超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱检测生鲜肉中四环素类抗生素残留

赵 飞，高广慧

(辽宁省食品检验检测院，辽宁 沈阳 110015)

分析与测试

超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱检测生鲜肉中四环素类抗生素残留

赵 飞，高广慧

(辽宁省食品检验检测院，辽宁 沈阳 110015)

建立了超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱(UPLC-MS/MS)检测生鲜肉中四环素类抗生素残留的分析方法。方法采用C18色谱柱(50 mm×2.1 mm，1.7μm)分离，柱温30 ℃，样品室温度10 ℃。流动相由A相(乙腈)和B相(0.1%甲酸溶液)组成，流速为0.4 mL/min，采用梯度洗脱。在ESI正离子模式下，采用多反应离子监测模式进行测定，可以在5 min内完成检测。四种四环素类抗生素土霉素、金霉素、四环素和强力霉素均在10～200 μg/mL范围内有良好的线性关系，相关系数大于0.995。样品最低检出限为50 μg/kg，回收率在80%～89%之间，相对标准偏差为2.5%～6.3%。该方法准确度高，灵敏度好，适用于生鲜肉中四环素类抗生素的检测。

超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱；四环素类抗生素；生鲜肉

四环素类抗生素是一类广谱抗生素，主要包括金霉素、土霉素、四环素及强力霉素等。四环素类抗生素可以选择性地与细菌核糖体30S亚基结合，阻止氨基酰-tRNA在其上的联结，而起到抑制肽链的增长及细菌蛋白质的合成。四环素类抗生素被广泛用于养殖业中多种细菌及衣原体、支原体等所致感染的治疗中。但若超量使用，会造成药物残留，人类食用后可能产生消化道反应、肝损害、肾损害等不良反应，因此国际及我国均对该类抗生素残留量有严格的限制。本文采用UPLC-MS/MS检测生鲜肉中四环素类抗生素残留，通过优化生鲜肉样品的前处理方法、色谱条件和质谱条件，建立了UPLC-MS/MS检测生鲜肉中四环素类抗生素残留的检测方法，本方法可为生鲜肉中四环素类抗生素残留的定性定量分析提供高效高灵敏度的检测方法。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

WATERS TQD超高效液相色谱-串联四级杆质谱联用仪(美国沃特世公司)； 涡旋混合器(德国IKA)；氮吹浓缩仪(上海屹尧仪器科技发展有限公司)；均质器(IKA)。标准品：土霉素、金霉素、四环素和强力霉素标准物质：纯度不小于95%。

甲醇(色谱纯，美国FISHER公司)，乙腈(色谱纯，美国FISHER公司)，正己烷(色谱纯，美国FISHER公司)，高氯酸(分析纯，上海信裕生物科技有限公司)，实验用水为一级水。

1.2 标准溶液的配制

分别精密称取适量土霉素、金霉素、四环素和强力霉素标准物质，以甲醇为溶剂配制质量浓度为1.0 mg/mL的标准溶液，置于棕色容器中，于-18℃冰箱中保存。

1.3 样品前处理

1.3.1 样品准备

采用四分法将待测样品进行切割，并加以粉碎并混合均匀。

1.3.2 提取

准确称取混合均匀的样品5.0 g(精确至0.01 g)于50 mL带有螺旋盖的离心管中，精密加入25 mL甲醇，用均质器均质1 min，5000 r/min离心15 min，将上清液转移至另一离心管中，加入25 mL正己烷，涡旋1 min，待静置分层。

1.3.3 浓缩

精密移取下层20 mL于另一离心管中，45℃下氮气流吹至近干。

1.3.4 净化和复溶

向离心管中精密加入1 mL 5 %高氯酸溶液，涡旋1 min，10000 r/min离心10 min，上清液待测。

1.4 UPLC色谱条件

Waters超高效液相色谱柱：ACQUITY UPLC BEH 1.7 μ m 2.1×50 mm；流动相：乙腈(A)，0.1 %甲酸水溶液(B)，梯度洗脱程序见表1；柱温：30 ℃；样品室温度：10 ℃；进样体积：5 μL；流速：0.4 mL/min。

表1 梯度洗脱程序

1.5 MS/MS质谱条件

离子化方式：电喷雾离子化；扫描方式：负离子模式；监测方式：多反应离子监测；毛细管电压：2.5 kV；离子源温度：150 ℃；脱溶剂气温度：500 ℃；脱溶剂气流量：800 L/h；锥孔反吹气流量：50 L/h；质量条件参数见表2。

表2 MRM分析的质谱参数

2 结果与讨论

2.1 标准曲线

0.2 mg/mL的四中四环素类抗生素标准溶液的色谱图如图1所示。

图1 四环素类抗生素的MRM色谱图

在设定的条件下，将系列标准混合溶液依次进样检测，得到四种四环素类抗生素的标准曲线如图2所示。

图2 标准曲线

金霉素、土霉素、四环素和强力霉素在10-200μg/mL范围内均成良好线性关系，相关系数均大于0.998。

2.2 方法的检出限

以产生3倍信噪比时的样品中四种四环素类抗生素的浓度为样品检出限，得到本方法的样品检出限为50μg/kg。

2.3 方法的精密度和准确度试验

称取空白样品18份，分别加入一定浓度的标准溶液，按样品前处理方法进行处理，并依次进样测试，分别计算回收率和精密度，得出回收率在80%～95%之间，RSD小于5.0%，测定结果见表3。

表3 方法的精密度和准确度试验(n=6)

3 小结

本文采用超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱法检测生鲜肉中四种四环素类抗生素残留具有以下优势：超高效液相色谱具有高效高灵敏度的特点，完成一次检测仅需5 min；该法样品的前处理操作简便快速，适用于大批量样品的检测；串联四级杆检测具有选择性更好，抗干扰能力强。综上，本文研究的超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱法检测生鲜肉中四环素类抗生素残留方法具有准确、快速、高灵敏优势。

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(本文文献格式：赵 飞，高广慧.超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱检测生鲜肉中四环素类抗生素残留[J].山东化工，2016，45(14)：48-50.)

Determination of Antibiotics Residues in Fresh Meat by Ultra Performance Liquid Chromagraphy-tandem Mass Spectrometry

ZhaoFei,GaoGuanghui

(Liaoning Tnstitute for Food Inspection and Testing,Shengyang 110015,China)

An ultra performance liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry( UPLC-ESI-MS/MS) method for the determination of Antibiotics Residues in fresh meat was developed. Methods C18 chromatographic column (50mm × 2.1mm, 1.7 μ m), the solvent system was composed of mobile phase A (Acetonitrile), and mobile phase B (water with 0.1% methanoic acid ). The flow rate was 0.4 mL/min and gradient elution, and the temperature is held constant at 30℃ within a thermostated column. Multiple reaction monitoring (MRM)in ESI positive mode was used for quantitation. The Antibiotics Residues was successfully detected within 5 min. Antibiotics Residues have good linear relationship in the range of 0.5 μg /L -8 μg /L with the correlation coefficient larger than 0.995. The detection limit was 50 μg /kg, and the recovery is between 80%- 89% with the relative standard deviation between 2.5%～6.3%. An accurate and sensitivity method was developed in this study. The established method has been successfully applied to the determination of antibiotics residues in fresh meat.

UPLC -MS/MS; antibiotics residues; fresh meat

2016-05-05

赵 飞(1986—)，辽宁抚顺人，硕士，工程师，主要从事食品、保健食品和药品的理化项目检测方法研究与开发。

O657.72;TS252.7

A

1008-021X(2016)14-0048-03