血管生成抑制蛋白-1对IgA肾病患者预后的影响

姚丽莉　张乾坤　金　烈浙江省丽水市中心医院肾内科，浙江丽水　323000

血管生成抑制蛋白-1对IgA肾病患者预后的影响

姚丽莉张乾坤金烈
浙江省丽水市中心医院肾内科，浙江丽水323000

目的 研究血管生成抑制蛋白-1对IgA肾病患者预后的影响。方法 选择60例IgA肾病患者参与此次前瞻性研究，ELISA法测定血浆血管生成抑制蛋白-1水平，患者定期随访，定义终点事件为终末期肾病（ESRD）或血肌酐（Scr）升高超过100%以上，定义生存时间为患者肾活检至终点事件的时间。结果Kaplan-Meier生存分析显示：血浆血管生成抑制蛋白-1升高者，患者进入终点事件的风险明显高于低水平者（P=0.001）。结论 血管生成抑制蛋白-1是预测IgA肾病患者预后的独立危险因素。

血管生成抑制蛋白-1；IgA肾病；生存分析；终末期肾病

[Abstract]Objective To explore the influence of angiogenesis inhibitor protein-1 on prognosis of IgA nephropathy patients.Methods A total of 60 IgA nephropathy patients were enrolled in the prospective study.The plasma angiogenesis inhibitor protein-1 level was conducted by ELISA.Patients were followed up at regular intervals.The end point event was designed as end-stage renal disease(ESRD)or over 100%enhancement of Scr.The survival time was defined as the time duration from renal biopsy to end point event.Results Kaplan-Meier survival analysis showed that the risk of end point event was significantly higher in patients with increased plasma angiogenesis inhibitor protein-1 level than those with lower level(P=0.001).Conclusion Angiogenesis inhibitor protein-1 is an independent risk factor influencing the prognosis of IgA nephropathy patients.

[Key words]Angiogenesis inhibitor protein-1;IgA nephropathy;Survival analysis;End-stage renal disease

IgA肾病临床及病理改变多种多样，发病后每10年约20%的患者进展到终末期肾病（end-stage renal disease，ESRD），因此寻找早期生物学标记物预测肾功能恶化和避免慢性肾脏病（chroinc kidney disease，CKD）及ESRD进程越来越重要。既往研究显示CKD的发生伴随着肾小球和肾间质毛细血管的增殖和萎缩[1-4]，血管新生（增殖）是指从已有的血管长出新血管的过程，生理和病理状态均可有新生血管形成。血管新生的调节取决于血管生成刺激因子和血管生成抑制因子的平衡，这种平衡出现异常则会导致病理状态的发生而出现疾病。血管生成抑制蛋白-1是迄今为止发现的唯一一个可以被血管内皮细胞生长因子或成纤维细胞生长因子-2诱导的血管生成负反馈抑制因子[5-7]。本研究探讨血管生成抑制蛋白-1对IgA肾病患者预后的影响。现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

选择60例经肾活检病理证实为IgA肾病患者参与此次前瞻性研究，均来源于我院2010年1月~2012 年1月期间门诊及住院患者。入选标准：①年龄≥18岁；②经肾穿刺活检证实为IgA肾病。排除标准：①年龄＜18岁；②有引起继发性IgA肾病的相关疾病如：过敏性紫癜、强直性脊柱炎等。

1.2血浆血管生成抑制蛋白-1活性测定

取患者空腹静脉血，通过ELISA法测定血浆血管生成抑制蛋白-1活性，ELISA试剂盒购于上海生工生化公司，按照试剂盒的操作步骤严格执行。

临床观察测定的指标有性别、年龄、血压等，24 h尿蛋白定量检测用酸沉淀比浊法；肾小球滤过率（eGFR）用MDRD方程计算；血红蛋白的检测用全自动血细胞分析仪（日本西斯美康公司）；总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、血糖的检测用7600A-020全自动生化分析仪（日立公司）。

1.4病理学指标测定

所有患者光镜下行HE、PAS、PASM及Masson三色染色，对肾小球系膜细胞增多、新月体形成、肾小球硬化、肾间质细胞浸润、肾间质纤维化、肾小管萎缩、肾动脉硬化行半定量评分。由两名有5年以上工作经验的肾脏病理医生分别评分，取平均值。

1.5终点事件与生存时间定义

患者随访至少3年，定义终点事件为终末期肾病（ESRD）或血肌酐（Scr）升高超过100%以上，定义生存时间为患者肾活检至终点事件的时间（月）。

1.6统计学处理

统计分析用SPSS16.0软件。所有计量资料以（x±s）表示，计数资料以n（%）表示，血浆血管生成抑制蛋白-1水平分别与临床及病理学指标行直线相关或秩相关分析，根据血浆血管生成抑制蛋白-1水平将患者分成两组，Kaplan-Meier法进行生存分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1患者一般临床特征

“改革走在前列，开放服务大局”，这是习近平总书记对江苏提出的明确要求，也是江苏的应有担当。建功新时代，全省上下当进一步强化共识、凝聚合力、奋力创新、锐意进取，实现建设“强富美高”新江苏的新跨越。□

60例符合标准的患者最终入选此次研究，主要的人口学特征、临床及实验室参数见表1。患者平均年龄（41.13±1.92）岁，其中男性占51.7%。平均eGFR （61.73±10.13）mL/（min·1.73 m2），平均24 h尿蛋白（2.51±0.48）g。

表1　患者一般临床特征（n=60）

2.2血管生成抑制蛋白-1与临床指标的相关性

血管生成抑制蛋白-1与年龄、收缩压、舒张压呈负相关，差异有统计学意义（P＜0.05），但是与肾小球滤过率、24 h尿蛋白定量、血糖、血脂、体重指数等无显著相关性，见表2。

表2　血管生成抑制蛋白-1与IgA肾病患者临床指标的相关性

2.3血管生成抑制蛋白-1与病理学指标的相关性

血管生成抑制蛋白-1与新月体形成呈正相关，差异有统计学意义，但是与肾小球系膜细胞增多、肾小球硬化、肾间质细胞浸润、肾间质纤维化、肾小管萎缩、肾动脉硬化等无显著相关性，见表3。

表3　血浆血管生成抑制蛋白-1与病理学指标的相关性

2.4不同血管生成抑制蛋白-1组肾脏生存分析

根据患者血管生成抑制蛋白-1的测定结果，将60例IgA肾病患者以中位数为界分为血管生成抑制蛋白-1高水平组（≥1000 fmol/mL，n=30）和血管生成抑制蛋白-1低水平组（＜1000 fmol/mL，n=30），Kaplan-Meier法比较两组生存曲线间的差异，结果显示血管生成抑制蛋白-1高水平组的患者肾脏预后较差（P= 0.001）（封三图1）。

3　讨论

IgA肾病是病理学诊断名词，是以IgA为主的免疫球蛋白颗粒状弥漫沉积在肾小球系膜区及毛细血管袢的一系列临床症状及病理改变，是我国维持性血液透析患者的首位原发病，临床及病理改变多种多样，发病后每10年约20%的患者进展到ESRD，因此早期诊断、准确判断患者的预后至关重要。

血管生成抑制蛋白-1是迄今为止发现的唯一一个可以被血管内皮细胞生长因子或成纤维细胞生长因子-2诱导的血管生成负反馈抑制因子，抑制新生血管的形成，而血管再生相关的因素也参与了肾脏病的发生发展[8]。研究发现，在慢性肾脏病进程中血管再生因素平衡被打破，通过干预这些因素可起到潜在的CKD治疗效应[9]。临床有价值的血管形成相关因素如血管内皮细胞生长因子-A、血管内皮细胞生长因子受体-1/2、血管生成素-1/2等已在CKD患者中被证实[10-16]。目前还没有血管生成抑制蛋白-1在IgA肾病患者中的作用研究。

本研究发现血浆血管生成抑制蛋白-1水平与年龄、血压呈负相关，提示血管内皮细胞产生血管生成抑制蛋白-1的功能在老年患者和高血压患者降低，可能是由于随着年龄的增长以及高血压的发生，血管内皮细胞功能紊乱伴随着全身动脉血管硬化，从而造成较低的血管生成抑制蛋白-1水平，而新近的研究也证实血管生成抑制蛋白-1是内皮细胞稳定的重要因子[17]。在研究中，血浆血管生成抑制蛋白-1水平并没有显示出和肾功能及尿蛋白的统计学相关性，可能是因为肾脏并不是血管生成抑制蛋白-1起源的重要脏器。此外，在与病理学指标的相关性分析中，血浆血管生成抑制蛋白-1与新月体形成呈正相关，可能是因为新月体形成是大量新生细胞与血管的聚集，而这些新生的血管产生大量血管生成抑制蛋白-1，与血管生成抑制蛋白-1在肿瘤及视网膜疾病中生成增多有类似的病理机制。同时Kaplan-Meier生存分析表明高水平的血管生成抑制蛋白-1的 IgA肾病患者的肾脏预后较差，可能是因为血管生成抑制蛋白-1合成后由血管内皮细胞分泌，IgA肾病患者特别是发展到CKD阶段以后，常合并高龄、高血压、心血管疾病，而这些因素均有血管内皮细胞功能障碍，而这种内皮细胞功能受损可能提示不良的肾病预后。

与我们目前的研究结果相似，先前的报道已经显示肿瘤患者升高的血管生成抑制蛋白-1表达预示不良的预后[18]。在不同的动物研究模型中，包括肿瘤和糖尿病肾病，给予血管生成抑制蛋白-1拮抗剂可起到治疗效应[19]。更多新近的研究显示血管生成抑制蛋白-1在增强内皮细胞应激阻力方面有重要作用[20]。

总之，我们的研究初步证实了血管生成抑制蛋白-1是预测IgA肾病患者预后的独立危险因素，而其中的机制需更加深入的研究。

[1]Guo M，Ricardo SD，Deane JA，et al．A stereological study of the renal glomerular vasculature in the db/db mouse model of diabetic nephropathy[J]．J Anat，2005，207（6）：813-821．

[2]Kang DH，Hughes J，Mazzali M，et al．Impaired angiogenesis in the remnant kidney model：II．Vascular endothelial growth factor administration reduces renal fibrosis and stabilizes renal function[J]．J Am Soc Nephrol，2001，12（3）：1448-1457．

[3]Watanabe T，Okada Y，Hoshikawa Y，et al．A potent antiangiogenic factor，vasohibin-1，ameliorates experimental bronchiolitis obliterans[J]．Transplant Proc，2012，44（4）：1155-1157．

[4]Miyazaki Y，Kosaka T，Mikami S，et al．The prognostic significance of vasohibin-1 expression in patients with upper urinary tract urothelial carcinoma[J]．Clin Cancer Res，2012，18（6）：4145-4153．

[5]Abe M，Sato Y．cDNA microarray analysis of the gene expression profile of VEGF-activated human umbilical vein endothelial cells[J]．Angiogenesis，2009，4（26）：289-298．

[6]Nasu T，Kinomura M，Tanabe K，et al．Sustained-release prostacyclin analog ONO-1301 ameliorates tubulointerstitial alterations in a mouse obstructive nephropathy model[J]．Am J Physiol Renal Physiol，2012，302（8）：F1616-1629．

[7]Miyashita H，Watanabe T，Hayashi H，et al．Angiogenesis inhibitor vasohibin-1 enhances stress resistance of endothelial cells via induction of SOD2 and SIRT1[J]．PLoS One，2012，7（1）：e46459．

[8]Folkman J．Angiogenesis in cancer，vascular，rheumatoid and other disease[J]．Nat Med，2008，1（4）：27-31．

[9]Kitamoto Y，Tokunaga H，Tomita K．Vascular endothelial growth factor is an essential molecule for mouse kidney development：Glomerulogenesis and nephrogenesis[J]．J Clin Invest，2011，99（5）：2351-2357．

[10]Horio M，Imai E，Yasuda Y，et al．Modification of the CKD epidemiology collaboration（CKD-EPI）equation forJapanese：Accuracy and use for population estimates[J]．Am J Kidney Dis，2013，56（5）：32-38．

[11]Heishi T，Hosaka T，Suzuki Y，et al．Endogenous angiogenesis inhibitor vasohibin1 exhibits broad-spectrum antilymphangiogenic activity and suppresses lymph node metastasis[J]．Am J Pathol，2014，176（8）：1950-1958．

[12]Yoshinaga K，Ito K，Moriya T，et al．Roles of intrinsic angiogenesis inhibitor，vasohibin，in cervical carcinomas[J]．Cancer Sci，102（10）：446-451．

[13]Tamaki K，Sasano H，Maruo Y，et al．Vasohibin-1 as a potential predictor of aggressive behavior of ductal carci noma in situ of the breast[J]．Cancer Sci，2013，101（5）：1051-1058．

[14]Guo Q，Carrero JJ，Yu X，et al．Associations of VEGF and its receptors sVEGFR-1 and-2 with cardiovascular disease and survival in prevalent haemodialysis patients[J]．Nephrol Dial Transplant，2009，24（4）：3468-3473．

[15]Tomino Y．Predictors of prognosis in IgA nephropathy[J]．Kaohsiung J Med Sci，2012，28（10）：517-520．

[16]Goto M，Wakai K，Kawamura T，et al．A scoring system to predict renal outcome in IgA nephropathy：A nation wide 10-year prospective cohort study[J]．Nephrol Dial Transplant，2009，24（6）：306-312．

[17]Futrakul N，Butthep P，Futrakul P．Altered vascular homeostasis in chronic kidney disease[J]．Clin Hemorheol Microcirc，2008，38（6）：201-207．

[18]Wang Q，Tian X，Zhang C．Upregulation of vasohibin-1 expression with angiogenesis and poor prognosis of hepatocellular carcinoma after curative surgery[J]．Med Oncol，2012，29（7）：2727-2736．

[19]Watanabe K，Hasegawa Y，Yamashita H，et al．Vasohibin as an endothelium-derived negative feedback regulator of angiogenesis[J]．J Clin Invest，2013，114（10）：898-907．

[20]Li D，Zhou K，Wang S，et al．Recombinant adenovirus encoding vasohibin prevents tumor angiogenesis and inhibits tumor growth[J]．Cancer Sci，2010，101（4）：448-452．

Influence of angiogenesis inhibitor protein-1 on prognosis of IgA nephropathy patients

YAO LiliZHANG QiankunJIN Lie
Department of Nephrology,Lishui Central Hospital in Zhejiang Province,Lishui323000,China

R692.3

A

1673-9701（2016）12-0004-04

浙江省丽水市科技计划项目（2014ZC007）

2015-07-27）