枸杞炭疽病防治药剂筛选

刘永刚,　李佳佳,　李昭煜,　申培增,　张海英,　张新瑞*

(1. 甘肃省农业科学院植物保护研究所, 兰州　730070; 2.甘肃省白银市农技中心, 白银　730900)



枸杞炭疽病防治药剂筛选

刘永刚1,李佳佳1,李昭煜1,申培增2,张海英1,张新瑞1*

(1. 甘肃省农业科学院植物保护研究所, 兰州730070; 2.甘肃省白银市农技中心, 白银730900)

本试验分别采用抑菌圈法和孢子萌发法测定了枸杞炭疽病菌对19种药剂的敏感性以及各种药剂对孢子萌发的抑制作用。对筛选出的10种药剂进行田间药效试验,结果表明:430 g/L戊唑醇SC 3 000倍液、60%唑醚·代森联WG 2 000倍液、450 g/L咪鲜胺EW 1 200倍液、40%氟硅唑EC 6 000倍液对枸杞炭疽病7 d的治疗效果和预防效果均在70%以上。

枸杞;胶孢炭疽菌;杀菌剂;毒力;田间药效

枸杞炭疽病又名枸杞黑果病,是由胶孢炭疽菌[Colletotrichumgloeosporioides(Penz.)Sacc.]引起的枸杞生产上的一种常见病害[1-2]。枸杞炭疽病菌主要危害枸杞青果,在枸杞产区造成毁灭性危害。当前化学防治仍然是控制该病害的主要手段,有关杀菌剂对胶孢炭疽菌毒力测定的研究报道较多[3-8],但胶孢炭疽菌可在470多属寄主植物上引起炭疽病,且其遗传多样性丰富,变异类型多;有关杀菌剂对枸杞炭疽病防治的研究虽已有报道[9-12],但筛选的药剂种类有限,且多为室内的毒力测定结果。本试验针对枸杞炭疽病菌选择了19种药剂,室内测定各种药剂对菌丝生长及孢子萌发的抑制作用,在室内试验的基础上筛选出了10种药剂进行田间药效试验,并设计了先接种病原菌后喷药和先喷药后接种病原菌两个处理。以期筛选出对枸杞炭疽病高效的杀菌剂及其适宜的施用时间。

1　材料与方法

1.1供试菌种

枸杞炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)由甘肃省农业科学院植物保护研究所分离鉴定。

1.2供试药剂

60%唑醚·代森联水分散粒剂(巴斯夫欧洲公司);450 g/L咪鲜胺水乳剂(河北省农药化工有限公司);400 g/L氟硅唑乳油、300 g/L苯甲·丙环唑乳油(永农生物科学有限公司);430 g/L戊唑醇悬浮剂、80%代森锰锌可湿性粉剂、250 g/L苯醚甲环唑乳油、12.5%腈菌唑乳油(华北制药集团爱诺有限公司);50%异菌脲可湿性粉剂(天津市汉邦植物保护剂有限公司); 50%多菌灵可湿性粉剂(尔福农药厂);70%甲基硫菌灵可湿性粉剂、250 g/L嘧菌酯悬浮剂(美国默赛技术公司);3%多抗霉素可湿性粉剂、33.5%喹啉铜悬浮剂(兴农股份有限公司);75%百菌清可湿性粉剂(上海亚泰农资有限公司); 103亿活芽胞/g枯草芽胞杆菌可湿性粉剂、24%井冈霉素水剂、2%嘧啶核苷类抗菌素水剂(武汉科诺生物科技股份有限公司);2%春雷霉素水剂(日本北兴化学工业株式会社)。

1.3药剂对菌丝生长的抑制作用

将供试药剂按推荐浓度设定6个浓度梯度,采用滤纸片法[10]。将病原菌接种到PDA培养基上,置于25℃、连续光照条件下培养10 d左右,挑取橘红色的分生孢子团用无菌水稀释,制成10倍镜下每视野50～60个孢子的悬浮液。

培养皿中加入500 μL配好的孢子悬浮液,然后将冷却到45℃左右的PDA培养基倒入培养皿内,与孢子悬浮液充分混匀,制备含菌培养基,待冷却后每个培养皿放置1枚浸有不同浓度药液的直径为6 mm的滤纸片,每个处理重复3次,置于培养箱中25℃培养,以浸有无菌水的滤纸片为对照,6 d后用十字交叉法测量抑菌圈直径,抑菌圈直径越大表明病菌对该杀菌剂越敏感[13],通过稀释倍数与抑菌圈的大小初步筛选出抑菌较好的药剂。

1.4药剂对孢子萌发的抑制作用

采用孢子萌发法[14],用配好的孢子悬浮液将各药剂稀释成一定的浓度梯度,滴在载玻片上,每处理重复3次,置于25℃恒温箱中保湿培养,24 h后镜检孢子萌发情况,以芽管长度大于孢子最大长度的一半为萌发,每个处理随机镜检100个分生孢子,记载孢子萌发数,计算孢子萌发率,并计算孢子萌发抑制率。

求出每个处理3次重复的平均值,及孢子萌发抑制率的几率值(y)与药剂浓度的对数值(x)之间的毒力回归方程,计算相关系数、EC50,比较供试的10种药剂对孢子的毒力大小。

孢子萌发抑制率(%)=

1.5田间药效试验

田间药效试验在甘肃省靖远县五合乡白茨林村苗圃地进行。根据室内抑菌结果,筛选出10种效果较明显的药剂(表3)。每种药剂设2种不同的稀释倍数,每处理设3个重复,以清水为对照。具体设计如下:

(1) 治疗作用:先接种病原菌后喷药。选择20 cm左右的枝条,对上面的青果(20个左右)进行针刺处理后喷施10 mL左右孢子悬浮液(10倍镜下每视野200个左右),以清水为对照,套上保鲜袋保湿12 h,再喷施10 mL左右各处理药剂。7、10 d后调查发病情况,计算病情指数及防效。

(2) 预防作用:先喷药后接种病原菌。选择20 cm左右的枝条,对上面的青果(20个左右)进行针刺处理,先喷施10 mL左右各处理药剂,12 h后,再喷施10 mL左右孢子悬浮液(10倍镜下每视野200个左右),套上保鲜袋保湿12 h,以清水为对照。7、10 d后调查发病情况,并计算病情指数及防效。

枸杞炭疽病分级标准[15],0级:果实表面伤口愈合,不扩展;1级:果实表面(0～1/8]变黑;2级:果实表面(1/8～1/4]变黑;3级:果实表面(1/4～1/2]变黑;4级:果实表面1/2以上变黑。

防治效果(%)=

2　结果与分析

2.1病原菌对10种药剂的敏感性比较

供试的19种药剂中,有10种药剂对枸杞炭疽病菌有抑制作用(表1),其他药剂无抑菌作用。50%多菌灵WP、40%氟硅唑EC和450 g/L咪鲜胺EW的抑菌圈相对较大,300 g/L苯甲·丙环唑EC、25%苯醚甲环唑EC、430 g/L戊唑醇SC、50%异菌脲WP、70%甲基硫菌灵WP和80%代森锰锌WP的抑菌圈较小,60%唑醚·代森联WG的抑菌圈最小。

2.210种药剂对孢子萌发的抑制作用

将毒力最小的60%唑醚·代森联WG毒力倍数设为1,10种药剂对孢子萌发的抑制作用有较大的差异(表2),其中40%氟硅唑EC的抑制作用最强,EC50为0.061 5 mg/mL,为60%唑醚·代森联WG的10.56倍;其次为430 g/L戊唑醇SC和50%异菌脲WP,EC50分别为0.109 6和0.194 1 mg/mL,为60%唑醚·代森联WG的5.92和3.34倍。

表1　菌丝生长对10种药剂的敏感性1)Table 1　Sensitivity of the mycelia growth of Colletotrichum gloeosporioides to 10 fungicides

1) 表中各数值为3次重复的平均值,不同的小写字母代表在0.05水平具有显著差异。下同。

Data in the table are the mean value of 3 replicates. Different small letters in the same column indicate significant difference at 0.05 level.The same below.

表2　10种杀菌剂对枸杞炭疽病菌孢子萌发的抑制作用Table 2　Toxicity of 10 fungicides to conidia of Colletotrichum gloeosporioides

2.3药剂田间防治试验结果

2.3.1治疗作用试验结果

田间治疗试验结果表明(表3):450 g/L咪鲜胺EW、430 g/L戊唑醇SC以及60%唑醚·代森联WG在两个稀释倍数下7 d均有较好的防效,且防效均在70%以上,10 d防效58%以上,持效期长;70%甲基硫菌灵WP、50%多菌灵WP、80%代森锰锌WP、50%异菌脲WP、25%苯醚甲环唑EC和300 g/L苯甲·丙环唑EC以较小倍数稀释时7 d均有一定的防效,10 d的防效均较差,它们以较大倍数稀释时7 d和10 d的防效均较小;40%氟硅唑EC 6 000倍液在施药7 d和10 d的防效分别为75.38%和53.09%,9 000倍液7 d和10 d的防效均较差。

2.3.2药剂预防作用试验结果

田间预防试验结果表明(表4):430 g/L戊唑醇SC和60%唑醚·代森联WG、450 g/L咪鲜胺EW在两个稀释倍数下的防效均较好,前两者在85%以上,后者在53%以上。50%异菌脲WP、25%苯醚甲环唑EC、300 g/L苯甲·丙环唑EC和70%甲基硫菌灵WP在较小稀释倍数下7 d的防效较好,均在53%以上,在较大稀释倍数下的防效则较差;40%氟硅唑EC 6 000倍液7 d和10 d的防效分别为76.26%和74.55%,9 000倍液的防效则较差;50%多菌灵WP和80%代森锰锌WP两个稀释倍数下的防效均较差,最高仅为28.57%。

表3　治疗试验中10种药剂对枸杞炭疽病的田间防治效果Table 3　Field control efficacy of 10 fungicides to Colletotrichum gloeosporioides in treatment trials

表4　 预防试验中10种药剂对枸杞炭疽病的田间防治效果Table 4　Field control efficacy of 10 fungicides to Colletotrichum gloeosporioides in prevention trials

续表4Table 4(Continued)

药剂Fungicide稀释倍数/倍Dilutionratio7d病情指数Diseaseindex防治效果/%Controlefficacy10d病情指数Diseaseindex防治效果/%Controlefficacy25%苯醚甲环唑EC25%DifenoconazoleEC10000.354658.78cde0.865913.41e20000.672221.22g0.96773.23fg300g/L苯甲·丙环唑EC300g/LDifenoconazole·propiconazoleEC5000.321762.60cd0.872512.75ef10000.598830.39e1.00000.00g70%甲基硫菌灵WP70%Thiophanate-methylWP5000.402353.23cdef0.93166.84fg10000.483343.82d0.93726.28fg50%多菌灵WP50%CarbendazimWP5000.629226.85efg0.93066.94fg10000.679820.97g0.98431.57g80%代森锰锌WP80%MancozebWP5000.614428.57ef0.888911.11efg10000.625027.34ef0.91198.81fCK—0.8602—1 —

3　结论与讨论

本试验筛选出430 g/L戊唑醇SC、60%唑醚·代森联WG、450 g/L咪鲜胺EW、40%氟硅唑EC、50%异菌脲WP、25%苯醚甲环唑EC、300 g/L苯甲·丙环唑EC、70%甲基硫菌灵WP、50%多菌灵WP、80%代森锰锌WP 10种药剂进行田间防治试验,结果显示430 g/L戊唑醇SC、60%唑醚·代森联WG、450 g/L咪鲜胺EW、40%氟硅唑EC 4种药剂对枸杞炭疽病具有非常好的预防和治疗效果。可在枸杞炭疽病防治中选用。本试验筛选出的防效较好的4种药剂中,40%氟硅唑EC的防治效果与张丽荣等[11]报道的防治效果基本一致,430 g/L戊唑醇SC、60%唑醚·代森联WG和450 g/L咪鲜胺EW在以往的枸杞炭疽病化学防治中均未见报道,其中60%唑醚·代森联WG是首次发现对胶孢炭疽菌有较好的抑菌效果。

在整个药剂筛选过程中发现室内药剂筛选结果和田间试验结果并不完全一致,例如50%多菌灵WP对孢子萌发的抑制作用较好,但是田间防治结果却不是很好,而60%唑醚·代森联WG对孢子萌发抑制作用最小,而田间试验1 000倍液7 d的防效均在80%以上,10 d的防效也在70%以上。这说明在药剂筛选过程中需要将室内试验和田间试验相结合。另外,在设计田间试验时,先对青果进行孢子悬浮液接种,以保证发病的一致性;喷施的每种药剂都设计了2个浓度,以期筛选出用量少、效果好的药剂;根据施药的时间设计了治疗和预防两种处理,以期确定最佳的施药时间。在2个浓度中,浓度大的防效相对较好,但是综合考虑到农药残留和防治成本,筛选出了430 g/L戊唑醇SC、60%唑醚·代森联WG、450 g/L咪鲜胺EW、40%氟硅唑EC 4种药剂,建议根据病害发生程度选择药剂的使用浓度,并交替使用不同种类药剂,避免产生抗药性。

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(责任编辑：王音)

Screening of fungicides forColletotrichumgloeosporioidescontrol

Liu Yonggang1,Li Jiajia1,Li Zhaoyu1,Shen Peizeng2,Zhang Haiying1,Zhang Xinrui1

(1. Institute of Plant Protection, Gansu Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou730070, China;2. Baiyin Agricultural Technology Service Center of Gansu Province, Baiyin730900, China)

Sensitivity ofColletotrichumgloeosporioidesto 19 fungicides was tested by inhibition zone method. The inhibition activity of the fungicides on spore germination was also determined. Field trials demonstrated that the control and prevent efficacy of 430 g/L tebuconazole SC (3 000×), 60% pyraclostrobin·metiram WG (2 000×), 450 g/L prochloraz EW (1 200×) and 40% flusilazole EC (6 000×) againstC.gloeosporioides, were all more than 70%.

Chinese wolfberry;Colletotrichumgloeosporioides;fungicide;toxicity;field efficacy

2014-11-18

2015-02-18

甘肃中药产业科技攻关项目(GYC12-03, GYC11-02)

E-mail:zhxinrui@sohu.com

S 482.2

B

10.3969/j.issn.0529-1542.2016.01.043