肌酸激酶同工酶CK-MB试剂盒抗干扰性能的评估

刘 沛（河南省镇平县人民医院，河南 南阳 474250）

肌酸激酶同工酶CK-MB试剂盒抗干扰性能的评估

刘 沛
（河南省镇平县人民医院，河南 南阳 474250）

目的 对不同厂家的肌酸激酶同工酶（CK-MB）检测试剂盒抗干扰性能进行评估。方法 采用奥林巴斯AU2700 全自动生化分析仪对不同厂家的肌酸激酶同工酶检测试剂盒进行抗干扰性能比较。结果 各厂家试剂对胆红素、血红蛋白、维生素C、乳糜的抗干扰能力差别不大，另外对于癌症患者等样本检测结果中出现CKMB大于CK的情况均类似；然而，仅美康试剂对于临床中肝素血浆样本的检测正常，未出现结果为负值的情况。结论 各厂家的试剂抗干扰性能普遍一致，对于出现CKMB大于CK的现象是由方法学本身的缺陷所致；另外，对于检测肝素血浆样本中出现负值现象，可能与各厂家的试剂配方有关。

肌酸激酶同工酶；抗干扰；性能评估

肌酸激酶是一种与细胞内能量转运、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶，其主要功能在于催化磷酸根的转运，在三磷酸腺苷（ATP）的参与下，催化肌酸磷酸化，从而形成磷酸肌酸（CP）和二磷酸腺苷（ADP）。作为临床诊断心肌损伤的常规指标，因此必须重视其检测结果的正确性。然而，由于临床检测过程中发现该试剂检测结果常出现异常现象。为此，我们按照美国临床和实验室标准协会（CLSI）指南文件要求对5个不同厂家CKMB试剂的抗干扰性能进行了比对评估，报道如下。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1标本收集：收集同一人日常进行CKMB检测的新鲜、无溶血、黄疸、乳糜血清标本及其肝素血浆标本（同时采集）共200份，收集确诊为癌症患者的血清标本40份，储存于4 ℃冰箱。

1.1.2试剂：购自瑞士Roche公司CKMB试剂（批号：688815-01）、爱尔兰欧迪诊断公司CKMB试剂（批号：P5671）、北京九强公司CKMB试剂（批号：13-07020P）、利德曼公司CKMB试剂（批号：301241L）、宁波美康公司CKMB试剂（批号：20140108）、宁波美康公司CK试剂（批号：20140124）。

1.1.3仪器：奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪。

1.2检测原理：CK由M和B两个亚单位组成三种不同的二聚体，分别为CK-BB、CK-MB和CK-MM。该试剂盒采用免疫抑制法测定，通过利用抗人M亚单位的抗体，抑制M亚单位，然后测定剩余的BB亚单位活性，乘2即得CK-MB活力。

1.3方法

1.3.1测定参数：按照各厂家试剂说明书要求设置检测参数。

1.3.2常规干扰检测：试剂的抗干扰性能按CLSI-7A［1］中的方法进行试验评价：分别向高浓度、低浓度混合血清中分别加入病理最高浓度的干扰物质（胆红素、人血红蛋白、维生素C、乳糜）进行检测。

1.3.3肝素血浆样本干扰的检测：选取100个体检正常人的肝素血浆样本和同时采集的血清样本，用5个厂家的试剂进行检测比较。另外，将检测结果为负值的肝素血浆样本对应的血清样本中挑出，加入常规浓度的肝素进行模拟干扰，并对模拟样本进行检测分析。

1.3.4癌症患者样本的检测：选取40个已确诊为癌症患者的血清样本与100份体检正常的血清样本，用5个厂家的CKMB试剂及宁波美康公司的CK试剂进行检测。

2　结 果

2.1常规干扰检测结果：将高、低浓度血清混合得中浓度血清，将该血清样本分成若干份，分别加入最高病理浓度的干扰物质，测定加入干扰物质前后CKMB值，当结果相对偏差超过10%时作为有明显干扰的评判标准。检测结果见表1，当添加胆红素（288 mg/L）时，仅欧迪试剂受胆红素负干扰，其他抗干扰能力各厂家均在10%的偏差以内。当添加人血红蛋白（5 g/L）时，各厂家试剂均呈正干扰。而对于维生素C（30 mg/L）、乳糜（1450浊度），各厂家均不受干扰。

表1　各厂家CKMB常规干扰检测结果

2.2肝素血浆样本检测结果：通过对100个体检正常人的肝素血浆样本和同时采集的血清样本用以上5个厂家的试剂进行检测结果发现，仅有宁波美康生物的CKMB试剂在检测肝素血浆样本时未出现负值检测结果，其余4家试剂均出现部分肝素血浆样本结果为负值（表2）。同时，将检测结果为负值的肝素血浆样本对应的血清样本中挑出，加入常规浓度的肝素进行模拟干扰检测结果发现，5个厂家的试剂均未出现负值，检测结果与未加入肝素前的血清样本检测结果一致。

表2　各厂家CKMB试剂对血清、肝素血浆样本检测结果异常值统计

2.3癌症患者样本的检测结果：在对40份已确诊为癌症患者的血清样本与100份体检正常的血清样本进行检测比较中，同时利用5个厂家的CKMB试剂及宁波美康公司的CK试剂进行样本检测。检测结果显示，在40份癌症患者中，5个厂家的试剂均存在超过一半的样本CKMB结果大于CK的现象，而在100份体检正常的血清样本中，未发现有CKMB检测结果大约CK的现象（表3）。

表3　各厂家CKMB试剂对癌症、正常样本检测结果统计

3　讨 论

肌酸激酶同工酶CK-MB作为诊断急性心肌梗死或心肌坏死的特异性指标，已经得到临床检验的广泛认可与应用，因此，CKMB试剂结果对于临床诊断的准确性保证尤为重要。然而在临床检验中，常遇到在检测肝素血浆样本时出现负值检测结果的现象，通过本研究的实验结果显示，肝素血浆样本对于检测结果的影响不是由于肝素造成的。鉴于血浆与血清的成分存在差异，可初步推断是由于血浆中的某些蛋白成分造成了对检测的干扰，从而使得检测结果出现负值。而去除这种干扰可通过优化试剂配方达到抗干扰的效果，在本研究中所选用的5个厂家试剂中，宁波美康的CKMB试剂效果在检测肝素血浆样本中的抗干扰效果最佳。

同时，在临床检验过程中，常出现血清中CK-MB活性假阳性升高，甚至大于总CK活性的现象，也给临床诊断增加了难度。然而，造成此类异常检测结果主要还是由免疫抑制法的局限性所导致的。因为基于免疫抑制法的检测原理，当血清样本中CK含量很高，而试剂中抗M亚基的抗体量相对不足时，M亚基活性没有得到完全抑制，因而造成CK-MB检测结果假阳性升高［1］。同时，由于免疫抑制法是基于完全忽略了血清中CK-BB的活性，因此，当血清中CK-BB含量增加时，也会导致CK-MB检测结果异常［1-2］。此外，当样本中存在巨CK分子时，由于抗M亚基的抗体无法抑制巨CK分子中M亚基或B亚基的活性，同样会使CK-MB检测结果的假阳性升高。正是由于大部分癌症患者体内存在巨CK分子，导致了其CKMB大于CK的原因［3-4］。另外，当样本存在溶血现象时，红细胞和血小板中大量存在的腺苷酸激酶也可影响CK-MB的检测结果，造成假阳性偏高。

［1］ 王爱华，蒋永康，刘靖，等.高活力CK不稀释可致CK-MB假性增高［J］.中国中医药现代远程教育，2009，7（1）:45.

［2］ 李小冬，吴杰，许绍辉.血清中巨CK1、巨CK2和CK-BB的临床意义［J］.中国实验诊断学，1998，2（1）:46-47.

［3］ 刘群，王敏，杨玉萍，等.非心源性疾病患者MB型肌酸激酶活性假性升高原因分析［J］.蚌埠医学院学报，2010，35（12）:1296-1298.

［4］ 王英春，邱广斌.血清巨CK_2检测在肿瘤诊断中的意义探讨［C］.第十届全军检验医学学术会议，2005.

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1671-8194（2016）22-0166-02