宫颈高危型HPV分型检测在宫颈癌筛查中的临床意义

果海娜,何江耀,李　良,黄锦叶

(中山大学附属东莞东华医院 病理科，广东 东莞523000)



宫颈高危型HPV分型检测在宫颈癌筛查中的临床意义

果海娜,何江耀,李良,黄锦叶

(中山大学附属东莞东华医院 病理科，广东 东莞523000)

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，仅次于乳腺癌，据流行病学资料研究显示，在发展中国家，女性宫颈癌的发病率较高，占据宫颈癌发病率的80%，宫颈癌的早发现、早诊断、早治疗对降低宫颈癌发病率起到非常关键的作用。目前几乎所有的流行病学和实验室研究数据均显示，HPV感染是子宫颈癌的主要致病因素，尤其是HR-HPV持续感染与子宫颈癌高度相关，本研究通过宫颈脱落细胞HR-HPV分型检测，探讨其在宫颈癌预防与筛查中的临床意义。

1　资料和方法

1.1临床资料

采集2013年8月至2014年12月中山大学附属东莞东华医院妇科门诊患有宫颈糜烂或健康体检中心的体检者宫颈脱落细胞共4169例进行了HR-HPV分型检测，其中318例患者作了宫颈醋酸试验及阴道镜下宫颈活检或由于其他疾病做了宫颈切除手术。患者年龄在18岁-76岁，平均年龄35.1±4.6岁。

1.2方法

1.2.1HPV分型检测采用上海透景生命科技有限公司提供HPV分型流式点阵检测试剂盒(液态芯片技术)，其中高危型19种(HPV16、18、26、31、33、35、39、 45、51、52、53、55、 56、58、59、66、68、82、83)，具体操作步骤按说明书进行。

1.2.2组织学观察318例宫颈标本经10%中性福尔马林固定，常规石蜡切片，HE染色、光镜观察。参照Richard[3-1]宫颈上皮内瘤(cervicalintraepithelialneoplasia,CIN)分级标准，病理诊断为诊断子宫颈病变的“金标准”。

病理诊断标准：将病理诊断≥CINⅡ或≥子宫颈腺上皮内瘤变(CGIN)Ⅱ者视为病理检查阳性，病理诊断≤CINⅠ或≤CGINⅠ者视为病理检查阴性。经有经验的2位病理医生阅片后诊断。

1.3统计学处理

以宫颈组织病理做为金标准，运用2×2行列资料检验方法，评价应用流式荧光杂交技术检测HR-HPV宫颈癌早期诊断的敏感性与特异性。所有数据均使用SAS9.0软件进行统计学分析，根据资料采用χ2检验和Fisher精确概率法进行分析，并设定显著性水平为P<0.05。

2　结果

2.1HR-HPV感染年龄分布

本组病例受检者平均年龄35.1±4.6岁，HR-HPV感染者平均年龄37.9岁，中位年龄37岁，各年龄组HR-HPV感染情况见表1,各年龄组妇女HR-HPV感染率差异有统计学意义(χ2=22.3998，P=0.0002)。因≤20岁组例数偏少,比较感染率意义不大。各年龄段不同型别HR-HPV感染导致宫颈病变的情况见表2。

表1　HR-HPV感染的年龄分布情况

注：与21-30岁组比较，①P=0.0003；②P=0.0106；③P=0.851；与31-40岁组比较，④P=0.357；⑤P=0.014；与41-50岁组比较，⑥P=0.838

2.2HR-HPV感染情况

在接受HPV分型检测的4169例标本中有857 例HR-HPV阳性(包括双重和多重感染病例)，总阳性率20.56%(857/4169)，共检测出19种HR-HPV,各亚型分布及阳性率见表3，HR-HPV感染阳性率前5位的型别是52(5.09%)、16(3.09%)、53(2.21%)、58(2.16%)、39(1.87%)，这5种基因型共占本研究组HR-HPV感染人群的56.4%；HPV18型感染居第9位，阳性率占1.27%。在检测基因型别感染的结果中，存在单纯感染、双重感染和多重感染，各种感染模式见表4，以单纯感染和双重感染所占比例最高，占HR-HPV阳性人群的93.9%。

表2　各年龄组不同型别HR-HPV感染所致宫颈病变情况

*有导致CINⅡ级以上病变的HR-HPV亚型

表3　HR-HPV阳性标本标本型别分布及各型别阳性率

*包括单纯感染、双重感染和多重感染

表4　HR-HPV阳性标本感染模式及其感染率

2.3HR-HPV感染所致宫颈病变情况

318例宫颈组织病理学检查患者HR-HPV阳性265例，阴性53例；与宫颈组织病理学检查结果对照见表5，由表5可见HR-HPV检测对诊断CINII级以上宫颈病变的灵敏度为98.3%(58/59),特异度为20.1%(52/259),阳性预告值为21.9%(58/265),阴性预告值为98.1%(52/53)。由表6可见265例HR-HPV阳性的病例中58例CINII级以上宫颈病变,包括1例宫颈浸润性腺癌,HPV感染前三位亚型是16、52和58型，分别为31、10、4例，占77.6%(45/58)。HPV16亚型与52型导致CINII级以上宫颈病变相比较，差异有统计学意义(χ2=12.209，P=0.0005；HPV16型和58型导致CINII级以上宫颈病变相比较，差异无统计学意义(χ2=3.061，P=0.080)；其中16型导致53.4%(31/58)CINII级以上的病变。还应该引起注意的是，所有宫颈癌的病例均为单一型别感染，HPV45型和26型感染率不高，但其单独感染可以导致宫颈鳞状细胞癌，而且虽然HPV18型感染率亦不高，但1例腺癌的病人此型阳性。

表5　HR-HPV感染与宫颈病理结果对照

表6　宫颈病理结果与HR-HPV各型别感染对照

3　讨论

人类乳头瘤病毒(HPV)近20年已鉴定出120余种基因型，HPV是乳多空病毒科多瘤病毒亚科的一个双链环状DNA病毒，其中约40种HPV可感染生殖系统上皮细胞，被命名为“生殖型”HPV。根据致病力的大小将HPV分为高危型和低危型两大类，近年的研究发现，几乎所有宫颈癌与HR-HPV持续感染有关[2]。

HR-HPV感染主要发生在育龄妇女，本研究发现HR-HPV感染率与年龄相关，各年龄段感染率有显著性差异，其中感染率最高的年龄段在21-30岁，与31-50岁组相比较，差异有统计学意义；但51.7%CINⅡ级以上病变发生在31-40岁，5%-10%的HPV感染在35岁后可转变为持续感染状态[3]应对该年龄阶段的妇女重点采取宫颈癌防控措施。

近年来，大量多中心的研究[4-6]，均发现全球HPVl6为最主要的基因型，其次是18型，其他型别具有地域性差别，如HPV45在非洲相对较多，HPV33在欧洲较多，而HPV58和52在亚洲较多。国内不同地区HR-HPV感染率和型别也不尽相同[7-13]。本研究在4169例标本中检出857 例HR-HPV阳性(包括双重和多重感染病例)，总阳性率20.56%(857/4169)，共检测出19种HR-HPV,HR-HPV感染阳性率前5位的型别是52(5.09%)、16(3.09%)、53(2.21%)、58(2.16%)、39(1.87%)，这5种基因型共占本研究组HR-HPV感染人群的56.4%；HPV18型感染居第9位，阳性率占1.27%，本研究为针对本地区HR-HPV感染研制疫苗提供依据。本组病例通过检测HR-HPV基因型别感染，发现存在单纯感染、双重感染和多重感染，以单纯感染和双重感染所占比例最高，占HR-HPV阳性人群的93.9%，而发生浸润性癌的病人均为单一型别感染，可能双重或多重感染并不能增强致病力。

2012年，美国妇产科医师协会(ACOG)和美国阴道镜和子宫颈病变协会(ASCCP)指南明确指出，HPV16和18型感染者，即使细胞学检查阴性，也应该行阴道镜检查[14]。本组通过研究不同型别感染导致宫颈癌前病变及宫颈癌的致病力，去除年龄因素的影响，发现 16型的感染导致宫颈癌前病变及宫颈癌与其他常见亚型感染相比有显著差异，因此，虽然HPV16型在本组研究中感染率居第二位，但其致病力还是最强的。本组研究HPV18型感染率不高，但1例腺癌的病人此型阳性，提示当HPV18型阳性时要注意是否有腺癌发生。还应该引起注意的是，虽然HPV45型和26型感染率不高，但其单独感染可以导致宫颈鳞状细胞癌，这二种型别是否有强致病力，还需要增加样本量进一步研究。

随着对HPV亚型感染与子宫颈癌及其癌前病变关系的研究不断深入，发现不同亚型HPV的致病能力不同，高危型HPV感染直接威胁女性的生命安全。2007年，国际癌症中心即提出，可以将HPV分型检测作为子宫颈癌初筛的手段之一[15]。本研究显示，HR-HPV分型检测对于宫颈癌前病变及宫颈癌的灵敏度(98.3%)和阴性预告值(98.1%)均很高，其特异度(20.1%)和阳性预告值(21.9%)均较低。分析其原因，从高危型HPV感染到发展为宫颈癌CINII级以上病变尚需要一段时间，本组HPV主要感染人群是21-30岁人群，而发生CINII级以上病变的人群主要在31-40岁的人群，能够说明从感染到致病大约需要10年左右的时间，这与文献报道相一致[16,17]；而且宫颈癌前病变和宫颈癌与同一型别持续感染有关，因此应用敏感性很高，并且可以分型检测的方法检测HR-HPV是否同型别持续感染，是宫颈癌早期筛查的重要手段，对宫颈癌及其癌前病变筛查具有非常重要的临床意义。

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广东省东莞市科技计划项目(201110515046227)

1007-4287(2016)08-1340-04

果海娜(1970-),副主任医师,主要研究方向:女性生殖系统肿瘤和乳腺肿瘤。

2015-06-16)