100A12结合受体，可通过激活细胞内信号传导通路参与全身及局部炎性疾病的发生[5]。目前，国内外有关S100A12和RAGE在子痫前期孕妇发病中的意义少有报道。本研究尝试对S100A12和RAGE基因在子痫前期孕妇外周血及胎盘组织中的表达进行检测，探讨二者与子痫前期发病的关系，以期为子痫前期机制研究提供依据。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2014年2月至2015年3月在中国医科大学第四医院和昌乐县人民医院产科分娩的共87例子痫前期孕妇，均符合子痫前期诊断标准[6]，年龄23～35岁，平均年龄(27.6±4.9)岁，根据患者病情严重程度分为非重度组和重度组；其中，非重度组46例，平均年龄(26.9±4.6)岁，重度组41例，平均年龄(28.1±5.4)岁，同期选取在产科进行分娩的正常孕妇40例作为对照组，平均年龄(27.3±4.8)岁。3组孕妇均未合并其他并发症，其年龄、孕次、产次一般情况比较均无显著性差异(均P>0.05)。本研究通过医院伦理委员会批准，所有患者行知情同意。

1.2方法

1.2.1主要试剂和仪器

总RNA提取试剂盒购自美国Invitrogen公司，逆转录试剂盒购自Promega公司，SYBR Green PCR试剂盒购自美国ABI公司，S100A12和RAGE基因、内参均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，实时荧光定量PCR仪购自美国Roche公司，紫外分光光度计购自美国Beckman公司，凝胶成像系统购自德国Vilber公司。

1.2.2标本采集及处理

所有孕妇均于晨起抽取空腹肘静脉血5mL，于3 000r/min离心10min，留取上清液保存于-20℃冰箱中。胎盘从产妇体内娩出后，于胎盘母体面切取1cm×1cm×1cm胎盘组织，切除时要注意避开梗死、出血、钙化区域，用冷生理盐水将切取组织冲洗干净，保存于-70℃冰箱。

1.2.3总RNA提取及逆转录

取胎盘组织进行研磨后，利用总RNA提取试剂盒分别对外周血和胎盘组织中总RNA进行提取，利用紫外分光光度计检测获得的RNA纯度，以A260/A280≥1.8为合格标本，利用逆转录试剂盒进行逆转录为cDNA。

1.2.4利用实时荧光定量PCR技术检测外周血及胎盘组织中S100A12 mRNA及RAGE mRNA表达

以cDNA作为模板，利用SYBR Green PCR试剂盒及PCR仪进行PCR实验，以GAPDH为内参，引物序列分别为S100A12的上游：5′-CACATTCCTGTGCATTCAGG-3′，下游：5′-TGCAAGCTCCTTTGTAAGCA-3′；RAGE的上游：5′-TTGGCGA￣GCCACTGGTGCTG-3′，下游：5′-TAGGACTGGTGGATGGCGGG￣TG-3′；GAPDH的上游：5′-GAGTCAACGGATTTGGTCGT-3′，下游：5′-GACAAGCTTCCCGTTCTCAG-3′。反应条件：94℃预变性10min，90℃15s，64℃15s，70℃60s，连续进行循环40次，每个标本均设置3个平衡孔。对获得的扩增产物进行凝胶电泳，利用Quantity One图像分析软件对电泳条带分析，并获得S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量。

1.3统计学方法

2结果

2.1各组孕妇外周血中S100钙结合蛋白A12 mRNA和晚期糖基化终末产物受体 mRNA的相对表达量

子痫前期孕妇外周血中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量均高于对照组，差异均有统计学意义(t值分别为12.341和10.517，均P<0.05)；重度组子痫前期孕妇外周血中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量均高于非重度组和对照组，且非重度组均高于对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表1和图1。

表1　不同组孕妇外周血中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量比较

图1 S100A12 mRNA和RAGE mRNA在不同组孕妇外周血中表达

Fig.1The expressions of S100A12 mRNA and RAGE mRNA in maternal peripheral blood of different groups

2.2各组孕妇胎盘组织中S100钙结合蛋白A12 mRNA和晚期糖基化终末产物受体 mRNA的相对表达量

子痫前期孕妇胎盘组织中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量均高于对照组孕妇，差异均有统计学意义(t值分别为9.747和8.625，均P<0.05)；重度组孕妇胎盘组织中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量均高于非重度组和对照组，且非重度组高于对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表2和图2。

表2　不同组孕妇胎盘组织中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量

图2 S100A12 mRNA和RAGE mRNA在不同组孕妇胎盘组织中表达

Fig.2The expressions of S100A12 mRNA and RAGE mRNA in placental tissues of different groups of pregnant women

2.3子痫前期孕妇外周血和胎盘组织中S100钙结合蛋白A12 mRNA和晚期糖基化终末产物受体 mRNA表达的相关性

经Pearson相关分析显示，子痫前期孕妇外周血中S100A12 mRNA相对表达量与RAGE mRNA相对表达量呈正相关(r=0.603，P=0.000)，且胎盘组织中S100A12 mRNA相对表达量与RAGE mRNA相对表达量呈正相关(r=0.552，P=0.000)，见图3。

图3子痫前期孕妇外周血和胎盘组织中S100A12 mRNA和RAGE mRNA表达相关性(A：外周血，B：胎盘组织)

Fig.3The relationships between the expressions of S100A12 mRNA and RAGE mRNA in preeclampsia maternal peripheral blood and placental tissues(A:peripheral blood, B:placental tissue)

3讨论

3.1炎性反应在子痫前期发病中的作用

子痫前期是妊娠期特发性疾病，可对孕妇各器官系统及新生儿产生影响，该病发病机制较为复杂，目前尚未研究清楚。有研究认为，胎盘是子痫前期发病的根源，胎盘滋养细胞功能异常致使血管重铸而导致胎盘浅着床，从而引发胎盘发生缺血再灌注损伤，导致炎性反应[7]，其提示炎性反应在子痫前期发病中扮演重要角色。有研究利用内毒素刺激的方式构建了子痫前期动物模型，且对抗炎治疗有效[8]，进一步说明过度的炎性反应导致机体一系列损伤反应是引发子痫前期的因素。

3.2 S100钙结合蛋白A12在子痫前期孕妇外周血和胎盘组织中呈高表达

S100A12是一种重要的促炎因子，在机体炎性反应及免疫防御中发挥重要作用，亦在细胞生长、分化、凋亡等生理过程中发挥调节作用[9]。有研究表明，S100A12可与钙结合，刺激血管内皮细胞黏附分子表达，加速炎性细胞激活及抗微生物作用的发挥[10]。本研究显示，子痫前期孕妇外周血和胎盘组织中S100A12 mRNA相对表达量均高于对照组孕妇(均P<0.05)，重度组子痫前期孕妇外周血和胎盘组织中S100A12 mRNA相对表达量>非重度组>对照组，说明S100A12基因在子痫前期孕妇外周血及胎盘组织中出现高表达，且与患者病情有关，病情愈严重，相对表达量愈高，提示炎性反应可能是引发子痫前期的重要病理基础，与Blaauw等[11]研究结论一致。

3.3晚期糖基化终末产物受体与S100钙结合蛋白A12可能共同参与了子痫前期孕妇炎性反应过程

RAGE是具有重要生物功能的多配体受体，S100A12是其重要受体之一，S100A12和RAGE结合可激活磷脂肌醇(PKC)、丝裂原细胞外信号调节激酶(MEK)、钙调蛋白激酶Ⅱ等信号通路，经过一系列级联反应而导致炎性因子的表达，促进炎性反应的发生[12]。本研究显示，子痫前期孕妇外周血和胎盘组织中RAGE mRNA相对表达量均高于对照组孕妇(均P<0.05)，重度组孕妇外周血及胎盘组织中RAGE mRNA相对表达量>非重度组>对照组，说明RAGE基因在子痫前期孕妇外周血和胎盘组织中呈高表达，且与患者病情严重程度有关，提示随病情进展RAGE表达愈高。

经Pearson相关分析显示，子痫前期孕妇外周血及胎盘组织中S100A12 mRNA相对表达量与RAGE mRNA相对表达量均呈正相关(r值分别为0.603和0.552，均P<0.05)，说明在子痫前期发病过程中，S100A12和RAGE相互作用，S100A12和RAGE结合激活信号通路可促使核因子κB进入细胞核，在促进炎性反应的同时，核因子κB作为RAGE核转录因子，可促使RAGE基因表达[13]，同时，RAGE又可促使S100A12聚集，引发炎性反应瀑布式发生[14]。

综上所述，过度炎性反应在子痫前期孕妇发病中具有重要作用，促炎因子S100A12及其受体RAGE在子痫前期孕妇外周血及胎盘组织中呈高表达，且呈正相关，可能共同参与了子痫前期孕妇机体炎性反应的发生，但具体在子痫前期发生中的作用机制尚待进一步研究明确。

[1]Seely E W, Tsigas E, Rich-Edwards J W.Preeclampsia and future cardiovascular disease in women:how good are the data and how can we manage our patients?[J].Semin Perinatol,2015,39(4):276-283.

[2]Jain A, Schneider H, Aliyev E,etal.Hypoxic treatment of human dual placental perfusion induces a preeclampsia-like inflammatory response[J].Lab Invest,2014,94(8):873-880.

[3]Mihu D, Razvan C, Malutan A,etal.Evaluation of maternal systemic inflammatory response in preeclampsia[J].Taiwan J Obstet Gynecol,2015,54(2):160-166.

[4]Heilmann R M, Grellet A, Allenspach K,etal.Association between fecal S100A12 concentration and histologic, endoscopic, and clinical disease severity in dogs with idiopathic inflammatory bowel disease[J].Vet Immunol Immunopathol,2014,158(3-4):156-166.

[5]Huang S M, Chang Y H, Chao Y C,etal.EGCG-rich green tea extract stimulates sRAGE secretion to inhibit S100A12-RAGE axis through ADAM10-mediated ectodomain shedding of extracellular RAGE in type 2 diabetes[J].Mol Nutr Food Res,2013,57(12):2264-2268.

[6]庄旭,林建华.子痫前期患者24h尿蛋白值与不良妊娠结局的相关性[J].中华妇产科杂志,2014,49(7):538-540.

[7]Shah D A, Khalil R A.Bioactive factors in uteroplacental and systemic circulation link placental ischemia to generalized vascular dysfunction in hypertensive pregnancy and preeclampsia[J].Biochem Pharmacol,2015,95(4):211-226.

[8]Liu L, Liu H, Brennecke S,etal.PP023. Soluble Fms-like tyrosine kinase-1 and placental growth factor expression in a rat model of pre-eclampsia[J].Pregnancy Hypertens,2013,3(2):75-76.

[9]Loughran-Fowlds A, Leach S, Lin J,etal.Respiratory disease and early serum S100A12 changes in very premature infants[J].Acta Paediatr,2011,100(12):1538-1543.

[10]Hung K W, Hsu C C, Yu C.Solution structure of human Ca(2+)-bound S100A12[J].J Biomol NMR,2013,57(3):313-318.

[11]Blaauw J, Souwer E T, Coffeng S M,etal.Follow up of intima-media thickness after severe early-onset preeclampsia[J].Acta Obstet Gynecol Scand,2014,93(12):1309-1316.

[12]Myles A, Viswanath V, Singh Y P,etal.Soluble receptor for advanced glycation endproducts is decreased in patients with juvenile idiopathic arthritis(ERA category) and inversely correlates with disease activity and S100A12 levels[J].J Rheumatol,2011,38(9):1994-1999.

[13]Zhu P, Ren M, Yang C,etal.Involvement of RAGE, MAPK and NF-κB pathways in AGEs-induced MMP-9 activation in HaCaT keratinocytes[J].Exp Dermatol,2012,21(2):123-129.

[14]Naruse K, Sado T, Noguchi T,etal.Peripheral RAGE(receptor for advanced glycation endproducts)-ligands in normal pregnancy and preeclampsia: novel markers of inflammatory response[J].J Reprod Immunol,2012,93(2):69-74.

[专业责任编辑：李雪兰]

Expressions of S100A12 and RAGE gene in peripheral blood and placenta tissue of pregnant women with preeclampsia

QIN Li-yun1, LI Jie1, CHEN Hai-ying2

(1.People’s Hospital of Changle County, Shandong Changle 262400, China;2.The Fourth Affiliated Hospital of China Medical University, Liaoning Shenyang 110032, China)

preeclampsia; peripheral blood; placenta tissue; S100 calcium binding protein A12 (S100 A12); receptor for advanced glycation end products (RAGE)

2015-08-08

辽宁省自然科学基金资助项目(2013021087)

秦丽云(1967-)，女，副主任医师，主要从事妇产科临床工作。

陈海英，副主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.02.011

R714.24

A

1673-5293(2016)02-0180-03