长沙市食品从业人员致泻大肠埃希菌实时荧光多重PCR检测结果分析

文　岚，朱彩明，曹可珂，黄非凡，田　斌

(长沙市疾病预防控制中心　410001)



长沙市食品从业人员致泻大肠埃希菌实时荧光多重PCR检测结果分析

文岚，朱彩明，曹可珂，黄非凡，田斌△

(长沙市疾病预防控制中心410001)

目的了解长沙市食品从业人员致泻大肠埃希菌感染、分布及毒力基因携带情况。方法抽取长沙市9个单位258例食品从业人员为研究对象，采用实时荧光多重聚合酶链反应(PCR)检测致泻大肠埃希菌。结果致泻大肠埃希菌感染率为15.5%(40/258)，其中肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)占10.9%(28/258)，肠致病性大肠埃希菌(EPEC)占3.1%(8/258)，肠出血性大肠埃希菌(EHEC)占1.6%(4/258)，未检出肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)和肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)。28株EAEC携带uidA基因26株，aggR+pic基因13株，astA基因27株，携带率分别为92.9%、46.4%、96.4%；8株EPEC全部携带eae和uidA基因；4株EHEC中3株携带eae基因，且都携带stx1+stx2基因。结论建立持续监测致泻大肠埃希菌的机制和深入研究其分子流行病学理论，除了为监管部门制订和评价公共卫生措施提供基础数据，对评价食品安全状况，有效控制传染源、保护人民群众健康具有重要意义。

致泻大肠埃希菌;食品从业人员;实时荧光多重PCR;长沙

大肠埃希菌(EC)是肠道中较为重要的正常菌群，能为宿主提供一些具有营养作用的合成代谢物质[1]。一些血清型的大肠埃希菌获得了致病能力，可引起肠道内感染，故称为致泻大肠埃希菌[2](DEC)。致泻大肠埃希菌是重要的食品安全危害因素，受到消费者和食品加工企业的广泛关注。

致泻大肠埃希菌引起的腹泻是全球许多国家重要的公共卫生问题[3]。通常分为6个群：肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)、肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)和扩散黏附大肠埃希菌(DAEC)等。搜索万方、维普和中国知网等数据库发现关于长沙市致泻大肠埃希菌的报道较少，关于长沙市食品从业人员致泻大肠埃希菌的文献更为鲜见。为了解长沙市食品从业人员致泻大肠埃希菌感染、分布及毒力基因携带情况，本研究采用实时荧光多重聚合酶链反应(PCR)检测食品从业人员肛门拭子，分离培养标本，并对结果进行分析。

1　资料与方法

1.1一般资料用整体抽样的方法于2015年5～10月抽取长沙市9个单位食品从业人员为研究对象，共258例。其中供职卫生等级为A级餐饮单位的从业人员203例，占78.7%，其余55例供职于卫生等级为B级的餐饮单位。工作单位性质为大学食堂、大型餐馆和中型餐馆的分别为55、186例和17例，分别占调查人数的21.3%、72.1%和6.6%。从业人员的工种涉及厨师、服务员、切菜、切配菜工、洗菜工、蒸饭及其他。年龄16～60岁，平均(35.23±12.06)岁；工龄20 d至35年，平均(7.73±8.26)年。性别、文化程度和民族信息见表1。

1.2试剂与仪器荧光多重PCR检测采用北京卓诚惠生生物科技有限公司生产的5种致泻性大肠埃希菌实时荧光多重PCR检测试剂盒(适用Roche 480Ⅱ)。仪器为Roche 480Ⅱ。

1.3方法每例研究对象采集1份肛门拭子于卡-布(Cary-Blair)运送培养基内，至实验室后立即接种于1块麦康凯(MAC)琼脂平板，(36±1)℃培养24 h，挑取5个大肠埃希菌可疑菌落(粉红色或红色，光滑、不透明、突起、湿润)分别接种营养琼脂，置于(36±1)℃培养24 h,刮取营养琼脂平板上的新鲜培养物，进行实时荧光多重PCR检测。

表1　　研究对象一般信息

1.4统计学处理数据使用SPSS 18.0统计软件分析。计数资料采用数量和百分比描述，行列表的统计采用Fisher精确检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

2.1实时荧光多重PCR检测结果研究对象258例中检出致泻大肠埃希菌40例，感染率为15.5%(40/258)。其中EAEC 28例(10.9%，28/258)，EPEC 8例(3.1%，8/258)，EHEC 4例(1.6%，4/258)，未检出EIEC和ETEC。未发现同一研究对象检出一种以上致泻大肠埃希菌的现象，40例致泻大肠埃希菌中构成比最高的是EAEC，占70%(28/40)，EPEC和EHEC分别占20%(8/40)和20%(4/40)。致泻大肠埃希菌阳性结果在不同卫生等级、单位性质和工种中的分布见表2和表3。

另外，统计结果还显示致泻大肠埃希菌阳性结果在不同性别间的差异无统计学意义，Fisher精确检验P=0.754(95%CI:0.745～0.762)。致泻大肠埃希菌阳性结果各年龄均有，从17～55岁，无聚集倾向，Fisher精确检验P=0.956(95%CI:0.952～0.960)；与工龄长短亦无明显相关，工龄跨度从1个月到26年，也无聚集性倾向，Fisher精确检验P=0.236(95%CI:0.228～245)。

表2　　不同卫生等级和单位性质研究对象实时荧光多重PCR检测结果[n(%)]

注：1.卫生等级为A、B两组检测结果经Fisher精确检验P=0.056(95%CI:0.051～0.060);2.大学食堂、大型餐馆和中型餐馆检测结果经Fisher精确检验P=0.064(95%CI:0.059～0.068)。

表3　　不同工种研究对象实时荧光多重PCR检测结果[n(%)]

注：不同工种检测结果经Fisher精确检验P=0.455(95%CI:0.445～0.465)。

2.240株致泻大肠埃希菌毒力基因携带情况28株EAEC携带uidA基因26株，aggR+pic基因13株，astA27株，携带率分别为92.9%、46.4%、96.4%；8株EPEC全部携带eae和uidA基因；4株EHEC中3株携带eae基因，且都携带stx1+stx2基因。见表4。

表4　　40株致泻大肠埃希菌毒力基因携带情况(n)

注：+表示阳性，-表示阴性。

3　讨　　论

致泻大肠埃希菌是许多国家和地区细菌性腹泻的常见病原菌，占腹泻病原菌的40.3%左右[4]，监测中发现急性腹泻标本中致泻大肠埃希菌的检出率约为7.19%[5]，也有报道成人腹泻标本检出率为8.24%[6]，并且发现小于1岁的儿童中占有较大比重。致泻大肠埃希菌在细菌性食物中毒中扮演重要角色[7-9]，因此对致泻大肠埃希菌监测是非常重要的工作。

本文结果显示长沙市食品从业人员致泻大肠埃希菌阳性检出率为15.5%，种群包括EAEC、EPEC和EHEC，以EAEC为主，EPEC和EHEC次之，未发现EIEC和ETEC。邓艳华[10]报道，采用分子生物学的方法监测食品从业人员致泻大肠埃希菌的感染率为6.49%，检出了EIEC和EPEC，且以EIEC为主。陈冲等[5]报道结果显示EPEC和EAEC为主，EPEC感染率高于EAEC。与上述研究相比较长沙市致泻大肠埃希菌感染率和种群分布都不同。

研究检测出的致泻大肠埃希菌在单位性质、卫生等级和不同工种的分布差异无统计学意义(P>0.05)。另外年龄和工龄因素对食品从业人员致泻大肠埃希菌感染亦无影响。这与其他研究人员的研究结果基本一致[10-12]，这可能与调查人群基本属于机体免疫力较强的中年和壮年人群有关。

致泻大肠埃希菌的致病性和分类与其质粒携带的毒力基因的转移和溶原性噬菌体的序列整合密切相关。本研究检测出的阳性菌株所携带的毒力基因情况如下：28株EAEC携带uidA基因26株，aggR+pic基因13株，astA基因27株，携带率分别为92.9%、46.4%、96.4%；8株EPEC全部携带eae和uidA基因；4株EHEC中3株携带eae基因，且都携带stx1+stx2基因。说明长沙市食品从业人员所感染致泻大肠埃希菌毒力基因中uidA、astA、aggR+pic较为常见，eae和stx1+stx2亦有发现。

因此，建立持续监测致泻大肠埃希菌的机制和深入研究其分子流行病学理论，除了为监管部门制订和评价公共卫生措施提供基础数据，对评价食品安全状况，有效控制传染源、保护人民群众健康也具有重要意义。

[1]Hazen TH,Sahl JW,Redman JC,et al.Draft genome sequences of the diarrheagenic Escherichia coli collection[J].J Bacteriol,2012,194(11):3026-3027.

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[5]陈冲，夏胜利，赵嘉咏，等．2010～2012年河南省致泻大肠埃希菌监测[J]．预防医学情报杂志，2014，30(11)：964-968．

[6]杨劲松，李玉燕，廖慧，等．2010～2012年福建省致泻性大肠杆菌监测结果分析[J]．预防医学论坛，2014,20(3)：161-162．

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Analysis on detection results of diarrheogenic Escherichia coli among food practitioners in Changsha City by real time fluorescence multiple PCR

WENLan,ZHUCaiming,CAOKeke,HUANGFeifan,TIANBin△

(ChangshaMunicipalCenterforDiseaseControlandPrevention,Changsha,Hunan410001,China)

ObjectiveTo investigate the infection and distribution situations of diarrheogenic Escherichia coli among food practitioners in Changsha City and to understand the carrying status of its virulence genes.MethodsTotally 258 food practitioners from 9 units of Changsha City were extracted as the research subjects.Diarrheogenic Escherichia coli was detected by adopting the real time fluorescence multiple PCR.ResultsThe infection rate of diarrheogenic Escherichia coli was 15.5%(40/258),in which EAEC accounted for 10.9% (28/258),EPEC for 3.1%(8/258) and EHEC for 1.6%(4/258) respectively,EIEC and ETEC were not found.Among 28 strains of EAEC,26 strains carried uidA gene,13 strains carried aggR+pic gene and 27 strains carried astA gene,the carrying rates were 92.9%,46.4% and 96.4% respectively;eight strains of EPEC all carried eae and uidA genes;among 4 strains of EHEC,3 strains carried eae gene,moreover all 4 strains carried stx1+stx2 gene.ConclusionEstablishing a mechanism for continuously monitoring diarrheogenic Escherichia coli and deeply studying its molecular epidemiologic theory not only provide the essential data for the supervisory departments formulating and evaluating the public health measures,but also has an important significance for evaluating the food safety status,which can effectively control infectious source and protect the people′s health.

diarrheogenic Escherichia coli;food practitioner;real time fluorescence multiplex PCR;Changsha

文岚，男，副主任技师，主要从事病原微生物研究工作。△

，E-mail:t.b2002@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.021

A

1673-4130(2016)16-2260-03

2016-01-20

2016-06-07)