微小RNA在宫颈癌的早期筛查中的应用及预后价值研究

兰艳丽　权效珍



微小RNA在宫颈癌的早期筛查中的应用及预后价值研究

兰艳丽权效珍

目的研究微小RNA在宫颈癌的早期筛查中的应用及预后价值。方法采用实时定量PCR(定量PCR)测定宫颈癌肿瘤组织中miRNA的表达水平(miR-21，miR-27a，miR-34a，miR-155，miR-196a，miR-203)。结果miR-27a在宫颈上皮内瘤变(CIN2-3)中的表达水平显著高于CIN1(P=0.023)，而在鳞状细胞癌(SCC)中的表达水平高于CIN2-3(P=0.033)。此外，miR-34a在CIN2-3中的表达水平显著低于CIN1(P=0.041)，在SCC中的表达水平低于CIN2-3(P=0.021)。与CIN1比较，CIN2-3的miR-27a表达水平上调(P=0.028)而miR-34a表达水平下调，HPV16阳性与宫颈癌显著相关(CIN2-3/CIN1：P=0.027；SCC/ CIN2-3：P=0.036)。miR-34a的表达水平与吸烟状况和HPV16相关。结论检测miRNA表达水平有助于评估不同宫颈癌变和预测HPV感染结果。

宫颈上皮内瘤；子宫颈癌；微RNA的表达；HPV感染

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:883～885)

基于最新的全世界癌症统计数据，宫颈癌为女性第三大常见癌症，每年新增病例约53万，死亡病例27万。HPV16和HPV 18是众所周知的高致宫颈癌因子[1]。MicroRNAs (miRNAs)是一类分布广泛的小的非编码蛋白质的RNAs，其功能是负调控基因表达。它们调节了多种生物学信号通路，生物信息学数据显示，每个miRNA可以调节数百个靶基因，这也表明miRNAs可能影响所有的信号途径[2]。研究表明miRNAs可以抑制重要的肿瘤相关基因的表达，可能在癌症的诊断和治疗中起重要作用[3]。详细分析miRNA的变化情况，将有助于了解宫颈癌的发生机制。因此，本文重点研究微小RNA在宫颈癌的早期筛查中的应用及预后判断价值。现报告如下。

1　材料与方法

1.1一般资料

98例宫颈癌患者，平均年龄36.17岁(18～65岁)。锥切和子宫切除术获得98例癌组织标本，福尔马林液固定，石蜡包埋(FFPE)，随后进行研究。癌组织经病理诊断为高风险HPV阳性(CIN1，CIN2-3和浸润性宫颈癌)。

1.2标本组织学诊断

轻度不典型增生病变[(CIN 1)n=30]，其通常自发消退；癌前病变[(CIN2)n=10，(CIN3)n=20)]，约20%的人会发展为浸润癌；宫颈鳞癌[(SCC)n=38]。单一HR HPV感染阳性样本(n=65)，多种HR HPV感染阳性样本(n=33)。

1.3RNA提取和微RNA的实时聚合酶链式反应(qPCR)表达分析

Trizol提取总RNA之前，去石蜡(二甲苯，无水酒精)处理。随后进行反转录和定量PCR检测。miRNA的相对表达水平应用2-ΔΔCT方法进行比较。

1.4统计学方法

所有统计数据采用SPSS 21.0统计软件进行分析。Mann-Whitney U检验，非配对t检验，单向方差分析(ANOVA)比较连续变量和分类变量。Logistic回归分析不良病理结果的相关变量(miRNA，社会人口和生活方式因素)。P<0.05认为差异具有统计学意义。

2　结果

高危型HPV的分布，HPV16最多(57.53%)。其次是HPV18和HPV31(10.96%)，最后为HPV56(9.59%)和HPV51，HPV52和HPV58(8.22%)。根据组织学诊断结果，98例样本进行分组，CIN1占30.61%，CIN2-3占30.61%，SCC占38.78%。多种HPV感染阳性患者的平均年龄显著小于单一HPV感染阳性患者[(33.30±7.994)岁和(37.98±10.516)岁，P=0.039)]。CIN1组，多种HPV感染患者和单一HPV感染患者平均年龄和年龄范围相近[单(33.2±8.804)岁，多(33.2±10.207)岁]。miR-27a在宫颈上皮内瘤变(CIN2-3)的表达水平显著高于CIN1(P=0.023)，而在鳞状细胞癌(SCC)中的表达水平高于CIN2-3(P=0.033)，见图1。从CIN1到SCC，miR-155表达水平也有显著增高(P=0.023)。从CIN1到CIN2-3，miR-196a的表达水平增高，但在SCC中显著降低(P=0.016)。此外，miR-34a在CIN2-3中的表达水平显著低于CIN1(P=0.041)，而SCC中的表达水平低于CIN2-3(P=0.021)，见表1，表2。

至于其他因素，分析了吸烟和高危型HPV的影响。HPV16对疾病结果产生显著影响(P=0.004)。从CIN1到CIN2-3，miR-27a和miR-34a均与HPV阳性16存在相关性(P=0.028和P=0.027)。CIN2-3进展到SCC，miR-34a与HPV16显着相关(P=0.036)。吸烟患者比例CIN1为65%，CIN2-3为46.67%。吸烟者和非吸烟者之间的miRNA表达水平，尤其是miR-27a表达与miR-34a表达间具有统计学差异(P=0.036和P=0.029)。

表1　不同分级不典型增生组织中的miRNA表达差异(均值)

表2　不典型增生组织和肿瘤组织中的miRNA表达差异(均值)

图1　miR-27a在不典型增生组织和肿瘤组织中表达水平

3　讨论

现有研究已经证明，miRNA的失调与恶性病变相关。高危型HPV类型的宫颈癌发展的关联性病因在过去的几十年中通过一系列的流行病学和生物学研究已被证明[4]。尽管如此，高危型HPV感染并不必然发展为浸润癌。多种HPV基因型已被发现是健康年轻妇女罹患宫颈癌的危险因素，而涉及HPV16和58共同感染的妇女，宫颈癌发生的危险增加[5]。我们观察到，从低分化到高分化不典型增生的进展过程中，miR-27a和miR-34a与 HPV阳性16相关，这似乎强化了以往的观察结果。

以前的研究使用了不同类型的样品(培养细胞，癌来源的细胞系，人类组织样本，血清)用以研究宫颈癌相关的miRNA表达谱，虽然研究结果多有重叠，但仍有相当数量的变异性[6]。在我们的研究中，我们试图区分miR-21，miR-27a，miR-34a，miR-155，miR-196a，miR-203在宫颈SCC不同阶段的表达差异。miR-27a是一种由P53，E2F和c-Myc调制的致癌miRNA。高危型HPV E6和E7与c-Myc有关，并增强c-Myc的转录活性[7]。我们发现，高危型HPV阳性组织样品中的miR-27a的表达与宫颈癌相关，因此miR-27a可成为一个可靠的生物标志物，预判HR HPV相关宫颈癌的进展。

miR -34a是由p53直接调控的肿瘤抑制因子，而HR HPV E6通过p53通路从而 抑制miR-34a的功能[8]。miR-34家族是p53直接的转录靶标。miR-34的激活可以诱导细胞周期停滞和细胞凋亡，这些都是p53的活性效应。此外，miR-34的缺失会减少p53介导的细胞死亡。上述发现再一次告诉我们：miRNA是肿瘤抑制网络中的核心角色之一，非编码RNA同样是肿瘤发生过程中的关键分子。研究人员发现，异位表达的miR-34可以产生与p53相同的生物学效应，如诱导细胞生长停滞及细胞凋亡，miR-34则是通过减少促增殖基因及抗凋亡基因的表达来发挥上述作用的。Li等[9]已经证明了miR-34a在高危HPV感染组织中的表达显著降低。我们的观察清楚地证实了miR-34a在HPV引起的宫颈癌病过程中充当肿瘤抑制性miRNA。我们也注意到，miR-34a的表达改变与单个或多个HR HPV类型存在关联，因此支持多HPV感染增效理论。

香烟烟雾诱导miRNA表达失调已在大鼠和人类试验中得到证实，但主要集中在支气管气道上皮肺细胞[10]。香烟烟雾(CS)引发miR-34a表达显著失调并导致肺癌发生。在由吸烟导致的肺癌中，烟雾似乎在p53基因中留下了独特的“分子标记”。基于以上观点，我们可以推测CS可能影响miRNA在其他器官中的调节机制，例如宫颈[11]。基于这些发现，我们可以得出结论，miR-34a可能有助于预测HPV感染的结果，并区分不同的宫颈病变。

miR-155的表达与低分化进展到高分化宫颈病变相关，使的miR-155可作为另一个生物标志物，预判HR HPV相关的宫颈癌的发生。虽然我们没有找到一个显著的相关性，但是需要强调一点，miR-155的表达差异与吸烟史有关。功能性miR-155通过形成淋巴样细胞转录，控制适应性免疫中重要的多种生物功能，从而介导的免疫反应。Lao等[12]发现miR-155在宫颈癌组织表达上调，高于相邻的非癌组织。

综上所述，评估miRNA表达水平有助于区分不同宫颈癌变和预测HPV感染结果。

[1]李明，邓芳，张扬，等.应用 Luminex 液相芯片技术检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒基因型〔J〕.安徽医药，2014，18(11)：2083-2086.

[2]敬敏，赵颖海，陈小毅，等.miRNA-146a 在鼻咽炎症和癌症病变组织中的表达及意义〔J〕.山东医药，2013，52(37)：1-3.

[3]郝莉，孙国平.miRNA 作为大肠癌生物标志物的研究进展〔J〕.安徽医药，2013，17(2)：183-185.

[4]韩竞男，鲁昊骋，梁静.DNA 甲基化与癌症〔J〕.中国生物化学与分子生物学报，2012，28(2)：108-114.

[5]杨娟，肖兰，杨继洲.高危型 HPV 负载量与宫颈癌前病变发展的相关性〔J〕.实用癌症杂志，2012，27(6)：656.

[6]万淑琼，张军.miRNA 在 HPV 阳性和阴性宫颈癌组织之间的差异研究〔J〕.海南医学院学报，2013，19(1)：101-103.

[7]Toden S，Okugawa Y，Hur K，et al.Novel evidence for chemopreventive effects of curcumin and boswellic acid through regulation of mir-27a and mir-34a in human colorectal cancer〔J〕.Cancer Res，2014，74(19 Supplement)：4119.

[8]Liu C，Kelnar K，Liu B，et al.The microRNA miR-34a inhibits prostate cancer stem cells and metastasis by directly repressing CD44〔J〕.Nat Med，2011，17(2)：211-215.

[9]Li B，Hu Y，Ye F，et al.Reduced miR-34a expression in normal cervical tissues and cervical lesions with high-risk human papillomavirus infection〔J〕.Int J Gynecol Cancer，2010，20(4)：597-604.

[10]楚毅.香烟提取物刺激对食管鳞状上皮细胞 miRNA 的影响及机制研究〔D〕.中南大学，2012.

[11]Suzuki HI，Yamagata K，Sugimoto K，et al.Modulation of microRNA processing by p53〔J〕.Nature，2009，460(7254)：529-533.

[12]Lao G，Liu P，Wu Q，et al.Mir-155 promotes cervical cancer cell proliferation through suppression of its target gene LKB1〔J〕.Tumour Biol，2014，35(12)：11933-11938.

(编辑：吴小红)

Application and Prognostic Value of Small RNA in Early Screening of Cervical Cancer

LANYanli，QUANXiaozhen.

XiangyangCentralHospitalAffiliatedtoHubeiArtsandSciencesCollege，Xiangyang，441021

ObjectiveTo study the application and prognostic value of small RNA in early screening of cervical cancer.MethodsReal-time quantitative PCR (quantitative PCR) was used to determine the expression levels of miRNA cervical cancer tissues (miR-21，miR-27a，miR-34a，miR-155，miR-196a，miR-203).ResultsmiR-27a expression level in cervical intraepithelial neoplasia (CIN) 2-3 was significantly higher than CIN1(P=0.023)，while the expression levels of squamous cell carcinoma (SCC) was higher than CIN2-3 (P=0.033).In addition，miR-34a expression level in CIN2-3 was significantly lower than CIN1(P=0.041)，and in SCC was lower than CIN2-3 (P=0.021).Compared with CIN1，miR-27a expression of CIN2-3 increased (P=0.028) and miR-34a decreased，HPV 16 positive expression was correlated with CIN(CIN2-3/CIN1：P=0.027；SCC/CIN2-3：P=0.036 ).miR-34a expression level and smoking status and HPV16 were correlated.ConclusionThe detection of miRNA expression level can help evaluate cervical lesions and HPV infection.

Cervical intraepithelial neoplasia(CIN )；Cervical cancer；Expression of micro RNA；HPV infection

441021 湖北文理学院附属襄阳市中心医院

权效珍

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.06.004

R737.33

A

1001-5930(2016)06-0883-03

2015-08-07

2016-02-07)